タンパク質標識キット Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg) 同仁化学研究所

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タンパク質標識キット Biotin Labeling Kit - NH2 (for 1mg) 同仁化学研究所Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)

08 ラベル化剤

Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)

タンパク質標識キット Biotin Labeling Kit - NH2 (for 1mg) 同仁化学研究所

  • ラベル化剤

タンパク質標識キット

  • 大容量のサンプルをラベル化したい
  • 感度をあげたい
  • 蛍光色素でうまくいかなかった
  • 製品コード
    LK55  Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 sample ¥23,800 344-91141
サンプル量 1 mg
所要時間 2時間
標識部位 -NH2
検出方法 顕微鏡・FCM・ウエスタンブロット・プレートリーダー

・高分子化合物(MW>50,000)に標識できる。

・NH2-Reactive Biotinと混合するだけで標識体を形成する。

・Filtration Tubeを用いた分離操作により高い回収率で標識体が得られる。

キット内容
1 sample ・NH2-Reactive Biotin
・WS Buffer
・Reaction Buffer
・Filtration Tube
・15 ml Tube (for counterbalance)
1 tube
13 ml x 1
1.2 ml x 1
1 tube
1 tube

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マニュアル

  • 取扱説明書 タンパク質標識キット Biotin Labeling Kit - NH2 (for 1mg) 同仁化学研究所 日本語
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技術情報

特徴

1)1 mgのタンパク質を標識可能である。
2)高分子化合物(MW>50,000)に標識できる。
3)NH2-Reactive Biotinと混合するだけで標識体を形成する。
4)Filtration Tubeを用いた分離操作により高い回収率で標識体が得られる。

よくある質問

Q

サンプル溶液中の共存物は反応に影響しますか?

A

共存物の種類により影響することがあります。
溶液中にどのような物質が含まれるかを確認の上、状況に応じてラベル化に用いるサンプルの精製を行い、標識反応にご使用ください。

<高分子:分子量1万以上>
影響する可能性があります。
BSAやゼラチンなどアミノ基をもつ化合物が含まれると、抗体への標識効率が低下します。また、高分子のためFiltration Tubeでも除くことができません。また、アミノ基を持たない化合物でも、高分子の不純物が多いとフィルターの目詰まりの原因になり、標識・精製操作に支障がでる可能性もあります。反応に使用する前に別途除去操作を行ってください。
*本製品に限らず他のLabeling kit に関しても同様の注意が必要です。

抗体の精製について、小社抗体精製キット(下記)を用いたBSAとゼラチンの除去方法をご紹介いたします。

IgG Purification Kit – A   IgG Purification Kit – G

 

【BSAの除去方法】

1)必要な試薬

IgG Purification Kit-A(もしくはG)(Code:AP01もしくはAP02)

市販の抗体 200µg

2)精製方法

IgG Purification Kit添付の取扱説明書に従って、精製を行う。

 

【ゼラチンの除去方法】
A, Bいずれかの方法で除去する。

A.コラーゲナーゼ(Collagenase)によるゼラチン分解

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図1 ゼラチン除去精製前後のSDS-PAGE
1: ゼラチン含有IgG溶液
2: 精製後のIgG溶液

(1) 試薬
・コラーゲナーゼ(Sigma, #C7826) 3.5 CDU/ml 希釈溶液
・IgG Purification Kit-A(もしくはG) (Code: AP01もしくはAP02)
・市販の抗体 200 μg
(2)精製方法
・0.2% ゼラチンを含む200 μg/ml IgG溶液 1 mlに酵素処理用緩衝液 (100 mmol/l HEPES, pH7.4, 0.36 mmol/l CaCl2含有) 420 μlと酵素処理用緩衝液で調製した 3.5 CDU/ml コラーゲナーゼ希釈溶液 80 μlを加えて混合する。
・37℃、3時間インキュベートした後、IgG Purification Kit-A(もしくはG)を用いてIgGを単離する。
※IgG Purification Kitでは、抗体を固定化担体に保持させる際の抗体溶液量を一回当たり200 μlとしている。しかし、上記操作でコラーゲナーゼ処理した抗体溶液量は、約1.5 mlとなるため、IgGを担体に保持させる操作を8回(200 μl×7, 100 μl×1)に分けて行う。
※上記の方法で得られる抗体の回収率:45~50%
 

B. 300K 限外ろ過チューブを用いたゼラチン除去

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図2 ゼラチン除去精製前後のSDS-PAGE
1: IgG
2: ゼラチン含有IgG溶液
3: 300K限外濾過のみのIgG溶液
4: 300K限外濾過+ IgG Purification Kit – Gで精製後のIgG溶液

(1)試薬
・300K フィルトレーションチューブ(Pall社 ナノセップ遠心ろ過デバイス(製品コード:OD300C33)
・IgG Purification Kit-A(もしくはG) (Code: AP01もしくはAP02)
・市販の抗体 200 μg
(2)精製方法
・0.1% ゼラチンを含む200 μg/ml IgG溶液 1 mlを300K フィルトレーションチューブ 2本に分けて限外ろ過を行う(200 μl×2, 100 μl×1, 13,500 x g)。
・その後、回収溶液500 μlをIgG Purification Kit-A(もしくはG)を用いてIgGを単離する。
※回収溶液500 μlに対し、IgG Purification KitのWashing Buffer 50 μlを添加し、精製を行う。 ゲルへの吸着操作は5回繰り返す。
※上記の方法で得られる抗体の回収率:35~45%

 

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取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵, 2.吸湿注意
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