Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒 货号13831-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒

Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒

货号 13831 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4488
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测羟基丁酸的试剂盒,当血糖水平下降时,酮体由肝脏产生并在外周用作能量来源。两个主要的酮体是 β-羟基丁酸酯 (Beta-HB) 和乙酰乙酸酯,而丙酮是第三丰富的酮体。正常情况下,这两种主要的酮体在禁食和长时间运动时少量存在于血液中。在患有糖尿病、酒精或水杨酸中毒、激素缺乏、儿童低血糖等急性疾病状态的患者中,血液中会发现大量的酮体。血液中酮体的过度产生和积累(酮症)可导致病理性代谢性酸中毒(酮症酸中毒)。在极端情况下,酮症酸中毒可能是致命的。量化 Beta-HB 的血酮测试方法,血液中的主要酮体(约 75%)已被用于诊断和监测酮症酸中毒的治疗。 Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒提供灵敏的荧光分析,用于测量生物样品中的 Beta-HB 水平。该测定基于 Beta-HB 的酶偶联反应,其中产物 NADH 可以通过荧光 NADH 传感器进行特异性监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪测量。使用此荧光β-羟基丁酸检测试剂盒,我们能够在 100 µL 反应体积中检测低至 1.4 µM 的 Beta-HB。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备β-HB工作溶液(50 µL)
2.添加β-HB标准品或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

 

溶液制备 

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. NAD储备溶液(100X):
将100 µL H2O加入NAD小瓶(组分C)中,制成100X NAD储备溶液。

2.β-HB标准溶液(100 mM):
将1 mL H2O或1X PBS缓冲液添加到小瓶β-HB标准溶液(组分D)中,制成100 mMβ-HB标准溶液。

 

2.标准溶液

β-HB标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 100 mMβ-HB标准储备液,以生成1000 µMβ-HB标准溶液(HB7)。取1000 µMβ-HB标准溶液(HB7),并在PBS中进行1:3系列稀释,以得到系列稀释的β-HB标准溶液(HB6-HB1)。 注意:稀释的β-HB标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶混合物(组分A)中。

3.2 将50 µL NAD储备溶液添加到组分A + B的瓶子中,并充分混合以制成β-HB工作溶液(组分A + B + C)。 注意:此β-HB工作溶液不稳定,请立即使用,并避免直接暴露在光线下。

 

样品操作及实验分析

表1.底部透明的96孔微孔板中β-HB标准品和测试样品的布局。 HB =β-HB标准(HB1-HB7,1至1000 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
HB1 HB1
HB2 HB2
HB3 HB3    
HB4 HB4    
HB5 HB5    
HB6 HB6    
HB7 HB7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
HB1-HB7 50ul 连续稀释(1至1000 µM)
BL 50ul 1X PBS缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,将β-HB标准品(HB),空白对照(BL)和测试样品(TS)制成黑色96孔微孔板。对于384孔板,请使用25 µL 每孔试剂,而不是50 µL。

2.将50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,以使总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µLβ-HB工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm,发射= 590-600 nm(最佳Ex / Em = 540/590 nm,在570 nm截止)下监测荧光的增加。

 

参考文献

A platform for assessing outer segment fate in primary human fetal RPE cultures
Authors: Qitao Zhang, Feriel Presswalla, Kecia Feathers, Xu Cao, Bret A Hughes, David N Zacks, Debra A Thompson, Jason ML Miller
Journal: Experimental eye research (2018)

 

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产品名称 货号
Amplite 比色法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒 Cat#13830

说明书
Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒.pdf