LabAssay™ ALP 

LabAssay™ 碱性磷酸酶检测试剂盒

碱性磷酸酶的活性检测试剂盒，常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶（ALP）广泛分布于肝脏、骨和小肠之中。组织中酶活性的变化是成骨等生理现象的重要标志。在骨代谢研究领域被用作骨形成指标之一。

本产品是以对硝基苯磷酸盐为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，通过使用酶标仪进行多样品检测。

 

◆检测原理

碱性磷酸酶存在下，碳酸盐缓冲溶液（pH 9.8）中的对硝基苯磷酸盐分解成对硝基苯酚和磷酸，产生的对硝基苯酚在碱性条件下呈黄色。通过测量405 nm处的吸光度，可以计算样品中的碱性磷酸酶活性。

◆产品性能

检测范围：>0.06 mmol/L

标准曲线范围：0.0625~0.5 mmol/L

重复性：C.V.<10%

样品：血清（小鼠、大鼠、人）

所需样品量：20 μL

检测时间：约20min

检测波长：405 nm

◆试剂盒成分

底物片（溶解时对硝基苯基磷酸二钠 6.7 mmol/L)	10 片
底物溶解buffer （2.0 mmol/L 氯化镁 含有 0.1 mol/L 碳酸盐缓冲液 pH 9.8)	50 mL × 1瓶
反应终止液（0.2 mol/L氢氧化钠溶液）	50 mL × 1瓶
标准溶液　(0.5 mmol/L 对硝基苯酚溶液）	5 mL × 1瓶

◆标准曲线示例

◆检测操作方法

根据下表中的条件进行反应。

	Test	标准	空白
底物缓冲液	100 μL	100 μL	100 μL
待测物	样品20   μL	标准溶液20   μL	蒸馏水   20 μL
孔板混匀仪中震荡1   min，37°C下孵育15 min。
反应终止液	80 μL	80 μL	80 μL
孔板混匀仪中震荡1   min，使用酶标仪测量405 nm处吸光度

◆数据

加标回收测试

ALP的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。

●　人血清样品

添加量(mmol/L)	平均值(mmol/L)	回收量(mmol/L)	回收率（%）
－	0.429	－	－
0.097	0.527	0.098	101
0.197	0.587	0.158	80.2
0.297	0.672	0.243	81.8
0.507	0.866	0.437	86.2

●　小鼠血清样品

添加量(mmol/L)	平均值(mmol/L)	回收量(mmol/L)	回收率（%）
－	0.284	－	－
0.060	0.343	0.059	98.3
0.127	0.399	0.115	90.6
0.251	0.507	0.223	88.8
0.500	0.753	0.469	93.8

●　大鼠血清样品

添加量(mmol/L)	平均值(mmol/L)	回收量(mmol/L)	回收率（%）
－	0.374	－	－
0.060	0.439	0.065	108.3
0.127	0.483	0.109	85.8
0.251	0.598	0.224	89.2
0.500	0.855	0.481	96.2

稀释线性度测试

使用随附的缓冲液制备样品，使其处于检测范围内，用缓冲液连续梯度稀释4次，并检测结果。

●　人血清样品

●　小鼠血清样品

●　大鼠血清样品

样品检测案例

●　人样品

样品	检测值 (mean)	SD	CV (%)
混合血清，男性	0.556	0.003	0.5
混合血浆(EDTA)，男性	0.07	0.001	1.2

※抗凝固剂的EDTA会产生负误差，所以请不要使用。

●　小鼠样品：CD-1(ICR)、雄性、血清

样品	检测值 (mean)	SD	CV (%)
No.1	0.31	0.013	4.2
No.2	0.453	0.001	0.2
No.3	0.495	0.015	3
No.4	0.442	0.013	2.9
No.5	0.373	0.002	0.5

●　大鼠样品：SD、雄性、血清

样品	检测值(mean)	SD	CV (%)
No.1	0.538	0.005	1
No.2	0.441	0.01	2.2
No.3	0.357	0	0
No.4	0.46	0.002	0.5
No.5	0.301	0.011	3.6

单位：mmol/L, n=2

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※ 产品已更新，旧编号为：291-58601

参考文献

●　Ito, S. et al. : J. Pharmacol. Exp. Ther., 333, 341 (2010).　※小鼠肾组织提取液

●　Matsuyama, A. et al. : Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 45, 75 (2018).　※MC3T3-E1细胞, C2C12细胞

●　Chiba, T. et al. : J. Atheroscler. Thromb., 23, 1099 (2016).　※小鼠血浆

●　Kohno, Y. et al. : Stem Cell Res. Ther., 8, 115 (2017).　※骨膜间充质干细胞

●　Iwakura, T. et al. : J. Orthop. Res., 27, 208 (2009).　※人培养细胞提取液

●　Furuya, Y. et al. : J. Biol. Chem., 286, 37023 (2011).　※小鼠血清

●　Itoh, T. et al. : J. Biol. Chem., 284, 19272 (2009).　※小鼠培养细胞提取液