CUBIC 组织透明化试剂

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CUBIC 组织透明化试剂CUBIC                              组织透明化试剂

具有单细胞分辨率的全脑/全身成像

CUBIC                              组织透明化试剂

*数据由Etsuo A Susaki博士和

Hiroki R. Ueda, RIKEN博士提供

  Hiroki R. Ueda博士等人开发了一种简单、高效、可扩展的脑/体透明化方法和成像/计算分析方法,CUBIC(clear, unobstructed brain/body imaging cocktails and computational analysis)。

  CUBIC是一种基于亲水溶液(ScaleCUBIC Solutions)的、具有荧光保护、高性能及无需特殊设备等特点的组织透明化方法。

  它可以利用LSFM技术实现可重复的整个器官和全身的透明化以及快速3D成像。CUBIC还提供3D图像的处理和分析,以提取生物信息。

  所以,CUBIC提供了具有单细胞分辨率和图像信息学的全器官/全身成像平台,使广大用户能够针对细胞和器官层进行多个样品的实验。

◆CUBIC的优点


● 易于使用

● 无需特殊设备

● 支持后续的2D H&E染色

● 高透明度

● 适用于多种器官

● 兼容IF(免疫荧光),FP(荧光蛋白)和其他荧光标记

◆CUBIC的应用


CUBIC                              组织透明化试剂


**一般情况下,可使用比例为7:3的固定溶液1和2(RI~1.49)混合溶液。

CUBIC                              组织透明化试剂

图1.使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠整体器官的透射图像

CUBIC                              组织透明化试剂

图2.使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠2mm切片的透射图像

◆ CUBIC应用于荧光蛋白表达


CUBIC                              组织透明化试剂

CUBIC                              组织透明化试剂

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CUBIC                              组织透明化试剂

图3CAG-EGFP Tg小鼠(8w雄性)的全脑,全心脏和解剖肝脏的LSFM成像

◆CUBIC应用于病理学方法中


  数据来源于S. Nojima.et al. : Scientific Reports ,7,9269 (2017)/已被收录


CUBIC                              组织透明化试剂

图4.使用CUBIC透明化各种人体器官

使用CUBIC的石蜡样品的组织透明化和3D成像


CUBIC                              组织透明化试剂

图5.使用CUBIC的病理标本的组织透明化和3D成像




CUBIC 鱼类透明化案例


数据提供:东京海洋大学 海洋生物资源学院 二见邦彦老师


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图6使用CUBIC的鱼类透明化案例

实验步骤参见参考文献5)

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图7使用CUBIC处理后的鱼类内脏切片案例

-CUBIC处理后,切片5 μm,可用Mayer’s Hematoxylin染色-

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图8用抗体观察CUBIC处理后斑马鱼鳃的内脏片

◆CUBIC 甲壳类(螃蟹·鼠妇)透明化案例


数据提供:浜松医科大学 医学分光应用寄附研究生 绀野在老师,冈崎茂俊老师


CUBIC                              组织透明化试剂

图9使用CUBIC的甲壳类透明化案例(上:螃蟹,下:鼠妇)

实验步骤参见参考文献6)

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图10观察CUBIC处理后(PI染色)甲壳类的全身(左:螃蟹,右:鼠妇)

实验步骤参见参考文献6)

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

注意:

  列出的产品仅供实验室研究使用,不得用于药物、食品或人体。

组织透明化配套耗材:成像用透明室

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CUBIC trial manual.pdf

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透明化试剂方法选择流程

CUBIC trial manual

CUBIC                              组织透明化试剂

组织透明试剂化系列

组织透明化试剂Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q组织透明化的原则

A:组织透明化通常是按下面的步骤进行的:

A:(a)固定 (b)透化 (c)脱色 (d)折射率匹配

 

Q:组织透明化的优势

A:目前大多数可用的透明化技术,都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记,从而可视化

A:组织中特定的蛋白。组织透明化成为了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。

 

Q:透明化技术的比较

A:下面是水性的透明化技术。

CUBIC                              组织透明化试剂


CUBIC                              组织透明化试剂

A:SeeDB(基于果糖的方法)在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂,所以对于透明化DiI(细胞膜

A:红色荧光探针,一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜(CLEM)的情况下,SeeDB有着一定优

A:势。另外SeeDB会产生自体荧光,有时候会对辨认未标记的神经元结构(如神经毡)起着一定帮助。

A:SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术;因此,当处理较大的组织时,CLARITY或者CUBIC

A:会是更好的选择。

 

Q:切片厚度的最大值和最小值?

A:您应该根据您的物镜的WD(工作距离)来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄

A:且脆弱的样品,我们建议使用琼脂糖包埋。

A:使用CUBIC,可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。

 

Q:试剂盒成分

A:具体如下:

A:1. SCALEVIEW-S试剂盒(299-79001)适用于20份1-2 mm的切片样品

A:A:1) SCALEVIEW-S0——100 mL

A:A:2) SCALEVIEW-S1——100 mL

A:A:3) SCALEVIEW-S2——100 mL

A:A:4) SCALEVIEW-S3——100 mL

A:A:5) SCALEVIEW-S4——100 mL

A:A:6) SCALEVIEW-SMT——100 mL

 

A:2. CUBIC Trial Kit(290-80801)适用于20-30份1-2 mm的切片样品。

A:A:1) SCaleCUBIC-1 Solution——250 mL

A:A:2) SCaleCUBIC-2 Solution——250 mL

A:A:3) Mounting Solution 1——40 mL

A:A:4) Mounting Solution 2——40 mL

 

A:3. SeeDB试剂盒(299-79901)适用于20-30份1-2 mm的切片样品。

A:A:1) SeeDB:20w/v% Fructose Solution——50 mL

A:A:2) SeeDB:40w/v% Fructose Solution——50 mL

A:A:3) SeeDB:60w/v% Fructose Solution——50 mL

A:A:4) SeeDB:80w/v% Fructose Solution——50 mL

A:A:5) SeeDB:100w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:6) SeeDB——50 mL

 

A:4. SeeDB2试剂盒(294-80701)适用于20-30份1-2 mm的切片样品。

A:A:1) Saponin(皂角苷)——5 g

A:A:2) SeeDB2G solution——50 mL

A:A:3) SeeDB2S solution——50 mL

A:A:4) PBS——50 mL

 

Q:样品的保存

A:SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的

A:荧光信号。

A:CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。

A:SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年,而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观

A:察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。

 

Q:抗体的荧光标记

A:应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。

 

Q:适用于SCALEVIEW-S的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

 

Q:适用于CUBIC的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Zeiss Lightsheet Z.1(Carl Zeiss)

 

Q:适用于SeeDB2的显微镜

A:Confocal(最好使用高NA的油浸镜头)

A:STED(Leica Microsystems)

A:SR-SIM(Carl Zeiss)

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Airyscan(Carl Zeiss)

A:HyVolution(Leica Microsystems)

A:Two-photon(最好使用复合浸没镜头)

A:Confocal(最好使用高NA的甘油浸镜头)

A:Light-sheet DLS(Leica,最好使用定制镜面的设备)

 

Q:重构

A:对于定量用途,我们建议使用Neurolucida系统(MBF)。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表

A:现。重构时也可以使用开源软件。例如,Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。

 

Q:物镜推荐

CUBIC                              组织透明化试剂

 

Q:其他物种?其他器官?

A:对于昆虫样品和鱼类样品,建议选择CUBIC。

A:昆虫相关文献:Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

A:鱼类相关文献:Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

   

  对于多细胞球状体,选择SCALEVIEW-S会更好。

  https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0

 

参考文献


[1] E. A. Susaki. et al. : Cell ,157(3),726(2014).

[2] K. Tainaka. et al. : Cell ,159(4),911(2014).

[3] E. A. Susaki. et al. : Nature Protocols ,10,1709(2015).

[4] S. Nojima. et al. : Scientific Reports ,7,9269 (2017).

[5] S. Ohnuma. et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
[6] A. Konno and S. Okazaki.: Zoological Letters, 4:13(2018).

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
290-80801 CUBIC Trial Kit
CUBIC试剂盒试用装
1 Kit 组织透明化试剂