McrBC–NEB酶试剂

产品资料 – 表观遗传学 – 甲基化依赖型限制性内切酶

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识别位点

McrBC--NEB酶试剂

特性

 测定 CpG 二核苷酸的甲基化状态
 测定胞嘧啶甲基化的 DNA
McrBC--NEB酶试剂
与 McrBC 一起温育的人类和果蝇基因组 DNA。在脊椎动物中估计有 60-90% 的 CpGs 是被甲基化的(6),而果蝇 DNA 中甲基化的 CpGs 非常稀少(大约 12.5 kb 的 DNA 中仅出现一个甲基胞嘧啶,7)。泳道 1:人类 DNA;泳道 2:与 McrBC 一起温育的人类 DNA;泳道 3:果蝇DNA;泳道 4:与 McrBC 一起温育的果蝇 DNA;泳道 M:BstEII 消化的 λDNA(NEB #N3014)。

概述

McrBC 是一种核酸内切酶,无论甲基胞嘧啶* 是在 DNA 的一侧链上还是在对侧链上,McrBC 都能切割。对未甲基化的 DNA,Mc rBC 无作用。DNA 上 McrBC 的识别位点由两个 (G/A)mC 形式的半位点组成,这两个半位点之间的距离可以达到 3 kb,但是最佳距离为 55-103 bp。McrBC 的切割需要 GTP,当存在不可水解的 GTP 类似物时,该酶可以特异地结合到甲基化 DNA 上,但不能进行切割。McrBC 作用于一对 PumCG 序列元件,以此检测高比例甲基化的 CpGs,但是不能识别内部胞嘧啶甲基化了的 HpaII/MspI 位点(CCGG)。
* 5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶或者 N4-甲基胞嘧啶。

来源

两种组成蛋白分别纯化自含有编码 McrB 和 McrC 质粒的 E.coli K-12 菌株。

反应条件

NEBuffer 2 + BSA + GTP,37℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X NEBuffer 2
100X BSA
100X GTP (100 mM)
对照质粒 DNA

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系中,37℃ 条件下,1 小时切割 0.5 μg 含有多个 McrBC 位点的质粒所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

注意事项

McrBC 在每对半位点之间切割一次,切割位点靠近某一个半位点,但是通常距最近的甲基化碱基大约 30 bp。因此,当 DNA 中存在多个 McrBC 半位点时(例如胞嘧啶甲基化基因组DNA),识别序列的可变性导致位点重叠,产生弥散状而不是细窄的条带。

参考文献

有关该产品性质和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。