Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光 货号22750-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光

Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光

Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光     货号22750 货号 22750 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2544
Ex (nm) 467 Em (nm) 538
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

高尔基体是大多数真核细胞胞质内囊泡和折叠膜的复合体,参与分泌和细胞内运输。它修饰内质网(ER)中内置的蛋白质和脂质,并准备将其输出到细胞外。它还在脂质在整个细胞中的运输和溶酶体的形成中起着重要作用。该Cell Navigator™NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒提供了一种简便,快速的方法,可以选择性地对活细胞或醛固定细胞中的高尔基染色。将C6 NBD神经酰胺与牛血清白蛋白(C6-NBD-Ceramide-BSA)形成复合物给予细胞。高尔基体通过形成相应的荧光代谢产物而被染色。

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适用仪器


荧光显微镜  
激发: 488nm
发射: 525nm
推荐孔板: 黑色透明
滤波片: FITC滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 根据需要处理细胞
  2. 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液,在室温或37°C下孵育15〜30分钟
  3. 更换染色缓冲液,在室温或37°C下孵育15〜30分钟
  4. 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察
  5. 可选:用4%甲醛固定细胞

 

储备溶液配制

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. C6 NBD神经酰胺储备溶液(100X):
将100 µL DMSO(组分C)加入小瓶C6 NBD神经酰胺(组分A)中并充分混合。注:将未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存。避免冻融循环。

 

工作溶液配制

1. C6 NBD神经酰胺工作液:
将10 µL NBD神经酰胺原液(100X)添加到990 µL染色缓冲液(组分B)中,制成NBD神经酰胺工作液。
可选:将10 µL Hoechst 33342(组分D)添加到1mL NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。

 

操作步骤

  1. 接种并根据需要处理细胞。
  2. 直接在细胞培养基中加入100µL C6 NBD神经酰胺工作溶液。
  3. 在室温或37°C下孵育15〜30分钟。
  4. 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液,并用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)代替。
  5. 在室温或37°C下孵育10〜15分钟。
  6. 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
  7. 从步骤4中除去染色缓冲液,然后向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。 注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。(可选)
  8. 在室温下将平板孵育20至30分钟。 去除固定剂。 用PBS洗涤细胞2-3次,然后用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)替换。(可选)

 

图例

Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光     货号22750

图1. HeLa细胞中NBD神经酰胺高尔基染色的荧光图像。 细胞在37°C下用100 µL C6 NBD神经酰胺工作溶液染色20分钟,然后用Hoechst 33342染色。 高尔基体被认为是部分包围细胞核的强烈荧光线状结构。

 

参考文献

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Authors: M. A. Rodriguez
Journal: Parasitol Res (2018): 3381-3389

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Journal: J Lipid Res (2018): 2116-2125

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Authors: S. B. Mitchell
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An inducible ER-Golgi tether facilitates ceramide transport to alleviate lipotoxicity
Authors: L. K. Liu
Journal: J Cell Biol (2017): 131-147

Ceramide Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Trans Golgi Region at Organelle Membrane Contact Sites
Authors: K. Hanada
Journal: Adv Exp Med Biol (2017): 69-81

Endoplasmic reticulum is the sorting core facility in the Golgi-lacking protozoan Giardia lamblia
Authors: N. Zamponi
Journal: Traffic (2017): 604-621

说明书
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