Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测 货号22842-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测     货号22842 货号 22842 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2544
Ex (nm) 537 Em (nm) 618
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞活力和增殖的工具。有多种参数可用于监测细胞活力和增殖。在正常细胞中,DNA密度根据细胞的生长,分裂,静止执行其正常功能而变化。细胞周期的进程受各种细胞周期调节因子之间复杂的相互作用控制。这些调节剂激活转录因子,该转录因子与DNA结合并开启或关闭导致细胞分裂的蛋白质的产生。这种调节级联中的任何失误都会导致异常细胞增殖,这是许多病理状况(例如肿瘤形成)的基础。活细胞研究的潜在应用是确定细胞DNA含量和细胞周期分布,以检测生长模式的变化,检测凋亡,评估肿瘤细胞的行为和抑制基因的机制。该特定试剂盒旨在使用Nuclear Red CCS1(固定细胞中的细胞周期染色剂)检测细胞周期进程和增殖。染料穿过透化的膜并插入细胞DNA中。试剂盒中提供的RNase降解RNA后,Nuclear Red CCS1的信号强度与DNA含量成正比。可以使用流式细胞仪(FL2通道)检测给定样品中处于G0 / G1,S和G2 / M期的细胞百分比,以及处于凋亡之前的sub-G1期的细胞百分比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 610/20nm滤波片
通道: PE-Texas Red通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106cell/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 用70%乙醇固定细胞
  3. 将0.5 µL 100X Nuclear Red CCS1和5 µL RNase A加入0.5 mL细胞溶液中
  4. 在室温下孵育30-60分钟
  5. 使用带有FL2通道的流式细胞仪分析细胞

 

实验步骤

1.用测试化合物处理细胞,以诱导凋亡或其他细胞周期功能。

2.对于每个样品,用0.5 mL PBS制备细胞,密度为5×105至1×106细胞/ mL。

2.1对于贴壁细胞:将细胞用胰蛋白酶消化,悬浮在10%FBS培养基中,离心(1000 rpm,5分钟),然后将沉淀重悬于PBS中。

2.2对于悬浮细胞:将细胞离心(1000 rpm,5分钟),并将沉淀物悬浮在PBS(1 mL)中。 注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

3.用70%乙醇固定细胞:

3.1将0.5 mL细胞悬液吸移至1.2 mL无水乙醇中(最终浓度约为70%)。

3.2在冰上孵育细胞至少2小时(或在-20°C过夜)。在染色之前,细胞可以在-20°C下保存2年。注意:在用单克隆抗体染色细胞表面抗原后,通常将乙醇用于固定,而在用单克隆抗体染色细胞内抗原后,通常将甲醇用于固定。在此过程中,将固定并分析整个细胞。由于仍然存在整个细胞团,因此通常包括使用RNase来消除任何双链RNA。尽管已经对整个细胞进行了分析,但尝试检测与DNA结合的某些细胞内抗原的尝试可能会失败,因为蛋白质会从透化的细胞中漏出(例如绿色荧光蛋白)。在这些情况下,在酒精固定之前,用PBS中的1%低聚甲醛进行短暂的预固定(在4-6°C下10分钟),将有助于将蛋白质保留在细胞中。

4.用Nuclear Red CCS1染色细胞:

4.1以1000 rpm的速度沉淀细胞5分钟,并用冷PBS至少洗涤一次。

4.2将沉淀物悬浮在0.5 mL测定缓冲液(组分C)中。

4.3加入5 µL 100X Nuclear Red CCS1(组分A)和5 µL 100X RNase A(组分B)。

4.4在室温下孵育细胞30至60分钟。 注意:适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.5可选:将细胞以1000 rpm离心5分钟,然后将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液(组分B)或自备缓冲液中。

4.6使用FL2通道(Ex / Em = 490/620 nm),通过流式细胞仪检测荧光强度。 

 

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说明书
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