Amplite 比色法生物素定量试剂盒

	货号	5522	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2544
	Ex (nm)	500	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法生物素定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的Amplite系列试剂盒，抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白 – 生物素相互作用是蛋白质与其配体之间最强的已知非共价生物相互作用（Kd = 10-15M-1）。一种抗生物素蛋白结合四种生物素。生物素与抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白之间的键形成非常迅速，一旦形成，不受pH，有机溶剂和其他变性剂的影响。抗生物素蛋白和链霉抗生物素蛋白都具有基本上不可逆的生物素结合特性，因为结合的生物素只能通过使蛋白质的亚基变性来释放。生物素及其衍生物与各种抗生物素蛋白的紧密和特异性结合已被广泛研究用于许多生物学应用。 Amplite™比色生物素定量试剂盒提供了一种方便的方法，用于估算生物素 – 蛋白质结合物中生物素与蛋白质的摩尔比或用于定量溶液中生物素浓度。该测定使用HABA（4′-羟基偶氮苯-2-羧酸），这种试剂在与抗生物素蛋白结合时显示出显着的光谱变化。生物素容易从HABA /抗生物素蛋白复合物中置换HABA，导致500nm处的吸收减少。该试剂盒最适用于测定2至16μM范围内的生物素浓度。可以以比色皿或微孔板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法生物素定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HABA /抗生物素蛋白测定溶液（180μL）
2.添加测试样品（20μL）
3.在室温下孵育5分钟
4.检测500nm处的吸光度

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
Avidin原液（100X）：
向Avidin（组分A）中加入400μLDdH2O，并充分混合。 注意：未使用的100X Avidin原液应分成一次性使用的等分试样并储存在-20℃。

2.工作溶液配制

HABA /抗生物素蛋白测定溶液：
将200μL抗生物素蛋白原液（100X）加入20 mL HABA分析缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：HABA /抗生物素蛋白测定混合物的未使用部分可能在4°C储存至一周。

操作步骤

使用96孔微孔板定量生物素

表1.含有生物素的测试样品的布局，白色/透明底96孔微孔板中的阴性或阳性对照。 NC =阴性对照，PC =阳性对照，TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

注意：有必要在几种稀释度下测试含生物素的样品，以确保生物素浓度在测定线性范围内，2-16μM的生物素（最终浓度）。注意：避免含有钾的缓冲液，因为它会在测定中引起沉淀。注意：必须通过凝胶过滤或透析将游离生物素与生物素化蛋白分离。

1.加入20μL含生物素的样品，阴性对照（ddH2O或用于溶解含生物素的样品的相同缓冲液）和阳性对照（组分C）到96孔白色/透明底微孔板中，如表1和2。

2.将180μLHABA/抗生物素蛋白测定溶液加入含有生物素的样品，阴性对照和阳性对照的每个孔中，使总生物素测定体积为200μL/孔。注意：对于比色皿格式，添加100μL样品和900μLHABA/抗生物素蛋白测定混合物。

3.将反应混合物在室温下孵育5分钟，在摇床上以100-200rpm摇动，避光，避免在移液过程中产生气泡。

4.用吸光度读板仪在500nm处监测吸光度降低。

参考文献

Detection of protein carbonyls by means of biotin hydrazide-streptavidin affinity methods
Authors: Hensley K.
Journal: Methods Mol Biol (2009): 457

Detection and quantitation of the activity of DNA methyltransferases using a biotin/avidin microplate assay
Authors: Liebert K, Jeltsch A.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 149

Quantitation of biotin-binding immunoglobulins G, A, and M in Human Sera Using F(ab’)2anti-human immunoglobulin-coated microplates
Authors: Muratsugu M, Yazawa A, Fujiwara S, Nishida S, Fukui T.
Journal: Biol Pharm Bull (2008): 507

Red cell volume can be accurately determined in sheep using a nonradioactive biotin label
Authors: Mock DM, Mock NI, Lankford GL, Burmeister LF, Strauss RG, Widness JA.
Journal: Pediatr Res (2008): 528

Using liposomal fluorescent biolabels to develop an immunoaffinity chromatographic biosensing system for biotin
Authors: Ho JA, Hung CH.
Journal: Anal Chem (2008): 6405

Fluorometric assay for quantitation of biotin covalently attached to proteins and nucleic acids
Authors: Batchelor RH, Sarkez A, Cox WG, Johnson I.
Journal: Biotechniques (2007): 503

Biotin-protein ratios and stability of biotinylated immunoglobulins as standards for the quantitation of biotin-binding immunoglobulins
Authors: Yazawa A, Fukuoka K, Honda H, Fukui T, Muratsugu M.
Journal: Biol Pharm Bull (2006): 1480

A new chemically amplified electrochemical system for the detection of biological affinity reactions: direct and competitive biotin assay
Authors: Guo LH, Yang XQ.
Journal: Analyst (2005): 1027

Dynamics of fluorescence dequenching of ostrich-quenched fluorescein biotin: a multifunctional quantitative assay for biotin
Authors: Wu Y, Simons PC, Lopez GP, Sklar LA, Buranda T.
Journal: Anal Biochem (2005): 221

Use of a sensitive EnVision +-based detection system for Western blotting: avoidance of streptavidin binding to endogenous biotin and biotin-containing proteins in kidney and other tissues
Authors: Banks RE, Craven RA, Harnden PA, Selby PJ.
Journal: Proteomics (2003): 558

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Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒 比色法

	货号	5525	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 tests	价格	2544
	Ex (nm)	324	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的马来酰亚胺定量试剂盒，马来酰亚胺可以在302nm下通过分光光度法直接测定。但是，620M-1cm-1的小消光系数使得该测定不敏感，并且该测定由于在相同波长下的蛋白质吸光度而进一步复杂化。该比色马来酰亚胺测定试剂盒通过首先使样品与过量硫醇反应，然后使用摩尔消光系数为19,800M -1 cm -1的4,4′-DTDP测定剩余的未反应的硫醇来定量马来酰亚胺基团。马来酰亚胺的量计算为所有马来酰亚胺基团完全反应后硫醇的初始量与未反应的硫醇的量之间的差值。用于测定马来酰亚胺基团的该分光光度测定法是反向GSH测定法。它利用了GSH的硫醇与马来酰亚胺部分的高反应性。使样品的马来酰亚胺与GSH形成稳定的硫代琥珀酰亚胺基键。在样品反应完成后，通过使用4,4′-DTDP估算过量的GSH，即反应混合物中剩余的GSH硫醇。滴定与样品反应的GSH的量以确定马来酰亚胺的程度。对于更灵敏的马来酰亚胺定量，我们建议您使用具有更高灵敏度的荧光测定试剂盒＃5523。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

溶液配制

1.储备溶液配制

未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1 MEA原液（500X）：
将200μL蒸馏水加入MEA小瓶（组分A）中。 注意：10μL的500X MEA储备溶液足以进行50次反应（0.5 mL /反应）。 未使用的500X MEA储备溶液应分成单次使用的等分试样，储存在-20℃并避光。

1.2 4,4′-DTDP储备溶液（50X）：
将1mL DMSO（组分D）加入到4,4′-DTDP（组分B）的小瓶中，并充分混合。 注意：100μL50X4,4′-DTDP储备溶液足以进行10次反应（0.5 mL /反应）。 未使用的50X 4,4′-DTDP储备溶液应分成单次使用的等分试样，储存在-20℃并避光。

2.工作溶液配制

2.1 MEA工作溶液配制：
将10μLMEA储备溶液（500X）加入5mL蒸馏水中，并充分混合。注意：MEA工作溶液不稳定，我们建议随用随配。

操作步骤（以下推荐的方案适用于Cuvette）

1.设置3个总SH管：向每个管中加入400μL测定缓冲液（组分C）和100μLMEA工作溶液，并在室温下孵育20分钟。

2.为每个样品设置3个试管：加入0.05mg测试样品和足够的测定缓冲液（组分C），使总体积为400μL/管。向每个管中加入100μLMEA工作溶液，在室温下孵育20分钟。

3.测量作为空白对照的测定缓冲液（组分C）在324nm处的吸光度。

4.在管仍在孵育时（从步骤1开始）继续进行总SH测定。向每个总SH管中加入10μL50X4,4′-DTDP储备溶液，并在室温下孵育2分钟。注意：不要将50X 4,4′-DTDP储备溶液添加到含有样品的试管中。

5.在不洗涤比色杯的情况下测量3个总SH管在324nm处的吸光度。记录读数并将它们平均为“ODTSH”

6.清洁比色皿并读取第一个样品管（来自步骤2）在324nm（OD0）的吸光度，然后加入任何4,4′-DTDP储备溶液（50X）。

7.将10μL4,4′-DTDP储备溶液（50X）加入样品比色杯（来自步骤6）并充分混合。将样品在室温下孵育2分钟并读取324nm处的吸光度（OD）。清洁比色皿，并对剩余的管重复步骤6和7。记录所有读数。

数据分析

计算每个样品的马来酰亚胺基团数（曲线作为例子）。

1.计算每个管的ΔOD：

ΔOD= ODTSH – [OD-OD0] = ODTSH + OD0-OD

2.计算每个样品的马来酰亚胺：

（马来酰亚胺的摩尔数）/（共轭物）=（[（ΔOD）/（DTDP在324nm的消光系数）]×样品体积（L））/（[共轭重量] / [共轭物的分子量]）

=（[ΔOD÷19,800]×0.51mL÷1000）/（[共轭重量mg÷1000] / [共轭物的分子量]）

=（[ΔOD]×[共轭物的分子量]）/（[共轭重量mg]×38824）

参考文献

Perlecan-targeted nanoparticles for drug delivery to triple-negative breast cancer
Authors: Vidhi Khanna, Stephen Kalscheuer, Ameya Kirtane, Wenqui Zhang, Jayanth Panyam
Journal: Future Drug Discovery (2019)

Conjugation with eight-arm PEG markedly improves the in vitro activity and prolongs the blood circulation of staphylokinase
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Journal: Bioconjugate chemistry (2018)

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Journal: Molecular Pharmaceutics (2016)

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Authors: Tingting Zhang, Weili Yu, Yanfei Wang, Tao Hu
Journal: Vaccine (2015): 3208–3214

Rapid quantification of maleimide in bioconjuated samples using a novel colorimetric method (TECH2P. 761)
Authors: Jinfang Liao, Haitao Guo, Zhen Luo, Qin Zhao, Jack Diwu
Journal: The Journal of Immunology (2015): 206–7

Successful acquisition of a neutralizing monoclonal antibody against a novel neutrophil-activating peptide, mitocryptide-1
Authors: Tatsuya Hattori, Kenta Nakashima, Takayuki Marutani, Yoshiaki Kiso, Yoshisuke Nishi, Hidehito Mukai
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 54–59

CD133-targeted paclitaxel delivery inhibits local tumor recurrence in a mouse model of breast cancer
Authors: Suresh Kumar Swaminathan, Emilie Roger, Udaya Toti, Lin Niu, John R Ohlfest, Jayanth Panyam
Journal: Journal of Controlled Release (2013): 280–287

PEG as a spacer arm markedly increases the immunogenicity of meningococcal group Y polysaccharide conjugate vaccine
Authors: Qingrui Huang, Dongxia Li, Aijun Kang, Wenqi An, Bei Fan, Xiaowei Ma, Guanghui Ma, Zhiguo Su, Tao Hu
Journal: Journal of Controlled Release (2013): 382–389

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Amplite 马来酰亚胺快速定量试剂盒 比色法

	货号	5526	存储条件	Multiple
	规格	2 Tests	价格	2544
	Ex (nm)	780	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 马来酰亚胺快速定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于胺定量的试剂盒，具有马来酰亚胺基团的各种交联剂广泛用于将蛋白质与蛋白质或蛋白质交联至其他生物分子。马来酰亚胺交联技术的关键点是与单一蛋白质或抗体连接的马来酰亚胺的定量。马来酰亚胺可以在302nm下通过分光光度法直接测定。然而，620M-1cm-1的小消光系数使得该测定不敏感，并且该测定由于在相同波长下的蛋白质吸光度而进一步复杂化。 AAT Bioquest的Amplite 快速比色马来酰亚胺定量试剂盒使用我们专有的马来酰亚胺传感器Maleimide Blue ，在~780nm处具有最大吸光度，可快速准确地量化马来酰亚胺。该测定的原理是马来酰亚胺蓝 与马来酰亚胺连接的样品反应，并且所得产物通过单个旋转柱以除去过量的传感器。测量纯化产物的吸收光谱，并且可以从780nm和280nm（对于蛋白质）或260nm（对于寡核苷酸和核酸）的吸光度比计算马来酰亚胺与蛋白质的比率。这种Amplite 快速马来酰亚胺定量试剂盒可在传统的比色皿，NanoDrop 分光光度计或方便的96孔吸光板读数器中进行，带有UV透明板。该试剂盒已广泛用于从蛋白质，寡核苷酸和核酸样品中快速定量马来酰亚胺基团。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 马来酰亚胺快速定量试剂盒。

产品说明书

实验方案

1.准备样品溶液：

1.1使用50至100μg马来酰亚胺样品（蛋白质或其他聚合物）。

1.2使用分析缓冲液（组分B）将体积调节至100μL。 注意：马来酰亚胺连接的抗体或蛋白质样品应在pH = 6.0缓冲液中且不含游离马来酰亚胺。

2.运行马来酰亚胺测定：

2.1将马来酰亚胺样品加入一瓶马来酰亚胺蓝（组分A）中。

2.2通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

2.3将反应混合物保持在室温下并旋转或摇动30-60分钟。

3.准备用于样品纯化的旋转柱：

3.1将旋转柱（组分C）反转几次以重悬沉淀的凝胶并除去任何气泡。

3.2取下尖端并将色谱柱放入洗涤管（2 mL，组分D）中。取下盖子，让多余的填料缓冲液通过重力排放到凝胶床的顶部。如果色谱柱没有开始流动，请将盖子推回色谱柱并再次将其取出以开始流动。丢弃排出的缓冲液，然后将色谱柱放回洗涤管中。但是，如果将色谱柱放入12 x 75 mm试管（未提供）中，请立即离心。

3.3在1000 x g的摇摆式离心机中离心1分钟（参见“离心注释”部分）以除去包装缓冲液。丢弃缓冲区。

3.4将1 mL分析缓冲液（组分B）应用于色谱柱，让缓冲液通过重力排出，或将色谱柱离心1分钟以除去缓冲液。丢弃收集管中的缓冲液。重复此过程3-4次。

3.5在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟（参见离心注释部分）以除去反应缓冲液。丢弃缓冲区。注意：旋转柱（组分C）可以装入2 mL微量离心管或12 x 75 mm试管中，以便在离心过程中收集样品。使用随柱提供的2 mL微管进行初始色谱柱平衡步骤。注意：能够产生1,000 x g最小力的摆动式离心机适用于Bio-Spin柱。在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。有关从每分钟转数（RPM）到离心力或g力的转换信息，请参阅摆动式离心机说明手册。或者，使用公式计算达到1,000 x g重力所需的RPM速度。

RCF（g）=（1.12×10-5）×（RPM）2×r

RCF =相对离心力
RPM =转子的速度
r =从转子中心到Bio-Spin柱中间测量的以厘米为单位的半径

4.纯化Malemide反应产物：

4.1将色谱柱放入干净的收集管（1.5 mL，组分E）中。 小心地将样品（100μL）直接加载到色谱柱中心。

4.2加载样品后，在顶部加入10μL分析缓冲液（组分B），以1,000 x g离心柱5分钟，然后将溶液收集到收集管中。

5.用0.2mL或0.5 mL石英比色皿运行吸收光谱：

5.1根据所用的比色皿大小和吸光度读数，用测定缓冲液（组分B）将马来酰亚胺反应产物稀释5-10倍。 稀释因子不影响最终的马来酰亚胺定量结果。

5.2测量900 nm至250 nm范围内的吸收光谱，或仅读取280 nm和782 nm处的吸光度数。

示例分析

使用BSA-马来酰亚胺作为实例，用0.5mL比色皿测量计算马来酰亚胺连接的BSA样品上的马来酰亚胺基团的数目。

样品：BSA-马来酰亚胺，10.75mg / mL，pH = 6.0缓冲液

1.使用4.7μL（50μg）BSA-马来酰亚胺，然后加入95.3μL分析缓冲液（组分B），使总体积为100μL。
2.将100μL以上溶液加入到马来酰亚胺蓝TM小瓶（组分A）中，充分混合。
3.在室温下旋转60分钟。
4.用旋转柱（组分C）纯化，并收集产物。
5.取50μL产物，加入400μL分析缓冲液（组分B）至0.5mL比色皿中并测量吸光度光谱。

常数：

BSA在280nm处的消光系数：43824M-1cm^-1
最大吸收（780±3nm）时的马来酰亚胺Blue 消光系数：275,000 M-1 cm^-1
马来酰亚胺蓝 在280nm（CF280nm）的校正因子：0.207

结果：

用上述BSA-马来酰亚胺样品获得的OD读数：A280nm = 0.290，A782nm = 1.214

计算：

用以下公式计算BSA-马来酰亚胺量：

（马来酰亚胺的摩尔数）/（蛋白质或抗体的摩尔数）=
（[A782nm] /εMaleimideBlue ）/ [（A280nm-CF280nm x [A782nm]）/ε蛋白或抗体在280nm处]

马来酰亚胺比=（1.214 / 275000）/（0.290 – 0.207×1.214）/ 43824 = 5.00

参考文献

Conjugation with an inulin-chitosan adjuvant markedly improves the immunogenicity of Mycobacterium tuberculosis CFP10-TB10. 4 fusion protein
Authors: Weili Yu, Tao Hu
Journal: Molecular Pharmaceutics (2016)

Moderate PEGylation of the carrier protein improves the polysaccharide-specific immunogenicity of meningococcal group A polysaccharide conjugate vaccine
Authors: Tingting Zhang, Weili Yu, Yanfei Wang, Tao Hu
Journal: Vaccine (2015): 3208–3214

Rapid quantification of maleimide in bioconjuated samples using a novel colorimetric method (TECH2P. 761)
Authors: Jinfang Liao, Haitao Guo, Zhen Luo, Qin Zhao, Jack Diwu
Journal: The Journal of Immunology (2015): 206–7

Successful acquisition of a neutralizing monoclonal antibody against a novel neutrophil-activating peptide, mitocryptide-1
Authors: Tatsuya Hattori, Kenta Nakashima, Takayuki Marutani, Yoshiaki Kiso, Yoshisuke Nishi, Hidehito Mukai
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 54–59

CD133-targeted paclitaxel delivery inhibits local tumor recurrence in a mouse model of breast cancer
Authors: Suresh Kumar Swaminathan, Emilie Roger, Udaya Toti, Lin Niu, John R Ohlfest, Jayanth Panyam
Journal: Journal of Controlled Release (2013): 280–287

PEG as a spacer arm markedly increases the immunogenicity of meningococcal group Y polysaccharide conjugate vaccine
Authors: Qingrui Huang, Dongxia Li, Aijun Kang, Wenqi An, Bei Fan, Xiaowei Ma, Guanghui Ma, Zhiguo Su, Tao Hu
Journal: Journal of Controlled Release (2013): 382–389

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Amplite 硫醇快速定量试剂盒(荧光法)绿色荧光

简要概述

Amplite 硫醇快速定量试剂盒(荧光法)绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于硫醇定量的试剂盒，具有马来酰亚胺基团的各种交联剂广泛用于将蛋白质与蛋白质或蛋白质交联至其他生物分子。马来酰亚胺交联技术的关键点是与单一蛋白质或抗体连接的马来酰亚胺的定量。马来酰亚胺可以在302nm下通过分光光度法直接测定。然而，620M-1cm-1的小消光系数使得该测定不敏感，并且该测定由于在相同波长下的蛋白质吸光度而进一步复杂化。 AAT Bioquest的Amplite 快速比色马来酰亚胺定量试剂盒使用我们专有的马来酰亚胺传感器Maleimide Blue ，在~780nm处具有最大吸光度，可快速准确地量化马来酰亚胺。该测定的原理是马来酰亚胺蓝 与马来酰亚胺连接的样品反应，并且所得产物通过单个旋转柱以除去过量的传感器。测量纯化产物的吸收光谱，并且可以从780nm和280nm（对于蛋白质）或260nm（对于寡核苷酸和核酸）的吸光度比计算马来酰亚胺与蛋白质的比率。这种Amplite 快速马来酰亚胺定量试剂盒可在传统的比色皿，NanoDrop 分光光度计或方便的96孔吸光板读数器中进行，带有UV透明板。该试剂盒已广泛用于从蛋白质，寡核苷酸和核酸样品中快速定量马来酰亚胺基团。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 硫醇快速定量试剂盒(荧光法)绿色荧光。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（截止= 515 nm）

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μLddH2 O加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

2.标准溶液配制
将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

3.工作溶液配制

将50μL100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。 注意：这种GSH工作溶液足以容纳一个96孔板。 在室温下不稳定，应在2小时内及时使用。 避免暴露在光线下。 注意：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液（组分B）的100X Thiolite Green原液来制备GSH工作溶液。

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  –  SD7,0.014至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.向GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光增加。

参考文献

Activation of transcription factors in human bronchial epithelial cells exposed to aqueous extracts of mainstream cigarette smoke in vitro
Authors: Takashi Sekine, Tadashi Hirata, Toshiki Mine, Yasuo Fukano
Journal: Toxicology mechanisms and methods (2016): 22–31