Ethachinmate共沉淀剂 Ethachinmate

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Ethachinmate共沉淀剂Ethachinmate共沉淀剂                              Ethachinmate

Ethachinmate

◆原理

       共沉淀剂 Ethachinmate 是基因工程学的标准时机。作为畅销产品,效果显著。
       Ethachinmate 适用于核酸(DNA 与 RNA)乙醇或 isopropanol 沉淀时的丙烯酰胺系高分子载体溶液,在盐类存在的情况下(例如 >0.1 mol/L Sodium Acetate)加上 Ethachinmate 进行酒精沉淀,能得到如下优点。

 

◆优点特色

● 可回收微量核酸
   可定量性回收 20 ng/mL 以上的 DNA(>100个碱基对及(>120个碱基
● 乙醇沉淀迅速
   无需-20℃或-80℃孵化,添加乙醇后可直接离心。
● 酶反应无障碍
   回收的核酸,在水及缓冲液中容易溶解。混在一起的 Ethachinmate 完全不阻碍酶反应。
● 沉淀可观察到
  
由于 Ethachinmate 本身会通过酒精沉淀形成沉淀,因此,即使是在只有微量核酸的情况下,也无需担心重要的样本被冲洗掉。


无DNase,RNase活性测试剂

 

用一下 DNase 及 RNase free 方法可确认是否含有 Ethachinmate

 

DNase 实验:向1 μgλ/Hin d III 中加入3 μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时候,进行琼脂糖凝胶电泳,图像确认无变化。

RNase 实验:向 2 μg 16S 及 23S 的 rRNA 中加入3 μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时后,进行琼脂糖凝胶电泳,图像确认无变

                      化。

 

 

使用方法


DNA 或者 RNA 溶液(100 μL)

↓  ←3 mol/L Sodium Acetate(添加),3,3 μL *1)

↓  ←Ethachinmate 1 μL *2)

↓  ←涡流

↓  ←2~2.5 倍量的乙醇

↓  涡流 *3)

↓  10 kg x g 室温下反应5分钟 *4)

沉淀 *5)

 

 

*1)(氯)盐的最终浓度必须在 0.1 mol/L 以上

*2)每 100μL DNA 或 RNA 溶液中加入1 μL  Ethachinmate。但溶液量为 300 μL 以上时,加入 3 μL 可达到饱和。而且再次进行上述操作时,

       无需添加 Ethachinamte。(若反复添加 Ethachinmate 会导致 DNA 溶液变黏稠,影响到后面的操作。)

*3)进行充分混匀,可实现微量 DNA 的定量回收。

*4)不必进行冷却。

*5)沉淀可目测。溶解于其他缓冲液等中,可直接作为各种酶底物使用。而且,必须用70%的乙醇进行洗涤。

Q:    有没有 DNase、Rnase 杂质?
A:    没有。Ethachinmate 用以下的方法可以确认无 DNae、RNase 活性。
          Dnase 实验:向1 μg的/Hin d III 中加入3 μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时候,进行琼脂
糖凝胶电泳,图像确认无变化。

          RNase 实验:向2 μg 16S及23S 的 rRNA 中加入3μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时后,进行琼脂糖凝胶电泳,图像确认

                                变化。


Q:    可以使用 RNA 回收吗?
A:    没有问题。

Q:    高效回收的核酸浓度和核酸链长度是多少?
A:    可回收几乎所有的 20 ng/mL 以上的 DNA(100 bp 以上)及 RNA(120 base 以上)。

Q:    260 nm 的吸光度会影响定量吗?
A:    无影响。

Q:    100 μL DNA 溶液对应加入1 μL Ethachinmate。若 DNA 溶液少于 100 μL,应该怎样做才好?
A:    请加入1 μL Ethachinmate。为了 DNA 沉淀可目测,需要 1 μL 以上的 Ethachinmate。另外,3M Sodium Acetate 及 1 μL 的

          Ethachinmate。


Q:    300 μL 以上的 DNA 溶液,Ethachinmate 的添加量是多少?
A:    DNA 溶液为300 μL以上,无论 DNA 溶液的量是多少,都请加入 3 μL Ethachinmate。无需加入过量的 Eth-
achinmate。另外,3M  

          Sodium Acetate 请按此比例换算适量添加。

          例:DNA 溶液为 600 μL,则加入 19.8 μL的 3M Sodium Acetate 及 3 μL 的 Ethachinmate。


Q:    DNA 溶液进行2次以上乙醇沉淀时,最好第二次以后也每次加上 Ethachinmate 吗?
A:    Ethachinmate 添加一次无需再添加,如果重复添加 Ethachinmate,DNA溶液会变得黏稠,将阻碍以后的
操作。


Q:    冷冻时,会不会影响 Ethachinmate 的效果?
A:    不会。

Q:    高压处理会不会影响 Ethachinmate 的效果?
A:    不会。

Q:    如果用苯酚/氯仿处理含 Ethachinmate 的 DNA 溶液,会不会影响 Ethachinmate 的效果?
A:    不会。

Q:    对电泳模型有没有影响?
A:    没有,但根据电泳条件的不同,数十kbp以上的 DNA 会产生宽频带条。

Q:    对限制性内切酶反应有没有影响?
A:    没有。

Q:    对 T4 DNA Ligase 反应有没有影响?
A:    没有。

Q:    对 AMV Reverse Transcroptase 的 cDNA 合成反应有没有影响?
A:    没有。

Q:    对使用 Taq DNA Polymerase 的 PCR 反应有没有影响?
A:    没有。

Q:    对 Klenow Flagment 反应有没有影响?
A:    没有。

Q:    对大肠杆菌的转化有没有影响?
A:    没有。

Q:    对 in vitro 组装有没有影响?
A:    λ 噬菌体的 in vitro 组装效率稍微下降。

Q:    加入 Ethachinmate,乙醇沉淀会形成核苷酸沉淀吗?
A:    使用 8 mer 及 17 mer 的的低聚核苷酸进行实验,与是否添加 Ethachinmate 无关,回收率没有变化。

Q:    在含有甲酰胺的杂交溶液中有无变性吗?
A:    无变性。

Q:    对 blotting 有没有影响?
A:    没有。

Q:    对序列反应有没有影响?
A:    不影响使用 ABI Prism 377 的周序列反应。对脱氧发的序列反应也没有影响。

Q:    添加 Ethachinmate 是否有助于从管中脱落沉淀?
A:    要看管的材质。比如 Eppendorf 公司制的 Safe-Lock 管有容易脱落的倾向。


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
312-01791 Ethachinmate
乙醇沉淀核酸载体
0.2 mL
318-01793 Ethachinmate
乙醇沉淀核酸载体
0.02 mL