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基因编辑后突变检测酶试剂盒Takara

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基因编辑后突变检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns ￥5,771
￥4,617 		基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测
Clontech 631448 Guide-it Mutation Detection Kit 25 Rxns ￥2,609
￥2,087 		基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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          基因敲除    
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基因编辑后突变检测 → 基因编辑后突变检测 → 基因编辑后突变检测            
  基因敲入        
          ↘ 基因编辑后突变检测        
 
 
Guide-it™突变检测试剂盒可以用于确认由CRISPR/Cas9、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)等工程核酸酶所导入的基因突变。本试剂盒采用简单的PCR方法即可简便快速地检测出基因突变。性能卓越的 Terra™ PCR Direct Polymerase Mix可直接以细胞为起始进行扩增，无需提取基因组DNA。扩增产物经过变性及退火处理后形成不完全匹配DNA，Guide-it解离酶会剪切错配DNA部分，之后通过琼脂糖凝胶电泳确认剪切产物。
 
■ 特点
· 识别哺乳动物细胞中插入或者缺失突变的简便方法
· 可直接以细胞为起始进行PCR扩增，与同类产品相比较更为快速有效
· 完整试剂盒: 包含Guide-it Resolvase、Terra PCR Direct Polymerase和所有缓冲液
· 规格: 可提供100次和25次反应规格，25次反应规格可用于小规模基因编辑实验
· 可用于CRISPR/Cas9、ZFNs、TALENs下游研究突变序列确认
 
■ 操作流程
基因编辑后突变检测
 
■ 实验例
基因编辑后突变检测
 

图1. 比较Guide-it和Surveyor方法。转染表达Cas9核酸酶的质粒和特异作用于AAVS1位点的sgRNA至293T细胞，转染48 hr 后收集细胞，将其与未经转染的细胞按照不同比例*进行混合，分别进行突变导入检测。采用Terra PCR Direct Polymerase Mix扩增含有AAVS1位点的目的片段并纯化其产物，之后分别采用Guide-it解离酶和Cel1酶（Surveyor assay）进行剪切。采用Guide-it解离酶剪切后条带清新易于识别，而Surveyor assay剪切后则显示明显的弥散，这样使得不容易测定突变效率并且低水平突变导入很难检测得到。*泳道1-6 : 100％, 80％, 60％, 40％, 20％, 0％（转染细胞的比例）
 
 
■ 产品组份
  100 次（产品编号 631443） 25 次（产品编号 631448）
 Extraction Buffer 1 5 ml × 4    5 ml
 Extraction Buffer 2      2 ml 500 μl
 Guide-it Resolvase   100 μl  25 μl
 Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)   100 μl  25 μl
 2 × Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) 1 ml × 3 750 μl
  PCR-Grade Water 1 ml × 5    1 ml
 
■ 保存
－20℃
 
 
产品详情请点击：基因编辑后突变检测
 
 
■ 关联资料
Guide-it™ 突变检测试剂盒宣传页：
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基因编辑后基因敲入检测酶试剂盒Takara

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基因编辑后基因敲入检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632659 Guide-it™ Knockin Screening Kit 100 Rxns ￥4,733 基因编辑后基因敲入检测 基因编辑后基因敲入检测 基因编辑后基因敲入检测
Clontech 632660 Guide-it™ Knockin Screening Kit 400 Rxns ￥11,923 基因编辑后基因敲入检测 基因编辑后基因敲入检测 基因编辑后基因敲入检测
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          基因敲除    
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基因编辑后基因敲入检测 → 基因编辑后基因敲入检测 → 基因编辑后基因敲入检测            
  基因敲入        
          ↘ 基因编辑后基因敲入检测        
 
 
基因编辑后基因敲入检测试剂盒，简便·快速
Guide-it Knockin Screening Kit
 
Guide-it Knockin Screening Kit可高灵敏度地检测通过同源重组（homologous recombination, HR）所产生的基因编辑位点，可用于检测使用CRISPR/Cas9等技术进行基因编辑的批量或者单克隆细胞。该试剂盒采用了简单的基于荧光的检测方法，不论所敲入的插入物长度（从单碱基替换到更长的插入片段）或被编辑的基因组区域序列如何，都可以对由同源重组（HR）所产生的基因组编辑位点进行检测，这种检测方法简便可靠。
该试剂盒操作流程简便快速，主要包括基因组靶标位点PCR扩增，绿色和红色双色荧光检测的酶法测定。这个酶法测定实验，使用荧光读板机或定量PCR仪检测荧光信号即可进行测定，不需要其他特殊仪器。整个操作流程大约需要4个小时，由于荧光信号的检测与基因组靶标位点上目标序列的正确引入是正相关的关系，从而确保可以检测到突变。
在引入单核苷酸多态性（SNP）的应用中，该检测方法能够在混合和克隆细胞群中高灵敏度地检测出单核苷酸替换，可鉴定识别含有两个不同等位基因的杂合克隆（例如携带经编辑（SNP）和未经编辑（WT）各一个拷贝的等位基因）。对于敲入更长基因序列的应用，使用这种检测方法可以在插入序列的5'和3'末端，同时检测是否无缝插入。
 
■ 特点
· 无需测序，快速确定是否发生了正确的基因敲入
· 可用于批量或者单克隆细胞检测
· 操作简单快速，4小时可完成检测
· 无需特殊仪器，使用荧光读板机或者定量PCR仪进行测定
· SNP分析理想选择，双色检测可同时检测两个不同等位基因（SNP和WT等）
 
■ 应用
· 在经过编辑的细胞群中快速检测单核苷酸替换或准确敲入
· 在杂合克隆中同时检测已编辑和未编辑的等位基因
· 在进行单细胞克隆之前对杂合的细胞群进行编辑效率分析
 
■ 在线工具
寡核苷酸DNA设计对于使用Guide-it Knockin Screening Kit进行SNP分析是非常必要的，这个在线工具可以让您轻松设计每个寡核苷酸DNA。
注意：此在线工具仅用于设计检测单碱基替换的寡核苷酸DNA，而不能用于检测长片段插入的寡核苷酸DNA的设计。
Oligo design tool for Guide-it SNP screening assays
 
■ Tech Note
在iPSC中引入与疾病相关的遗传变异，包括SNP，可以评估这些变异在相关细胞类型中的表型效应，并消除由于遗传背景引起的变异性，从而可以更精细地分析疾病机制并更快速地评估潜在疗法 （例如，药物筛选）。Guide-it Knockin Screening Kit提供了一种简便快速的方法，可以在繁琐耗时的单细胞克隆分离之前，从大量编辑后的细胞群和最终产生的克隆细胞群中，明确鉴定出成功的同源重组修复(homology-directed repair, HDR)。
详情点击图片查看
基因编辑后基因敲入检测
 
■ 使用实例
基因编辑后基因敲入检测
图1. 使用Guide-it Knockin Screening Kit检测敲入的插入片段全长
基因编辑后，通过FACS或有限稀释法分离的大量细胞群和克隆细胞系可能表现出多种模式，例如野生型（WT），引入插入/缺失（indel）或敲入了全长插入片段。从克隆细胞中提取DNA并扩增靶标位点，然后将PCR产物与两套不同的displacement oligo（紫色）和flap probe进行杂交：一个与插入片段的5'端杂交（Flap-probe oligo A; 绿色），另外一个与3'端杂交（Flap-probe oligo B; 橙色）。如果同源重组成功并且全长插入片段无缝正确插入的情况下，探针会与两端完全杂交，Guide-it Flapase剪切flap probes后产生绿色和红色荧光信号。当仅检测到一种荧光信号（红色或绿色）时，表明插入片段分别在5'端或3'端发生了缺失。如果没有检测到荧光，则表明靶标位点依然是野生型序列或者引入了indel。
 
基因编辑后基因敲入检测
图2. 引入单碱基替换的常见结果
展示了使用基因编辑技术进行单碱基替换（G＞T）的示例，此工作流程示例为G>A替换检测示例。
Panel A. 在基因组靶标位点的结果：当在靶标位点没有发生成功切割，或者成功切割后发生了基于非同源末端连接(NHEJ)的准确修复的情况下，靶标位点没有发生变化，结果仍然为野生型(WT)序列。当切割后发生了基于NHEJ的不准确修复的情况下，其结果是在靶标位点引入了插入或缺失（Indel），这可能会导致基因敲除（KO；极有可能的结果）。当切割后发生了准确的HDR时，则会在靶标位点引入SNP。
Panel B. 二倍体细胞中等位基因组合结果：在二倍体细胞中进行编辑时，每个等位基因的编辑结果可能会有所不同，从而产生多种可能的组合。如果没有发生基因编辑，细胞仍然可以保持纯合型（野生型；顶部）；如果发生了不准确的NHEJ修复，会有一个或两个等位基因被修饰（Indel；中间）；如果发生了成功的HDR，则可以获得一个或两个等位基因中引入了目标SNP的细胞（成功的HDR；底部）。
 
基因编辑后基因敲入检测
图3. 使用Guide-it Knockin Screening Kit进行SNP分析的流程
此示例工作流程演示了对G>A单碱基替换的分析，其中G是野生型碱基，被编辑为A。在基因编辑后，将单细胞扩培成为克隆细胞系，目标基因的靶标位点可能具有几种不同的基因型结果。扩增靶位点后，将PCR产物与不同的寡核苷酸探针进行杂交：displacement oligo（紫色）与flap-probe oligo A（绿色；编码SNP等位基因，A）或flap-probe oligo B（橙色；编码WT等位基因，G）组合使用。寡核苷酸退火至PCR产物后，Guide-it Flapase酶（剪刀所示）识别完全的碱基配对，并切割flap-probe oligo 5’端部分（绿色或橙色阴影）。切割下来的flaps由相对应的Guide-it flap detectors检测，并分别产生绿色或红色荧光信号。在上面的示例中，在靶标位点仅产生红色信号的克隆细胞系分析是纯合WT（G/G），而同时产生红色和绿色信号的则是携带已编辑和WT等位基因（G/A）的杂合克隆。
 
基因编辑后基因敲入检测
图4. 检测iPS细胞群中PSEN1位点的准确碱基替换
为了验证Guide-it Knockin Screening Kit的SNP检测功能，使用CRISPR/Cas9系统构建了编码PSEN1基因突变体A>G替换（M164V）的杂合型iPS细胞系，该突变体与早发型阿尔茨海默氏病相关。
Panel A. 使用包含PAM沉默突变的HDR模板，在PSEN1基因座上进行准确基因编辑：如果同源重组成功，编辑后的PSEN1基因座将编码邻近PAM序列发生沉默突变（红色，小写）的SNP（蓝色，小写）或者WT（紫色，小写）等位基因。
Panel B. 基因组编辑后在批量iPS细胞群中成功检测碱基替换：使用正义或者反义HDR模板进行基因编辑，然后使用Guide-it Knockin Screening Kit检测是否在每种情况下都成功发生了基因编辑。
设计displacement和flap-probe oligos，用于检测由相应HDR模板编码的邻近PAM序列发生沉默突变（G>C）的WT或者SNP等位基因，将分别产生红色和绿色荧光信号。在独立平行实验中，将Cas9蛋白质（阴性对照），Cas9-sgRNA RNP复合物（KO）或者RNP复合物和正义或者反义WT/SNP HDR模板混合物通过电穿孔的方式分别导入至细胞中。合成检测PAM序列沉默突变的WT或SNP编码序列的寡核苷酸探针，进行平行检测并作为阳性对照。对于每个电穿孔混合物中包含HDR模板的编辑实验组，可以在批量细胞群中检测到成功的HDR。阴性对照组没有显示绿色和红色荧光信号，这证实了flap-probe oligos的特异性，因为在未编辑的WT序列存在下它们没有产生假阳性荧光信号。
 
■ 产品组份
· MightyPrep Reagent for DNA
· Guide-it Knockin Positive Control Mix
· Guide-it Knockin Negative Control Mix
· Terra PCR Direct Polymerase Mix
· 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· Dilution Buffer
· RNase-free Water
· Annealing Buffer
· Flapase Buffer
· Guide-it Flapase
· Guide-it Green Flap Detector (40X)
· Guide-it Red Flap Detector (40X)
 
■ 保存
MightyPrep Reagent for DNA：4℃
其它：－20℃
 
 
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基因编辑后克隆基因型确认酶试剂盒Takara

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基因编辑后克隆基因型确认
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632611 Guide-it Genotype Confirmation Kit 100 Rxns ￥5,910 基因编辑后克隆基因型确认 基因编辑后克隆基因型确认 基因编辑后克隆基因型确认
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基因编辑后克隆基因型确认
Guide-it Genotype Confirmation Kit
每个细胞中大部分基因都拥有两个等位基因。CRISPR/Cas9基因编辑可以对特定基因的一个或两个等位基因引入插入突变或缺失突变(indels)。Guide-it Genotype Confirmation Kit提供了一种简单的方法，用于确认特定克隆是一个等位基因突变（单等位基因），还是两个等位基因突变（双等位基因突变），或者是未发生变化（野生型）。实验操作中涉及到从Cas9 和single guide RNA (sgRNA)处理的细胞中扩增靶点序列。扩增出的序列被用在重组Cas9和相同的sgRNA的体外剪切反应。剪切产物通过琼脂糖凝胶电泳，确定基因型。
基因编辑后使用该试剂盒，加快了在大量克隆中筛选所需基因型的进程。每个试剂盒包含足够的试剂，用于100次提取、扩增和剪切反应。
 
产品特点：
· Cas9 和sgRNA体外剪切实验，用于确定单等位基因突变和双等位基因突变
· 包括高纯度的重组Cas核酸酶，用于体外剪切实验
· 流程化的操作步骤，使用来自于细胞的目的基因组DNA直接扩增
 
产品应用：
· CRISPR/Cas9 基因编辑
· CRISPR/Cas9 基因编辑后，单等位基因突变和双等位基因突变的确定
 
实验例：
基因编辑后克隆基因型确认
A图：使用Cas9和靶向C4BPB 基因的sgRNA对HEK 293细胞进行基因编辑。使用Guide-it Genotype Confirmation Kit对获得的15个单细胞克隆进行C4BPB位点的基因型鉴定。图中左侧的野生型 (WT)，单等位基因 (M)，双等位基因 (B)在分析中作为对照。结果表明克隆1，4，10，12是野生型；克隆2是单等位基因突变；以及克隆3，5-9，11和13-15是双等位基因突变。
B图：对A图中挑选的克隆进行测序分析。每个结果中，小写字母代表的是野生型（WT）序列。对于那些在A图中使用基因型鉴定方法确认的双等位基因突变的克隆，进一步测序分析表明克隆7是杂合子，克隆9和11是纯合子。在克隆2中，检测到3种不同的等位基因，可能是因为在HEK 293细胞系中出现拷贝数变异。
（数据来源于Takara Bio USA, Inc.）
 
 
Code No. 产品名称
632611   Guide-it™ Genotype Confirmation Kit
 
产品详情请点击：基因编辑后克隆基因型确认
 
 

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基因编辑后基因组序列确认酶试剂盒Takara

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基因编辑后基因组序列确认
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631444 Guide-it Indel Identification Kit 10 rxns ￥6,113 基因编辑后基因组序列确认 基因编辑后基因组序列确认 基因编辑后基因组序列确认
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由于产品升级，从即日起，您订购的以上产品中的组分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639648)将陆续替换为性能更高的In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638947)，该组分数量保持不变，请以实际收到的产品为准。如需含HD组分的旧版说明书或产品组分列表文件，请邮件联络zhukx@takarabiomed.com.cn
 
 
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基因编辑后基因组序列确认
Guide-it™ Indel Identification Kit
· 确认细胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、锌指核酸酶进行基因编辑后导入的突变位点基因序列
· 直接PCR与In-Fusion基因克隆技术相结合，以细胞裂解液为起始简便、快速且准确地获得目的克隆
· In-Fusion基因克隆技术无需连接过程，仅需15分钟即可实现无缝定向克隆
· 包含目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂的完整试剂盒
 
■ 产品说明
Guide-it Indel Identification Kit用于确认细胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、锌指核酸酶进行基因编辑后所导入的序列插入和缺失(indels)，本试剂盒可以提供完整的操作流程。

本试剂盒包含了目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂。Terra PCR Direct polymerase可直接以粗提细胞裂解液为样品扩增包含靶位点的基因组DNA片段。采用In-Fusion基因克隆技术可将扩增获得的目的基因片段直接克隆至预线性化pUC19载体中，而无需经过限制性酶切处理。将重组质粒转化至Stellar感受态细胞，通过菌落PCR扩增靶标区域。分析PCR产物的DNA序列确认突变位点序列。
基因编辑后基因组序列确认
图1．实验流程
 
Step1 Guide-it Indel Identification Kit用于确认细胞群中经过基因编辑后所导入的序列插入和缺失(indels)，本试剂盒可以提供完整的操作流程。本试剂盒所采用的PCR酶可以直接以粗提细胞裂解液为起始扩增基因组DNA片段（约500-700 bp）
Step2 扩增产物是来自于所有细胞包含基因编辑靶标位点的基因组片段的集合。采用In-Fusion基因克隆技术可将扩增产物直接克隆至预线性化pUC19载体中。
Step3 将重组质粒转化至经过优化的大肠杆菌菌株，通过菌落PCR扩增靶标区域
Step4 通过DNA测序分析确认突变位点序列
 
基因编辑后基因组序列确认
图2．CRISPR/Cas9基因编辑后，确认CD81基因插入、缺失序列
 
转染表达Cas9和作用于CD81基因的sgRNA至Hela细胞进行基因编辑，采用Guide-it Indel Identification Kit制备CD81基因靶位点测序用样品。选择6个克隆进行测序并将测序数据与野生型基因序列进行比对，确认CD81基因导入的突变位点序列。
 
■ 产品组分
· Guide-it Indel Identification Components
  Terra PCR Direct Polymerase Mix 110 μl
  2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) 1 ml×3
  Extraction Buffer 1 400 μl
  Extraction Buffer 2 40 μl
  pUC19 Cloning Vector, linearized (50 ng/μl) 10 μl
  Colony PCR Forward Primer (15 μM) 200 μl
  Colony PCR Reverse Primer (15 μM) 200 μl
  PCR-Grade Water 1 ml×6
 
· In-Fusion Snap Assembly Master Mix
· NucleoSpin Gel and PCR Clean-up
· Stellar Competent Cells（Code No. 636763）
 
■ 保存
Guide-it Indel Identification －20℃
In-Fusion Snap Assembly Master Mix －20℃
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up 室温
Stellar Competent Cells  
    Stellar Competent Cells ： －70℃
    其它组份： －20℃
 
 
产品详情请点击：基因编辑后基因组序列确认
 
 
 

页面更新：2021-11-30 16:42:58

DNA pMW 219 载体 DNA pMW 219

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  • Q&A
  • 参考文献

pMW 219 DNADNA pMW 219 载体 DNA pMW 219

克隆载体


◆原理

　　pMW219 DNA由 Cosmid lorist6、质粒 pBR322、质粒 pSC101、质粒 pUC19 的 DNA 片段构建而成。

　　下图展示了限制性内切酶图谱。


DNA pMW 219 载体 DNA pMW 219

par：质粒稳定化区域
ori：DNA复制开始区域
rep：DNA复制调节基因
lacZ：β-半乳糖苷酶基因
Kmr：卡那霉素抗性基因


◆优点、特色


●　可用于克隆在多拷贝质粒里难以克隆的基因
●　（DNA代谢相关的蛋白编码基因，如，聚合酶、连接酶等基因）
●　在同一菌株内拥有pBR系、pUC系的DNA复制开始区域的质粒里，克隆了基因A的同时也想表达其他基因B时，可作为克隆基因B

●　的克隆载体
●　可用于克隆多克隆位点Hind III、Xba I、BamH I、Sma I、Xma I、Kpn I、Sac I、EcoR I的唯一切割部位
●　在多克隆位点里克隆基因，使用宿主大肠杆菌lacZ、N末端有缺陷的菌株（如JM109）并添加X-Gal和IPTG，重组体容易识别白色

●　菌落旁边蓝色的非重组体
●　可在卡那霉素培养基上选择转化的大肠杆菌


来源：有质粒 pMW219 的E. coli JM109

M.W.： 2.55×106 Da（3,923 bp）

试剂制备：有质粒 pMW219 的E. coli JM109 通过溴化乙锭——氯化铯密度梯度离心分离

形状： 10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）, 1 mmol/L EDTA

浓度： 0.1~0.5 μg/μL

纯度：A260/A280 ≒ 1.8（此数值可能因批次不同有异）

碱基配列：EMBL, GenBank, DDBJ Accession No. AB005478（pMW219）

参考：pMW218・219 DNA的限制性内切酶图




参考文献：


  • Bernardi, A. and Bernardi, F. : Nucleic      Acids Res., 12, 9415（1984）

  • Yamaguchi, K. and Masamune, Y. : Mol. Gen.      Genet., 200, 362（1985）

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
310-02571 DNA pMW 219
 DNA pMW 219载体		 10μg –

GenomONE ® -GX EX 向免疫细胞导入质粒DNA

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GenomONE®-GX EXGenomONE ® -GX EX 向免疫细胞导入质粒DNA

向免疫细胞导入质粒DNA

GenomONE®-GX EX是以基因表达为目的使用的转染试剂。本试剂盒由形成基因导入载体所需的中性脂质物质、辅助试剂和通过直接向细胞添加来提高基因表达的Enhancer组成。

 

基因导入载体仅在一支试管内即可制备，仅需混合操作即可在10 min以内制备完成。对于是否使用Enhancer，基因导入载体细胞的添加量等问题，FUJIFILM Wako准备了各细胞转染的适用条件的实验方案供您参考。

 


◆特点


●　HVJ-E与中性脂质物质组合的基因导入载体

●　操作简便，10 min内完成制备

●　配套Enhancer可增强基因表达

●　通过配合KALA肽使用可以提高基因表达

 


◆Enhancer及KALA肽提高基因表达的机制

GenomONE ® -GX EX 向免疫细胞导入质粒DNA

Enhancer通过抑制由外源DNA引起的自然免疫信号，有望于改善受自然免疫信号抑制的胞内基因表达。

KALA肽可以通过作用于内体并增加释放到细胞质中的基因数量，从而提高基因表达。

※KALA肽需另行购买。

 


◆应用数据


与其他公司产品比较基因表达


使用GenomONE®-GX EX、GenomONE®-GX EX+KALA肽以及其他公司产品L，将CAG启动子下游含有Turbo-GFP基因的质粒DNA导入各细胞中，两天后用荧光显微镜观察。

GenomONE ® -GX EX 向免疫细胞导入质粒DNA

GenomONE®-GX EX与KALA肽配合使用，可在大部分细胞中发现基因表达的提高。总体获得了比其他公司产品L更高的基因表达结果。

◆产品列表

产品编号

制造商编号

产品名称

包装

389-18751

GX001

GenomONE®–GX EX
GenomONE® –GX EX 转染试剂套装

1 set

385-18753

GX004

4 set

383-18754

GX016

16 set

389-18756

GX040

40 set

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


参考文献

GenomONE ® -GX EX 向免疫细胞导入质粒DNA

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产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

抗P94/钙蛋白酶3多克隆抗体

发表于由
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  • 参考文献

抗P94/钙蛋白酶3多克隆抗体抗P94/钙蛋白酶3多克隆抗体

 


◆背景


　　钙蛋白酶，是一种需要Ca2+的细胞质半胱氨酸蛋白酶，在各种细胞功能如信号转导，细胞生长和分化，细胞凋亡，坏死等中起着不可或缺的作用。尽管钙蛋白酶的大多数详细的生理功能尚未阐明，但是从人类疾病状态（例如阿尔茨海默病，白内障和肌肉营养不良）和钙蛋白酶的功能障碍的关系的描述论文数量增加，钙蛋白酶的重要性已显而易见。钙蛋白酶最近引人注目的一个主题是CAPN10（钙蛋白酶10的基因）的单核苷酸多态性与2型糖尿病相关。然而，钙蛋白酶10的生理功能以及与糖尿病的关系仍不清楚。在14种人钙蛋白酶基因中，CAPN3（p94/钙蛋白酶3a和Lp82/蛋白酶3b的基因）中的突变，是在基因层面上连接钙蛋白酶基因与人类疾病的唯一实例（肢带型肌营养不良2A型（LGMD2A））。

　　 p94的特点，Ca2+-非依赖性活化和快速的自溶活性，取决于p94特异性区域，NS，IS1和IS2。根据μ-和m-钙蛋白酶的3D结构，讨论了p94的分子功能与LGMD2A的关系，希望能提供线索来了解钙蛋白酶功能以及与人类疾病的关系。

 


◆应用


Western Blot免疫印迹：〜1/500：预测分子量：94kDa（55 kDa+32 kDa）


抗P94/钙蛋白酶3多克隆抗体


mock：表达载体（pSRD）转染COS细胞的提取物

WT：野生型p94的pSRD转染COS细胞中的提取物

C129S：无活性P94：C129S变体的pSRD转染COS细胞中的提取物


参考文献

[1]　Ono, Y., Torii, F., Ojima, K., Doi, N., Yoshioka, K., Kawabata, Y., Labeit, D., Labeit, S., Suzuki, K., Abe, K.,Maeda, T., and Sorimachi, H. (2006) Suppressed disassembly of autolyzing p94/CAPN3 in a genetic reportersystem. J. Biol. Chem., 281, 18519-18531. Fig.2A (anti-pIS2)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
COP-COP-080048 钙蛋白酶3抗体
Anti Calpain 3		 100 μL －
COP-COP-080049 Calpain3抗体
Anti Calpain3		 50 μL －