Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒深红色荧光货号15295-AAT Bioquest荧光染料

发表于2023年11月23日由上海金畔生物科技有限公司

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Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒深红色荧光

货号	15295	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	6432
Ex (nm)	593	Em (nm)	655
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒深红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter™细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒提供了监测远光谱中活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，并且可以与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。 JJ1902 NAD（P）H是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JJ1902 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy5®过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒。

适用仪器

荧光显微镜
激发：	590nm
发射：	655nm
推荐孔板：	黑色透明
滤波片：	Cy5滤波片组

产品说明书

实验样品示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃孵育20 – 30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 590/655 nm（截止= 610 nm）或使用Cy5®过滤器的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.制备工作溶液

将10μL JJ1902 NAD（P）H探针储备溶液（组分A）加入2.5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。该JZL1707 NAD（P）H探针工作溶液在室温下1小时内稳定。

注意：40μL的JZL1707 NAD（P）H传感器原液足以用于一个板

2.实验步骤

①刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也是兼容的。探针的条件优化是强烈推荐的细胞系到细胞系。

②在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液。将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃共孵育20-30分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共培养30分钟。详细信息请参见图1。

③用所需缓冲液洗涤细胞一次。移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

④使用底板读取模式在Ex / Em = 590 / 655nm（截止= 610 nm）下使用酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy5®过滤器过滤器获取图像。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

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产品名称	货号
Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒	Cat#15290

说明书

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Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒深红色荧光货号15296-AAT Bioquest荧光染料

发表于2023年11月23日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒深红色荧光

货号	15296	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	100 Tests	价格	6432
Ex (nm)	593	Em (nm)	655
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平升高与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，检测细胞内NAD具有挑战性。（P）H在生物系统中。Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测远光谱活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，可与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。JJ1902 NAD（P）H探针是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H探针可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。

适用仪器

流式细胞仪
激发：	640nm激光
发射：	660/20nm滤波片
通道：	APC通道

产品说明书

实验样品示例

概述

1.准备细胞（0.5 – 1×10⁶细胞/ mL）

2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.使用APC通道用流式细胞仪分析细胞

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中，密度为1×105至1×10⁶个细胞/ mL。

注意1：应对每个细胞系进行单独测评，以确定最佳细胞密度。对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。

注意2：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也兼容。

2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。

注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。优化每个实验的孵育时间。

3.将1μL JJ1902NAD（P）H探针（组分A）加入0.5 mL细胞悬浮液中。在37℃下孵育30-60分钟。

注意对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共温育30分钟。详细信息请参见说明书中的图1。

4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。

5.使用流式细胞仪监测APC通道的荧光强度。

参考文献

相关产品

产品名称	货号
Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒	Cat#15291

说明书

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒深红色荧光 .pdf

NAD/NADH 測定キット NAD/NADH Assay Kit-WST　同仁化学研究所

发表于2023年9月14日由上海金畔生物科技有限公司

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NAD/NADH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

NAD/NADH Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

NAD/NADH 測定キット

製品コード

N509　 NAD/NADH Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥55,800	347-09321

キット内容

100 tests	・NAD/NADH Extraction Buffer ・NAD/NADH Control Buffer ・Standard Buffer ・Assay Buffer ・Dye Mixture ・Enzyme ・Standard ・Filtration Tube	20 ml×1 20 ml×1 10 ml×1 5.5 ml×1 550 μl×1 x1 x1 x12

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

NAD⁺とNADHの測り分け操作

本キットに含まれる抽出バッファーと、除タンパク質用チューブを用いて簡便に培養細胞から細胞ライセートを調製できます。また細胞ライセートを加熱処理することで、細胞内 NADH量のみを定量することができ、別途測定した総 NAD⁺/NADH 量からNADH 量を差し引くことで、細胞内 NAD⁺量を求めることができます。

NAD/NADH 測定キット NAD/NADH Assay Kit-WST　同仁化学研究所

本キットではn=3で12サンプルと標準サンプル8点の測定が可能です。12サンプル以上を使用する際には、別途フィルトレーションチューブをご準備頂く必要があります。

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

NAD/NADH 測定キット NAD/NADH Assay Kit-WST　同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	オルガノイド（老齢マウス腸上皮オルガノイド）	R. Uchida, Y. Saito, K. Nogami, Y. Kajiyama, Y. Suzuki, Y. Kawase, T. Nakaoka, T. Muramatsu, M. Kimura and H. Saito , "Epigenetic silencing of Lgr5 induces senescence of intestinal epithelial organoids during the process of aging", NPJ Aging Mech Dis., 2018,doi：10.1038/s41514-018-0031-5.
2)	細胞（成人 T 細胞白血病細胞株）	T. Kozako, A. Aikawa, T. Ohsugi, Y. Uchida, N. Kato, K. Sato, K. Ishitsuka, M. Yoshimitsu and S. Honda, "High expression of NAMPT in adult T-cell leukemia/lymphoma and anti-tumor activity of a NAMPT inhibitor', Eur. J. Pharmacol.., 2019, 865, 172738.
3)	細胞（Sirt 7ノックアウト線維芽細胞）	S. U. Sobuz, Y. Sato, T. Yoshizawa, F. Karim, K. Ono, T. Sawa, Y. Miyamoto, M. Oka and K. Yamagata, "SIRT7 regulates the nuclear export of NF-κB p65 by deacetylating Ran.', Biochim Biophys Acta Mol Cell Res.., 2019, 1866(9), 1355.
4)	細胞（ヒトiPS由来神経細胞）	K. Hayakawa, K. Nishitani and S. Tanaka, "Kynurenine, 3-OH-kynurenine, and anthranilate are nutrient metabolites that alter H3K4 trimethylation and H2AS40 O-GlcNAcylation at hypothalamus-related loci.", Sci Rep, 2019, 9(1), 19768.
5)	細胞（HuH-7）	M. Mikeli, M. Fujikawa, K. Nagahisa, S. Yasuda, N. Yamada and T. Tanabe, "Contribution of GPD2/mGPDH to an alternative respiratory chain of the mitochondrial energy metabolism and the stemness in CD133-positive HuH-7 cells.", Genes Cells, 2020, 25(2), 139.
6)	細胞（HeLa）	J.Thapaa, K. Hashimoto, S. Sugawara, R. Tsujikawa, T. Okubo, S. Nakamura and H.Yamaguchi, "Hypoxia promotes Chlamydia trachomatis L2/434/Bu growth in immortal human epithelial cells via activation of the PI3K-AKT pathway and maintenance of a balanced NAD⁺/NADH ratio", Microbes Infect., 2020, DOI:10.1016/j.micinf.2020.04.010.

よくある質問

Q 1キットで測定可能なサンプル数は？

全てのサンプルをn:3で測定した際のサンプル数の目安は下記の通りです。

	『NAD⁺とNADHの総量』または『NADH量』の何れかを測定する場合	『NAD⁺とNADHの総量』および『NADH量』の両方を測定する場合
サンプル数	24サンプル	12サンプル

　※標準サンプルを2 μmol/Lから段階希釈し、計8点(n:3)で検量線を1回作成した際に測定可能な実サンプル数を記載。
　　測定を2回に分けて行う場合は、別途検量線を作成する必要があるため上記サンプル数よりも少なくなります。

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか?: A

450 nm以外では、490 nmのフィルターでの使用が可能です。

ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。

それぞれの吸収フィルターで測定した時の検量線は下記の通りです。

Q Filtration Tube（除タンパク質用）は別途購入できますか？: A

ご不便おかけしますが、Filtration Tubeのみの販売は行っておりません。

小社にて実績のある市販の除タンパク質用チューブをご紹介いたします。

製造メーカー：Pall Corporation

製品名：ナノセップ遠心ろ過デバイス（分画分子量：10K、色：ブルー）

Q Working solutionはどのくらい安定ですか?: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に対して不安定なため

溶液調製後は遮光して下さい。遮光、室温で4時間安定です。

Q サンプルが発色しない原因はありますか？: A

測定試料中に含まれているNAD量が、本キットで定量可能な濃度以下となっている可能性があります。

その場合は細胞数を増やして頂くか、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げて測定して下さい。

Q 組織を用いた実験例はありますか？: A

マウス肝臓組織を用いてNAD/NADHおよびATPを測定した事例がございます。
実験操作の詳細は下記をご参照ください。

アルカリ抽出法による肝臓サンプルからの代謝指標の抽出
1. マウス肝臓100 mgあたり500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液を入れる。
　*使用する組織は必ず灌流操作等で十分に脱血してください。血液の残存は測定に影響を与えます。

2. ダウンス型ホモジナイザーで組織を破砕する。
　*氷浴上で行ってください。

3. サンプルを回収し、サンプルチューブに移す。破砕に使用した容器を500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液で共洗いし、チューブ内のサンプルと合わせる。（全量 1 ml）

4. 冷えた超純水 1 mlをサンプルチューブに加え、よく混合し氷上で5分間静置する。（全量 2 ml）
　*溶液の粘性が高いと、次操作の遠心後の分離が困難になる場合があります。その際は、シリンジに25 G(針のゲージ数)程度の細い針を付け、サンプル溶液をシリンジでスムーズに出し入れができるまで(20-30回)混合してください。

5. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清を900 µlずつ二つのサンプルチューブに回収する。
　*１本をNAD/NADH測定、もう１本をATP測定に使用。NAD/NADHのみを測定する場合は900 μlx1本のみで構いません。

NAD/NADH測定用サンプルの調製
*取扱説明書の1. 測定用サンプルの調製の(5)から行う。
*希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH₂PO₄水溶液を9:5の比率で混合したものを準備しておく。

6. 上記5. で調製したサンプルのうち450 µlをMWCO 10Kフィルトレーションチューブに移し、 15,000 x gで20分間遠心する。
　*遠心後の溶液が200 µl以上ない場合は遠心時間を延長してください。

7. 得られた濾液を、1.5 ml マイクロチューブ2 本に100 μl ずつ移し、総NAD⁺/NADH 量およびNADH 量測定試料とする。

8. NADH 量測定試料を60 ℃ で60 分間インキュベートし、測定サンプルを室温まで冷却する。

9. 調製後の総NAD⁺/NADH 量およびNADH 量測定試料が入ったチューブそれぞれに、22 µlの1 mol/l KH₂PO₄水溶液を入れて中和後、78 µlの希釈用溶液（KOHとKH₂PO₄の混合溶液)を加えてよく混合し、測定用サンプルとする（total 200 µl）。

<測定時の注意点>
*操作5、7で得たサンプルは保存できません。その日のうちに測定してください。
*スタンダード、サンプルの希釈には希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH₂PO₄水溶液を9:5の比率で混合したものを使用してください。

＜測定例＞
NASH誘導マウス肝臓組織におけるNAD量の変化