EnGen 突变检测试剂盒–NEB酶试剂

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen 突变检测试剂盒                              收藏

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#E3321S
25次反应
2,489.00元

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特性

· 基于 T7 核酸内切酶的基因编辑检测

概述

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步,首先使用
Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域(即通过 CRISPR/Cas9、
TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域),经退火、延伸步骤后,形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后,基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步,将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶,可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时,DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。
 
EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液,可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后,部分会形成含有10个碱基的插入突变,此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物,600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段;而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源(野生型)和异源(突变)片段。
 
试剂盒的实验流程经过优化,通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。 异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割,随后用蛋白酶 K 将反应终止。 此外, Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于优化靶点扩增的实验 。
 
图1: 实验流程

EnGen 突变检测试剂盒--NEB酶试剂

将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧,PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸内切酶 I 切割(多于1个碱基错配的双链 DNA),经电泳分离和片段分析后,估算出基因编辑效率。

Engen 突变检测试剂盒组分

– Q5 热启动超保真聚合酶 2X 预混液
– NEBuffer 2
– EnGen T7 核酸内切酶 I
– 对照模板和引物预混液
– 蛋白酶 K.,分子生物级
– Quick-Load® 紫色 2-Log DNA Ladder (0.1 – 10.0 kb)
– 紫色凝胶上样染料 6X,无 SDS

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。