残留DNA提取&检测系列

在生物制药的生产过程中，宿主细胞携带的残留DNA可能会带来致癌性、传染性和免疫调控风险。

因此需要对生产过程来源的杂质进行管理。世界卫生组织（WHO）、美国食品药品监督管理局（FDA）和欧洲药典（EP）为最终的宿主来源残留DNA含量限制提供了指南标准，即应当少于10 ng/剂或100 pg/剂。

针对提取/纯化残留DNA，FUJIFILM Wako可提供符合中国药典标准的的残留DNA提取试剂盒（碘化钠法）；此外，针对残留DNA定量检测，FUJIFILM Wako可提供定量检测CHO细胞残留DNA的qPCR试剂盒——QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for CHO cells。

QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for CHO cells

QCdetect™ 残留DNA检测试剂盒，CHO细胞用

本试剂盒可通过qPCR法（探针法）定量CHO细胞来源基因组DNA。

适用于抗体药及其生产工艺中残留DNA的检测。

●　高灵敏检测：≥0.0003 pg ●　高线性的标准曲线 ●　误差小，再现性高 ●　使用预混合缓冲液，操作简单 ●　不易受样品所含杂质的影响 ●　含Internal Control（内标）

◆标准曲线示例

使用本产品对0.0003 pg~30,000 pg范围内的CHO gDNA进行qPCR检测，并制备标准曲线（n=3）。

在0.0003 pg~30,000 pg 这一广泛的浓度范围内，也能获得高线性的标准曲线。

pg/well	0.0003	0.003	0.03	0.3	3	30	300	3000	30000
Ct	37.639	34.822	31.546	28.117	24.809	21.337	18.079	14.726	11.506
	37.107	34.981	31.506	28.324	24.906	21.416	18.084	14.744	11.467
	37.642	34.689	31.595	28.267	24.987	21.533	18.225	14.807	11.269
Average Ct	37.462	34.83	31.549	28.236	24.901	21.428	18.129	14.759	11.414
S.E	0.30806	0.14652	0.04455	0.10713	0.08904	0.09853	0.0831	0.0424	0.12685

◆DNA片段的检测

为了测试本产品能否检测CHO gDNA，超声处理CHO gDNA使其片段化，并使用本试剂盒进行检测。

能以与完整gDNA相同的灵敏度来检测片段化的gDNA。此外，在低浓度的gDNA下也并未观察到检测灵敏度的下降。

◆含高浓度蛋白样品的应用示例  —配合使用DNA Extractor^® Kit —

向含有高浓度γ-球蛋白的样品中添加CHO gDNA，使用DNA Extractor^® Kit提取DNA。之后，使用本产品定量所得DNA，计算加标回收率。

▶ 样品组成 ● 20 mg/mL γ-球蛋白 ● 3%甘露醇 ● 2%蔗糖 ● 10 mM L-精氨酸 ● 0.01% Tween20

▶添加的CHO gDNA浓度 10 ng/mL 1 ng/mL 100 pg/mL

结果表明，对于含有高浓度蛋白的样品，CHO gDNA也能获得高回收率。

◆试剂盒组成

● 1×PCR Master Mix                  2×1 mL

● DNA Dilution Buffer (DDB)     1×10 mL

● CHO Control DNA                   1×40 μL

◆检测波长

● CHO gDNA（如FAM）

● Internal Control（如HEX/VIC等）

Internal Control为非天然的合成DNA。

◆残留DNA提取试剂盒（碘化钠法）

碘化钠法提取宿主细胞来源残留DNA的试剂盒。可通过qPCR对所提取的DNA进行定量。适用于CHO细胞、大肠杆菌、酵母等宿主细胞来源DNA含量的检测和管理。

●　高回收率，回收痕量DNA（100-1,000 fg）

●　全程单管操作，无需换管

●　提取全程仅需60-90 min

●　提供含高浓度蛋白样品用的流程

● 　遵照中国药典收录碘化钠法^*1

*1 为使DNA检测方法与国际标准保持同步，中国药典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立残留细胞DNA检测国家标准。碘化钠法作为 残留DNA提取方法，新增至2020版的中国药典。

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