StemSure® 细胞冻存液 人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用

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人iPS 细胞·小鼠 ES 细胞冻存用StemSure® 细胞冻存液                              人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用

StemSure® 细胞冻存液 Update!!

  


  本产品是可用于冻存以小鼠 ES 细胞为代表的各种通用细胞株的无血清型细胞冻存液。含 BSA 和 10% DMSO 。标准测试中用小鼠 ES 细胞 D3 株冻存、复苏,确认其细胞存活率。本产品采用缓慢冻存法冻存细胞,无需使用程序降温盒。

  使用本产品对小鼠 ES 细胞 D3 株在 -80℃ 进行保存,可冻存2年;普通细胞在 -150℃ 下可冻存 30 个月,并且可维持很高的存活率。

  另外,本产品已确认可用于冻存人 iPS 细胞

 


◆特点


●  可在维持人 iPS 细胞、小鼠 ES 细胞未分化能力的状态下,直接进行冻存。

●  可在 -80℃ 下进行长时间冻存。

●  冻存的通用动物细胞株的细胞存活率好。

●  无血清型

●  无需自行配制试剂

●  无需使用程序降温盒

 


◆测试项目


●  细胞存活率时间(使用小鼠 ES 细胞 D3 株进行实验)

●  无菌实验

●  内毒素实验

●  支原体实验


 

◆使用方法


人 iPS 细胞的冻存


1.    冻存

①    去除人 iP S细胞培养皿中的营养液,用 PBS 清洗后,用 Accutase 等剥离细胞。

②    添加含有 10 μmol/L Y-27632的人 iPS 培养基(hPSC 培养基(+ROCKi)),用移液器吹打成单细胞。

③    将吹打分散的细胞悬浮液移至样本管,离心(1,000 rpm,3 min,室温)后去除上清液。

④    添加含 hPSC 培养基(+ROCKi)的培养基,用移液器悬浮。

⑤    计算细胞数量。

⑥    以1×10cells/管分注在细胞悬浮液保存管中。

⑦    离心(1,000 rpm,3 min,室温)后去除上清液。

⑧    使用 50 μL/管本产品进行悬浮,在 -80℃ 下进行冻存。


2.    复苏

①    在冻存管中添加 hPSC 培养基(+ROCKi),复苏冻结细胞(不使用温水浴法)。

②    离心(1,000 rpm,3 min,室温)后去除上清,再次添加 hPSC 培养基(+ROCKi),悬浮。

③    计算细胞数量。

④    在培养皿中按照2×10cells/6 cm 进行细胞培养。



小鼠ES细胞、通用动物细胞株的冻存


1.    冻存

①    收集细胞至样本管中。

②    离心,去除上清。

③    在样本管中加入本产品,悬浮。

④    分注至悬浮液保存管中。

⑤    将保存管在-80℃冻洁一晚。

⑥    保存于-150℃或-80℃


2.    复苏

①    将冻存管置于37℃的水浴槽中解冻。

②    在培养用的培养基中进行悬浮。

③    离心去除上清后用培养基进行重悬。

④    在培养容器内培养细胞。

 


◆人iPS 细胞 201B7 细胞系的冻存 Update!!

  

  将人 iPS 细胞 201B7 株分散为单细胞后,在 StemSure® 冻存液中悬浮,并在-80℃下冻存4天。反复冻结、复苏3次之后,确认细胞存活率和各种未分化标记(Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81)的表达。



细胞生存率


StemSure® 细胞冻存液                              人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用



未分化标记表达的确认


StemSure® 细胞冻存液                              人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用

◆小鼠 ES 细胞 D3 细胞系的冻存


-150℃保存(30个月)


StemSure® 细胞冻存液                              人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用



-80℃保存(24个月)


StemSure® 细胞冻存液                              人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用



<冻存>

①    在 1 mL本产品中悬浮1~2×10cells,分注至冻存管中。

②    在 -80℃冻存1天后转移至-150℃冻存。或者在-80℃冻存。

<复苏>

③    在37℃的温浴槽中复苏。

④    在细胞培养基中悬浮、离心。

⑤    弃上清,用细胞培养基重悬细胞并进行培养。

 

○确认细胞集落形成

培养细胞数:500个细胞/孔(含胶原蛋白涂层的6孔板)

培养时间:10天

 

 

◆冻存通用动物细胞系后的细胞存活率

  

  用 StemSure® 细胞冻存液冻存各种动物细胞株。可确认到冻存30个月后仍维持高存活率,且复苏后细胞可移植。

细胞种类

存活率(%)

细胞移植

2个月

4个月

30个月

HeLa

97

93

97

293T

96

95

95

K562

91

84

84

灵长类

COS-7

97

93

92

Vero

95

94

91

MDCK

98

99

100

小鼠

NIH/3T3

93

93

89

P19

93

76

77

STO

90

91

91

L929

94

90

91

仓鼠

CHO

97

96

98



<冻存>

①    在 1 mL本品中悬浮 1~2×10cells,分注至冻存管中。

②    在-80℃冻存1天后转移至-150℃分别冻存2个月、4个月、30个月。


<复苏>

③    在37℃的水浴槽中复苏。

④    细胞培养用培养基中悬浮、离心。



★其他冻存液★

产品编号

产品名称

规格

容量

031-24051

CultureSure® DMSO
CultureSure® 二甲基亚砜

细胞培养用

10 mL×10

039-23511

CultureSure® Freezing Medium
通用动物细胞用冻存液

细胞培养用

10 mL



◆相关产品


★StemSure® 系列★


  本系列产品适用于培养 ES 细胞和 iPS 细胞。每个批次产品都适用小鼠 ES 细胞 D3 细胞系进行品质实验检测。


产品编号

产品名称

规格

容量

197-16275

StemSure® D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate
StemSure® D-MEM(高糖)含酚红和丙酮酸钠

细胞培养用

500 mL

191-18375

Stemsure® Serum Replacement  
Stemsure® 血清替代品

细胞培养用

500 mL

198-15781

StemSure® 10 mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution ( × 100)
StemSure® 10 mmol/L 2-巯基乙醇 

细胞培养用

100 mL

195-15791

StemSure® 50 mmol/L Monothioglycerol Solution ( × 100)
StemSure® 50 mmol/L 硫代甘油

细胞培养用

100 mL

190-15805

StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution
StemSure® 0.1w/v%明胶溶液

细胞培养用

500 mL

199-16051

StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution
StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠,重组

细胞培养用

106 units

195-16053

StemSure® LIF, Mouse,recombinant, Solution
StemSure®   白细胞抑制因子溶液,小鼠,重组 

细胞培养用

106 units×10



★rBC2LCN-FITC★


  rBC2LCN 可特异性识别未分化的人ES/iPS细胞。将本产品添加至含有人ES/iPS细胞的培养液中,可对活性状态下的未分化细胞进行染色。<详情>



★液体培养基·细胞培养用试剂★


  FUJIFILM Wako 充分准备了以液体培养基为代表的平衡盐溶液、细胞分离·分散用溶液、抗生物素溶液、细胞外基质等产品。<详情>



★ES·iPS细胞研究用试剂★


  2007年 iPS 细胞树突发表后,许多与iPS细胞有关的文献被发表出来。FUJIFILM Wako 推出了在各个文献中都有所报道的与维持ES细胞·iPS细胞的未分化能和分化诱导相关的低分子化合物。<PDF下载>



★LIF,人,重组体,培养上清★


  LIF 具有抑制小鼠 ES 细胞分化的作用,因此可在培养细胞时,用来维持 ES 细胞的未分化状态。<详情>

无动物源成分的干细胞冻存液,请点击:StemSure® hPSC冻存液, AF



产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
195-16031  StemSure Freezing Medium
StemSure细胞冻存液
100 mL