Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒 货号10087-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒

Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒

货号 10087 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 5136
Ex (nm) 540 Em (nm) 590
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。α-酮戊二酸(α-酮戊二酸)是克雷布斯循环中的关键分子,其决定了生物体的柠檬酸循环的总体速率。作为谷氨酸和谷氨酰胺的前体,α-酮戊二酸也是胃肠道细胞的中枢代谢燃料。它可以降低蛋白质分解代谢并增加蛋白质合成,从而增强骨骼肌中的骨组织形成,并可用于临床应用。 α-酮戊二酸用于肾脏疾病;肠道和胃部疾病,包括细菌感染;肝脏问题;白内障;和反复发酵的酵母菌感染。它还用于改善接受血液透析治疗的肾病患者处理蛋白质的方式。 AAT Bioquest的Amplite™比色α-酮戊二酸定量试剂盒提供灵敏的比色分析,用于定量生物样品中的α-酮戊二酸。它利用酶偶联反应释放过氧化氢,可通过Amplite™Red在吸光度酶标仪中在570 nm处检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品(50μL)
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液(50μL)
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液(200X):
将50μLDMSO(组分E)加入到Amplite Red(组分A)的小瓶中以制备200X储备溶液。

 

2.标准溶液

2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品(组分D)加入990μLPBS中,得到100μMα-酮戊二酸标准溶液(AKG7)。 然后进行1:2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品(AKG6-AKG1)。

 

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液(组分C)加入一个酶混合物1瓶(组分B1)中并充分混合。

3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶(组分B2)中并充分混合。

3.3将整个小瓶(100μL)的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意:5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定,请及时使用。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品(AKG1-AKG7,0.1至30μM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AKG1 AKG1
AKG2 AKG2
AKG3 AKG3    
AKG4 AKG4    
AKG5 AKG5    
AKG6 AKG6    
AKG7 AKG7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AKG1-AKG7 50ul 连续稀释液(0.1至30μM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品(AKG),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向α-Ketoglutarate标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸测定工作溶液,使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.将反应在37℃孵育30-60分钟。

4.用Ex / Em = 540 / 590nm(截止值= 570nm)的荧光板读数器监测荧光增加。

 

参考文献

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Alpha-ketoglutarate reduces ethanol toxicity in Drosophila melanogaster by enhancing alcohol dehydrogenase activity and antioxidant capacity
Authors: Bayliak MM, Shmihel HV, Lylyk MP, Storey KB, Lushchak VI.
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说明书
Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒.pdf