ISOGEN II
总RNA及小RNA提取试剂
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离心后的沉淀
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ISOGEN II 100 mL
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ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体,根据与细胞成分的相互作用,能一步分离RNA。
使用旧产品(ISOGEN和ISOGEN-LS)需要添加氯仿,要进行液相分离,而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后,添加水, DNA、蛋白质、多糖类等沉淀(不溶化),进行离心分离后可以去除(右图)。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后,能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用,也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。
◆特点
• 无需使用氯仿分离RNA
• 相比旧产品(ISOGEN等),小RNA的提取率更高
• 可以把高分子RNA(>200 bases)和小RNA(<200 bases)分离(也有不分离的方案)
• 混入的DNA较少,提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR
• 约一小时内可提取出RNA
◆用途
从活体组织提取RNA等等
◆产品列表
ISOGEN II (10 mL、100 mL)
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产品
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包装
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保存条件
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备注
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ISOGEN II
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1瓶
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2~10°C
(阴暗处)
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非医疗用剧毒物
外观:青色溶液
容器(塑料瓶)外配有袋子。
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运输方法
本品在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用。
◆使用案例
操作流程
・除了本产品,根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管,使用前确认是否能够承受离心强度(12K × g)及ISOGEN II(苯酚)。
・离心操作建议在4-28℃进行。
实验数据
1. 提取的RNA的电泳
2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果(测定吸光度)
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离<改变流程>
Data 1:提取的RNA的电泳
按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序,提取RNA,进行电泳。
琼脂糖凝胶电泳
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M: RNA Ladder (编号:311-06261)
道1:ISOGEN 提取 总RNA (2 μg)
道2:ISOGENⅡ 提取 总RNA (2 μg)
道3:ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2 μg)
道4:ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2 μg)
1.2% Agarose S (甲醛变性)
EtBr 染色
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聚丙烯酰胺凝胶电泳
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道1:ISOGEN 提取 总RNA (5 μg)
道2:ISOGENⅡ 提取 总RNA (5 μg)
道3:ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5 μg)
道4:ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5 μg)
12% 聚丙烯酰胺凝胶 (Urea 变性)
EtBr 染色
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▶ 道1、2中,ISOGENⅡ与ISOGEN一样,可提取全DNA。
▶ 道3、4中,ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。
Data 2:检验miRNA
对使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析
▶ ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。
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Data 3:RT-PCR
使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时,进行不产生RT反应的控制组实验。
PCR条件
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1:模板RNA量 500 ng
2:模板RNA量 100 ng
3:模板RNA量 20 ng
M:Gene Ladder
(编号:316-06951)
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▶ 使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。
Data 4:RNA提取共沉淀剂效果(测定吸光度)
ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时,对使用共沉淀剂Ethachinmate(Nippon Gene 产品编号:312-01791)或者Glycogen(和光纯药工业 产品编号:077-05311)时提取到小RNA情况进行了比较。
方法
按照使用指南,从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA,检测吸光度,计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1,在图表中列出了含量的相对值。
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▶ 使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多,变异较少。
Data 5:RNA取量的基准
实验材料
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高分子 RNA 的离析
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总 RNA的离析
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组织
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肝脏
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5~7 µg RNA/mg tissue
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6~8 µg RNA/mg tissue
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肾脏、脾脏
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3~4 µg RNA/mg tissue
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3~4 µg RNA/mg tissue
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骨骼肌脑、肺
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0.5~1.5 µg RNA/mg tissue
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0.5~1.5 µg RNA/mg tissue
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胎盘
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1~3 µg RNA/mg tissue
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1~3 µg RNA/mg tissue
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培养细胞
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上皮细胞
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5~8 µg RNA/106 cells
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5~10 µg RNA/106 cells
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成纤维细胞
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3~5 µg RNA/106 cells
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4~6 µg RNA/106 cells
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Data 6:使用ISOGEN II从植物提取总RNA
从植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)
Data 7:使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离<变化流程>
从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)
◆注意事项
• 本品是实验研究用的试剂,不能作为医药品或其他目的使用。另外,如果您对试剂的基本的知识不了解,请不要使用。
• ISOGEN II是非医疗用剧毒物(苯酚制剂),请小心操作。
• 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。
• 操作场所保持通风,以免吸入蒸汽。
• 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗15分钟或以上,并及时就诊。
• 请按照说明书进行操作。
• 对于因不按照说明书操作而导致的事故,Nippon Gene不负任何责任。
◆备注
本产品是实验研究用试剂,请勿用作医疗用途。