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磷酸盐检测试剂 MESG
货号 | 21600 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 5 mg | 价格 | 984 | |
Ex (nm) | 330 | Em (nm) | ||
分子量 | 313.34 | 溶剂 | DMSO | |
产品详细介绍 |
简要概述
磷酸盐检测试剂 MESG 是美国AAT Bioquest生产的磷酸盐检测试剂,在无机磷酸盐存在下,MESG通过嘌呤核苷磷酸化酶(EC 2.4.2.1)转化为2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤,吸收波长变为红色。该特征已用于通过分光光度法定量磷酸盐。我们提供方便的MESG的磷酸盐检测试剂盒(#21659)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的磷酸盐检测试剂 MESG 。
产品说明书
操作步骤
1.准备分析试剂:
1.1使用前在室温下解冻所有四种成分。
1.2准备MESG底物(组分B)溶液:添加的DDH的500μL 2 O操作的小瓶MESG底物(组分B )。通过涡旋混合均匀以获得MESG底物溶液。
注意: 250μl足以使一个平板制成单独使用的等分试样并立即储存在-20°C。
1.3准备嘌呤核苷磷酸化酶(成分C):将100μL的DDH的添加2 O操作的小瓶嘌呤核苷磷酸化酶(PNP; 组分C )。通过涡旋混合以获得Purine Nucleoside Phosphorylase Solution。
1.4制备测定溶液:将全部体积的MESG底物溶液(来自步骤1.2)和嘌呤核苷磷酸化酶 溶液(来自步骤1.3)加入到测定缓冲液瓶(组分A)中,充分混合以得到测定溶液。将测定溶液置于冰上。
注1:该测定溶液在冰上稳定至少4小时。
注2:为达到理想的效果,需要紫外线透明板或比色皿。
注3:由于该测定对P i 的高灵敏度,使用无P i的实验室器皿非常重要
2. 准备连续稀释的磷酸盐标准品和/或测试样品:
2.1制备磷酸盐标准品: 将50μL1mMKH 2 PO 4(组分D)加入950μL去离子水或酶反应缓冲液中,得到50μM磷酸盐标准溶液。
2.250μM磷酸盐标准溶液200μL1:2系列稀释,得到25,12.5,6.25,3.125,1.56和0.78μM连续稀释的磷酸盐标准。
2.3根据表1和2,将含磷酸盐的测试样品和/或磷酸盐标准品加入透明的UV透明96孔微孔板中。
表1透明的UV透明96孔板中磷酸盐标准品和测试样品的方案
BL | BL | TS | TS | … |
PS1 | PS1 | … | … | … |
PS2 | PS2 | |||
PS3 | PS3 | |||
PS4 | PS4 | |||
PS5 | PS5 | |||
PS6 | PS6 | |||
PS7 | PS7 |
注意:PS =磷酸盐标准,BL =空白对照,TS =测试样品。
表2每个孔的试剂组成
磷酸盐标准 | 空白 | 样本 |
连续稀释:50ul | 不含磷酸盐的水或缓冲液:50ul | 50ul |
注意:将磷酸盐标准品的连续稀释液(0.1μM至50μM)加入PS1至PS7的孔中。
3.运行PhosphoWorks MESG磷酸盐测定:
3.1添加50μL/孔的测定溶液(来自S对 TEP 1.4) 中到的磷酸盐标准,空白对照和测试样品的孔中。彻底混合试剂。
注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL分析溶液。
3.2在室温下孵育30分钟。用酶标仪或分光光度计在360nm处监测吸光度。
注意:对于需要总体积大于100μL的比色皿测定,在测量吸收之前按比例增加样品和测定试剂的体积。
参考文献
Sacrificial crystal templating of hyaluronic acid-based hydrogels
Authors: Richelle C Thomas, Paul E Chung, Shan P Modi, John G Hardy, Christine E Schmidt
Journal: European Polymer Journal (2016)
Osteogenic cell cultures cannot utilize exogenous sources of synthetic polyphosphate for mineralization
Authors: Marianne B Ariganello, Sidney Omelon, Fabio Variola, Rima M Wazen, Pierre Moffatt, Antonio Nanci
Journal: Journal of cellular biochemistry (2014): 2089–2102