HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒 乙型肝炎病毒特异性检测

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乙型肝炎病毒特异性检测HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒                              乙型肝炎病毒特异性检测

HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒


◆HBsAgGi HBs抗原的糖链异构体

HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒                              乙型肝炎病毒特异性检测

本产品是针对M-HBs的O型糖链修饰的PreS2的单克隆抗体,可特异性识别含有DNA的传染性病毒颗粒。

 


关于乙肝肝炎病毒及HBsAgGi


乙型肝炎病毒(HBV)作为一个全球性的健康问题,是传染性最强的病毒之一。

HBV包膜蛋白由三种表面抗原S-、M-和L-HBs组成,它们由含有PreS1、PreS2和S-结构域的HBsAg基因产生1。 HBsAg被 N-聚糖和 O-聚糖高度糖基化2,3。全聚糖结构分析显示,PreS2结构域中,只有在M-HBs上含有基因型C (gC) 中所包含的高度保守的O-糖基化位点,而L-HBs上却没有4,5

HBsAgGi,是能与HBsAg的糖链异构体相结合的重组单抗,其使用含有O型糖链的PreS2糖肽制备所得。与传统的识别所有病毒颗粒的HBsAg检测相比,HBsAgGi抗体可以特异性识别传染性HBV颗粒(DNA病毒粒子)。

 

产品信息


HBsAgGi Recombinant mouse IgG1, 50μg

  产品编号

  635-54381

  对应基因分型

  Genotype C

  同种型(isotype)

  小鼠IgG1

  轻链

  Kappa(κ)   型

  包装

  50   μg

  用途
   

  1.WB
  2.HBV颗粒的免疫沉淀/分离
  3.ELISA
  4.HBV感染抑制测定
  5.免疫组化

  保存方法

  短期请保存于4℃,长期请保存于-20℃,避免冻融。

HBsAgGi可特异性识别HBV颗粒中的M-HBsAg

HBV由衣壳蛋白质(HBsAg),HBV核心,HBV DNA组成。HBsAg的基因由PreS1(蓝),PreS2(红),S(黑)三个领域组成。S-HBsAgs约一半都被N型糖链所修饰,其余不含糖链。而M-HBsAg的PreS2结构域被O型糖链高度修饰,但L-HBsAg在同一位点却几乎不会被修饰。S-HBsAg存在数量最多,非传染性颗粒大部分由S-HBsAg所构成。而传染性HBV颗粒内核含有HBV DNA,被由所有类型的HBsAg所形成的衣壳所包裹。HBsAgGi可特异性的识别在乙肝分型c型M-HbsAg中所特有的O型糖链修饰PreS2领域。


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HBsAgGi与基于S抗体的HBV颗粒识别

HBV患者的血清中含有的HBV DNA的传染性颗粒比非传染性颗粒要多得多。抗S抗体会对包括非传染性颗粒在内的所有HBV颗粒进行识别,而相比之下,HBsAgGi由于是识别含有M-HBsAg的传染性HBV颗粒,因此HBsAgGi检测不同于S抗体检测,可更准确地识别HBV患者。

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在HBV感染患者的血清中,大部分(超过99.9%)的HBV颗粒是亚病毒颗粒(SVP),主要是S-HBs。相比之下,感染性颗粒(DNA 病毒粒子)在整个 HBV颗粒中含量比例不到0.1%。HBsAgGi可以从众多HBV颗粒中,高效区分含DNA颗粒的糖肽结构(粉色标记)。

HBsAgGi 和其他检测HBV的标志物对比


下表对HBV标志物进行了对比。qHBsAg和HBV-DNA是传统标志物,而HBcrAg和 HBV-RNA是新型标志物。列于表中的是目标HBV颗粒或分子。〇代表标志物可检测的颗粒或分子,×代表无法识别此标志物,或不推荐使用。

HBsAgGi 可检测含有 M-HBsAg 的颗粒,例如 DNA 或 RNA 病毒粒子。

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应用实例


使用 HBsAgGi(左)和 PreS2(右)抗体进行Western Blot


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  ・左: HBsAgGi-gC (RCA-001),右: anti-PreS2 antibody

  ・Lane1: S-HBs (CHO) 50 ng

  ・Lane2: M-HBs (HEK293) 50 ng

  ・Lane3: L-HBs (yeast) 50 ng

  ・Lane4: serum (HBV patient) 1 μg

  ・二抗: HRP-labeled anti-mouse IgG

HBsAgGi-gC(左)可以检测出M-HBs但不能检测L-HBs。而市售的PreS2抗体(右)对L-HBs的识别能力很强,对M-HBs的识别能力很弱。在HBV患者的人血清中,HBsAgGi-gC特异性识别M-HBs,而PreS2抗体识别M-HBs和L-HBs。

使用HBsAgGi-gC 包被的ELISA板 (RCEK-001) 和重组M-HBsAg 作为标准品进行ELISA法检测

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  ・标准品: M-HBs (3.7 900 ng/mL)

  ・检测样品: HBV患者血清 (2 µL)

  ・血清 #1: HBsAg 6610 IU/mL, HBV DNA 3.1

  ・血清 #2: HBsAg 8612 IU/mL, HBV DNA 0

  ・血清 #3: HBsAg 36600 IU/mL, HBV DNA 8.3

  ・检测:生物素化 HBsAgGi-gC 抗体和 HRP 标记的链霉亲和素

ELISA板用HBsAgGi-gC包被,用HEK293细胞中表达的M-HBs制备标准曲线。HBV患者的血清(#1-3)经稀释(100 µL中含有2 µL血清)并在同一ELISA板上进行测量。HBsAgGi-gC也可以检测NUC处理后的血清样本(HBV DNA=0)。

使用 HBsAgGi-gC 进行免疫沉淀

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  ・原始样品: HBV 患者血清 (4.1 logIU/20 μL)

  ・免疫沉淀条件:生物素化 HBsAgGi-gC (RCA-001) 2 μg,

 链霉亲和素偶联磁珠10 μL/1 mL TBS-T, 4°C, 16 hours

  ・HBV DNA 的定量:通过实时 PCR 检测20 μL 沉淀部分 

  ・(免疫沉淀) 和上清部分 (Sup) 中的 HBV DNA。

将HBV颗粒稀释至1 mL (4.1 logIU/20 μL) 并通过HBsAgGi-gC沉淀。在这种情况下,HBsAgGi-gC可以收集含有HBV DNA的HBV颗粒。

HBsAg糖链异构体检测用HBsAgGi ELISA试剂盒

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本ELISA试剂盒含有可检测M-HBs的O型糖链糖基化修饰PreS2的单抗,可检测含有DNA的病毒颗粒。

试剂盒规格


  产品编号

  638-54371

  对应基因分型

  Genotype C

  包装

  96 Test

组成

  HBsAgGi 包被96孔板:96 孔 (8孔板×12)

  M-HBsAg标准品 (1 mL)

  HRP标记HBsAgGi (10 mL)

  稀释液 (24 mL)

  TMB底物 (11 mL)

  20X 洗涤液 (50 mL)

  终止液   (12 mL)

ELISA使用方法

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步骤1:HBV DNA颗粒首先被HBsAgGi抗体捕获。

步骤2:洗涤后,ELISA微孔上捕获的HBV颗粒将与HRP标记的HBsAgGi抗体进一步反应。

步骤3:进一步洗涤后,将HRP底物(TMB底物)加入孔中。孵育后,停止反应并测量450nm处的吸光度数值。

标准曲线


将试剂盒中所包含的标准品 M-HbsAg(800ng/mL)梯度稀释,调整为标准M-HBsAg(6.25~400ng/mL)溶液,制作标准曲线。

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使用HBsAgGi ELISA试剂盒进行血清中HBsAgGi检测

 

检测样本:HBV患者3名的血清(1 µL),每个样本分别进行6次实验

标准M-HBsAgs (6.25 – 400 ng/mL)

样品

qHBsAg (IU/mL)

HBsAgGi (µg/mL)

CV (%)

血清 #1

2100

4.5

2.52

血清 #2

8200

8.92

2.65

血清 #3

2200

11.04

1.82

参考文献


1. Schadler and Hildt (2009) Viruses 1:185-209.

2. Schmitt et al. (2004) J Gen Virol 85:2045-2053.

3. Dobrica et al. (2020) Cells 9:1404.

4. Wagatsuma et al. (2018) Anal Chem 90:10196-10203.

5. Angata et al. (2021) Biochim Biophys Acta Gen Subj.  1866:130020  全文


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
635-54381 HBsAgGi Recombinant mouse IgG1 50 μg
638-54371 HBsAgGi ELISA Kit 96 次用