Amplite 荧光法甲醛定量试剂盒 绿色荧光

简要概述

Amplite 荧光法甲醛定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。甲醛是自发产生的物质。上层大气中，可以自发贡献这个环境总甲醛的90%。生物体内很少遇到单体或者水合物甲醛。甲烷的生成通过等效量甲醛，但是在甲烷化时一碳物种被亚甲基类所掩饰。甲醛是甲醇毒性的原因，因为甲醇通过乙醇脱氢酶转变为甲醛。Amplite荧光法甲醛分析试剂盒 *绿色荧光* 利用专有的无荧光染料通过与甲醛反应产生强荧光。这个荧光试剂盒可以提供敏感的混合和读取的方法来检测甲醛。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。它的信号可以通过酶标仪在400／510nm处轻易地读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法甲醛定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备甲醛标准品和/或测试样品（50μL）
2.添加AldeLight 绿色工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育20至60分钟
4.监测Ex / Em = 410/525 nm处的荧光增加（截止= 495 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 AldeLight 绿色原液（500X）：
将20μLDMSO（组分D）加入AldeLight Green（组分A）小瓶中，制成500X AldeLight Green原液。

1.2 甲醛标准溶液（123 mM）：
将5μL37.2％甲醛标准品（组分C）加入0.5mL测定缓冲液（组分B）中，制成123mM甲醛标准溶液。

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

将12.2μL123mM甲醛标准溶液加入0.5mL测定缓冲液（组分B）中，制成3mM甲醛标准溶液。 取3mM甲醛标准溶液，在测定缓冲液（组分B）中进行1:10，制成300μM甲醛标准品（FS7）。 取300μM甲醛标准品（FS7）并进行1：3连续稀释，得到连续稀释的甲醛标准品（FS6-FS1）和分析缓冲液（组分B）。

3.工作溶液

将10μL500XAldeLight Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成AldeLight Green工作溶液。 注意：5 mL AldeLight Green工作溶液足以容纳1个板。 AldeLight 绿色工作溶液不稳定，最好在2小时内使用。

样品分析

表1.固体背96孔微孔板中甲醛标准品和测试样品的布局。 FS =甲醛标准品（FS1-FS7,0.41至300μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备甲醛标准品（FS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向甲醛标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeLight Green工作溶液，使总甲醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAldeLight Green工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应20至60分钟，避光。

4.用Ex / Em = 410 / 525nm（截止= 495nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12–26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65–73

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Amplite 比色法尿素定量试剂盒 蓝色

简要概述

Amplite 比色法尿素定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。尿素是动物蛋白质和氨基酸代谢的最终降解产物。它在肝脏中产生，由肾脏分泌并通过尿液排泄。尿素的测定在临床实验室中用于监测健康状况是非常有用的。血尿素氮（BUN）测试是尿素形式的血液中氮的量的量度，主要用于肌酸酐测试，以评估肾功能，帮助诊断肾脏疾病。我们的Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单灵敏的比色法，用于定量生物样品中的尿素浓度，如血清，血浆和尿液等。该分析基于尿素在分析缓冲液中的酶偶联反应，最后生产出蓝色的产品。产生的颜色强度与样品中尿素的浓度成比例，其可以在660-670nm处比色测量。这种Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单的分析方法，可在150μL分析体积中检测低至10μM的尿素。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法尿素定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备尿素标准品或测试样品（50μL）
2.添加尿素工作液（50μL）
3.在室温或37°C孵育30-60分钟
4.添加分析缓冲液II
5.读取665 nm处的吸光度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Assay Enzyme Mix储备液（100X）：
将100μLddH2 O加入到测定酶混合物（组分A）的小瓶中以制备100X测定酶混合物储备溶液。

2.标准溶液

2.1尿素标准
将1μL1.0M尿素标准品（组分D）加入999μLDPBS中以产生1.0mM标准尿素溶液（US7）。 取1.0mM尿素标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的尿素标准溶液（US6-US1）。

3.工作溶液

将50μL重构的测定酶混合物储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液I（组分B）中以制备尿素工作溶液。 注意：尿素工作溶液应及时使用，避光。 随着储存时间的延长，测定灵敏度会降低。 建议使用新鲜尿素工作溶液以获得最佳效果。

样品分析

表1.透明底部96孔微孔板中尿素标准品和测试样品的布局。 US =尿素标准（US1-US7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备尿素标准品（US），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向尿素标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL尿素工作溶液，使总尿素测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL尿素工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温或37°C下孵育反应30-60分钟，避光。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分C），使得总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每个孔中加入25μL测定缓冲液II（组分C），总测定体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育10-15分钟，并使用吸光度酶标仪监测660-670nm处的吸光度增加。注意：添加分析缓冲液II（组分C）后颜色变为黄色，孵育后尿素标准品或样品孔将显示蓝绿色。颜色的强度将在15-30分钟内达到最大值，并且与尿素的浓度成比例。注意：最终颜色在室温下稳定约1小时，颜色强度会随时间降低。

参考文献

A novel and sensitive resonance scattering assay for detection of urea in serum coupled urease catalytic reaction and NH4+ associated particle reaction
Authors: Liang A, Qin H, Zhou L, Zhang Y, Ouyang H, Wang P, Jiang Z.
Journal: Bioprocess Biosyst Eng (2011): 639

Dimethyl formamide-free, urea-NaCl fluorescence in situ hybridization assay for Staphylococcus aureus
Authors: Lawson TS, Connally RE, Vemulpad S, Piper JA.
Journal: Lett Appl Microbiol. (2011)

Evaluation of diuron (3-[3,4-dichlorophenyl]-1,1-dimethyl urea) in a two-stage mouse skin carcinogenesis assay
Authors: Ferrucio B, Franchi CA, Boldrin NF, de Oliveira ML, de Camargo JL.
Journal: Toxicol Pathol (2010): 756

Sample prep for proteomics of breast cancer: proteomics and gene ontology reveal dramatic differences in protein solubilization preferences of radioimmunoprecipitation assay and urea lysis buffers
Authors: Ngoka LC.
Journal: Proteome Sci (2008): 30

Immobilization of urease from pigeonpea (Cajanus cajan) on agar tablets and its application in urea assay
Authors: Mulagalapalli S, Kumar S, Kalathur RC, Kayastha AM.
Journal: Appl Biochem Biotechnol (2007): 291

Improvement of the decision efficiency of the accuracy profile by means of a desirability function for analytical methods validation. Application to a diacetyl-monoxime colorimetric assay used for the determination of urea in transdermal iontophoretic extracts
Authors: Rozet E, Wascotte V, Lecouturier N, Preat V, Dewe W, Boulanger B, Hubert P.
Journal: Anal Chim Acta (2007): 239

Enzymatic assay for determination of bicarbonate ion in plasma using urea amidolyase
Authors: Kimura S, Yamanishi H, Iyama S, Yamaguchi Y, Kanakura Y.
Journal: Clin Chim Acta (2003): 179

New enzymatic assay for serum urea nitrogen using urea amidolyase
Authors: Kimura S, Iyama S, Yamaguchi Y, Kanakura Y.
Journal: J Clin Lab Anal (2003): 52

Utilization of lacrimal urea assay in the monitoring of hemodialysis: conditions, limitations and lacrimal arginase characterization
Authors: Farkas A, Vamos R, Bajor T, Mullner N, Lazar A, Hraba A.
Journal: Exp Eye Res (2003): 183

Stool antigen assay (HpSA) is less reliable than urea breath test for post-treatment diagnosis of Helicobacter pylori infection
Authors: Bilardi C, Biagini R, Dulbecco P, Iiritano E, Gambaro C, Mele MR, Borro P, Tessieri L, Zentilin P, Mansi C, Vigneri S, Savarino V.
Journal: Aliment Pharmacol Ther (2002): 1733

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Amplite 比色法氨定量试剂盒 蓝色

简要概述

Amplite 比色法氨定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。氨是氮在生命系统中的一个重要来源。它是通过氨基酸代谢和合成的，以高浓度的形式存在。氨在血液中（高氨血症）水平升高的肝功能障碍（肝硬化）已被发现，而hypoammonemia已经与在尿素循环酶（例如，鸟氨酸转）的缺陷相关联。氨的测定在临床实验室是非常有用的测试，以监测健康状况。我们Amplite 比色法氨测定试剂盒提供了一种简单、灵敏的测色方法，氨浓度在食品和生物样品（如血清，血浆和尿液等）测定是基于氨的测定中的酶偶联反应的定量缓冲液中，并最终产生蓝色产物。产生的颜色强度正比于氨的样品中的浓度，可以用比色法在660-670 nm处进行测定。这Amplite 比色法氨检测试剂盒提供了一个简单的实验来检测氨。该测定可以在方便的96孔或384孔微量滴定板格式来执行和容易适应不分离步骤实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法氨定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备氯化铵标准品或测试样品（50μL）
2.添加分析缓冲液I（50μL）
3.在室温或37°C孵育5分钟
4.添加分析缓冲液II（50μL）
5.在室温下孵育30-60分钟
6.监测吸光度增加到660 – 670 nm

溶液制备 

1.标准溶液

1.1氯化铵标准
将1μL1.0M氯化铵标准品（组分C）加入999μLDPBS中，生成1000μM氯化铵标准溶液（AS7）。 取1000μM氯化铵标准溶液（AS7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的氯化铵标准品（AS6-AS1）和DPBS。

样品分析

表1.在96孔微孔板中的氯化铵标准品和测试样品的布局。 AS =氯化铵标准品（AS1-AS7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备氯化铵标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向每个氯化铵标准品，空白对照和测试样品的孔中加入50μL测定缓冲液I（组分A），使总测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL测定缓冲液I，总体积为50μL/孔。

3.将反应在室温或37℃下孵育5分钟。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分B）以使总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，每孔加入25μLAssayBuffer II，总体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育反应30-60分钟。

6.用吸光度酶标仪在660-670nm处监测吸光度的增加。注意：加入分析缓冲液II（组分B）后颜色变为黄色，含氯化铵标准品的孔或样品孵育后会显示蓝绿色。颜色的强度将在30-60分钟内达到最大值。

参考文献

High pleural ammonia negatively interferes with the measurement of adenosine deaminase activity
Authors: Loh TP, Tan KM, Chew S, Chan DS.
Journal: BMJ Case Rep (2013)

Role of branched chain amino acids in cerebral ammonia homeostasis related to hepatic encephalopathy
Authors: Bak LK, Waagepetersen HS, Sorensen M, Ott P, Vilstrup H, Keiding S, Schousboe A.
Journal: Metab Brain Dis. (2013)

Systemic inflammation and ammonia in hepatic encephalopathy
Authors: Tranah TH, Vijay GK, Ryan JM, Shawcross DL.
Journal: Metab Brain Dis (2013): 1

A review of ammonia-oxidizing bacteria and archaea in Chinese soils
Authors: Shen JP, Zhang LM, Di HJ, He JZ.
Journal: Front Microbiol (2012): 296

Ammonia transport by terrestrial and aquatic insects
Authors: Weihrauch D, Donini A, O’Donnell MJ.
Journal: J Insect Physiol (2012): 473

Ammonia-lowering strategies for the treatment of hepatic encephalopathy
Authors: Rose CF.
Journal: Clin Pharmacol Ther (2012): 321

Catalytic mechanisms and biocatalytic applications of aspartate and methylaspartate ammonia lyases
Authors: de Villiers M, Puthan Veetil V, Raj H, de Villiers J, Poelarends GJ.
Journal: ACS Chem Biol (2012): 1618

Drivers of archaeal ammonia-oxidizing communities in soil
Authors: Zhalnina K, de Quadros PD, Camargo FA, Triplett EW.
Journal: Front Microbiol (2012): 210

Effect of Helicobacter pylori eradication on blood ammonia levels in cirrhotic patients: a systematic review
Authors: Qin SY, Jiang HX, Ning HJ, Nie HM, Tao L, Hu BL, Guo XY.
Journal: Hepatogastroenterology (2012): 2576

Is there in vivo evidence for amino acid shuttles carrying ammonia from neurons to astrocytes
Authors: Rothman DL, De Feyter HM, Maciejewski PK, Behar KL.
Journal: Neurochem Res (2012): 2597

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Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒

简要概述

Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。α-酮戊二酸（α-酮戊二酸）是克雷布斯循环中的关键分子，其决定了生物体的柠檬酸循环的总体速率。作为谷氨酸和谷氨酰胺的前体，α-酮戊二酸也是胃肠道细胞的中枢代谢燃料。它可以降低蛋白质分解代谢并增加蛋白质合成，从而增强骨骼肌中的骨组织形成，并可用于临床应用。 α-酮戊二酸用于肾脏疾病;肠道和胃部疾病，包括细菌感染;肝脏问题;白内障;和反复发酵的酵母菌感染。它还用于改善接受血液透析治疗的肾病患者处理蛋白质的方式。 AAT Bioquest的Amplite 比色α-酮戊二酸定量试剂盒提供灵敏的比色分析，用于定量生物样品中的α-酮戊二酸。它利用酶偶联反应释放过氧化氢，可通过Amplite Red在吸光度酶标仪中在570 nm处检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品（50μL）
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液（50μL）
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Amplite TM Red（组分A）的小瓶中以制备200X储备溶液。

2.标准溶液

2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品（组分D）加入990μLPBS中，得到100μMα-酮戊二酸标准溶液（AKG7）。 然后进行1：2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品（AKG6-AKG1）。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合物1瓶（组分B1）中并充分混合。

3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3将整个小瓶（100μL）的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意：5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

样品分析

表1.在96孔透明底微孔板中的α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品（AKG1-AKG7,1.563至100μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品（AKG），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向α-酮戊二酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸工作溶液，使总α-酮戊二酸测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在37℃孵育60-90分钟。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，在OD为570nm时进行路径检查。

参考文献

Dietary alpha-ketoglutarate promotes higher protein and lower triacylglyceride levels and induces oxidative stress in larvae and young adults but not in middle-aged Drosophila melanogaster
Authors: Bayliak MM, Lylyk MP, Shmihel HV, Sorochynska OM, Semchyshyn OI, Storey JM, Storey KB, Lushchak VI.
Journal: Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol (2017): 28

Loss of Nardilysin, a Mitochondrial Co-chaperone for alpha-Ketoglutarate Dehydrogenase, Promotes mTORC1 Activation and Neurodegeneration
Authors: Yoon WH, Sandoval H, Nagarkar-Jaiswal S, Jaiswal M, Yamamoto S, Haelterman NA, Putluri N, Putluri V, Sreekumar A, Tos T, Aksoy A, Donti T, Graham BH, Ohno M, Nishi E, Hunter J, Muzny DM, Carmichael J, Shen J, Arboleda VA, Nelson SF, Wangler MF, Karaca E, Lupski JR, Bellen HJ.
Journal: Neuron (2017): 115

The facial triad in the alpha-ketoglutarate dependent oxygenase FIH: A role for sterics in linking substrate binding to O2 activation
Authors: Hangasky JA, Taabazuing CY, Martin CB, Eron SJ, Knapp MJ.
Journal: J Inorg Biochem (2017): 26

alpha-Ketoglutarate Accelerates the Initial Differentiation of Primed Human Pluripotent Stem Cells
Authors: TeSlaa T, Chaikovsky AC, Lipchina I, Escobar SL, Hochedlinger K, Huang J, Graeber TG, Braas D, Teitell MA.
Journal: Cell Metab (2016): 485

Alpha-Ketoglutarate as a Molecule with Pleiotropic Activity: Well-Known and Novel Possibilities of Therapeutic Use
Authors: Zdzisinska B, Zurek A, Kandefer-Szerszen M.
Journal: Arch Immunol Ther Exp (Warsz). (2016)

alpha-Ketoglutarate dehydrogenase complex moonlighting: ROS signalling added to the list: An Editorial highlight for ‘Reductions in the mitochondrial enzyme alpha-ketoglutarate dehydrogenase complex in neurodegenerative disease – beneficial or detrimental?’
Authors: Fernandez E, Bolanos JP.
Journal: J Neurochem (2016): 689

Alpha-ketoglutarate enhances milk protein synthesis by porcine mammary epithelial cells
Authors: Jiang Q, He L, Hou Y, Chen J, Duan Y, Deng D, Wu G, Yin Y, Yao K.
Journal: Amino Acids (2016): 2179

alpha-ketoglutarate is associated with delayed wound healing in diabetes
Authors: Tan Q, Wang W, Yang C, Zhang J, Sun K, Luo HC, Mai LF, Lao Y, Yan L, Ren M.
Journal: Clin Endocrinol (Oxf) (2016): 54

Alpha-ketoglutarate promotes skeletal muscle hypertrophy and protein synthesis through Akt/mTOR signaling pathways
Authors: Cai X, Zhu C, Xu Y, Jing Y, Yuan Y, Wang L, Wang S, Zhu X, Gao P, Zhang Y, Jiang Q, Shu G.
Journal: Sci Rep (2016): 26802

Alpha-ketoglutarate reduces ethanol toxicity in Drosophila melanogaster by enhancing alcohol dehydrogenase activity and antioxidant capacity
Authors: Bayliak MM, Shmihel HV, Lylyk MP, Storey KB, Lushchak VI.
Journal: Alcohol (2016): 23

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Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物

简要概述

产品基本信息

货号：11005

产品名称：Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物

规格：25mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~300

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：324

发射波长（nm）：409

产品介绍

Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物,金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物。

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

预活化HRP NHS酯

	货号	11025	存储条件	在零下15度以下保存
	规格	300 ug	价格	1236
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

ReadiUse 预活化的HRP NHS酯是HRP的单NHS酯。 它可用于容易地标记蛋白质（例如抗体）或具有氨基的其他生物分子。 ReadiUse 预活化HRP NHS酯易于使用。 它可以用于通过简单混合标记抗体，即抗体的碱性溶液（pH 8.5-9.0）可以直接与HRP NHS酯混合，并将反应混合物摇动1-2小时。 在大多数情况下，所得溶液可直接用于ELISA测定而无需进一步纯化。 ReadiUse 预活化的HRP NHS酯提供了最强大的方法来执行抗体与HRP的缀合。 任何合适量的抗体（> 1mg / mL）可以容易地与预活化的HRP NHS酯缀合而无需纯化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的预活化HRP NHS酯。 

产品说明书

样品实验方案

1.抗体（IgG）~100μg在20μL~50μL的25mM碳酸氢钠缓冲液（pH = 8.5）中。

2.将IgG溶液转移到HRP-SE小瓶中，充分混合。

3.在室温下反应1~2小时，优选在反应过程中轻轻摇动。

4.加入等体积的100mM Tris-HCl缓冲液（pH = 7.5）+ 0.5％BSA。

5.将混合物储存在4^oC，即可使用。 注意：如果目标蛋白质溶液含有其他蛋白质（如BSA），则纯化蛋白质溶液或干扰标记反应。 注意：需要除去叠氮化钠等小分子。 注意： Tris缓冲液和其他胺类化合物也会干扰标记反应。

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

Azido-Cy5酪胺

	货号	11061	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	3840
	Ex (nm)	651	Em (nm)	670
	分子量	1030.14	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：11061

产品名称：Azido-Cy5酪胺

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：1030.14

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：644

发射波长(nm)：665

产品介绍

Azido-Cy5酪胺是美国AAT Bioquest生产的用于荧光标记的试剂，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现最大的IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物的转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一抗稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 Azido-Cy5酪胺含有明亮的Cy5，可以使用标准Cy5过滤器套件轻松检测到。此外，它还包含一个叠加组，可用作点击化学构建块。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Azido-Cy5酪胺。 

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参考文献

Antibody-Driven Proximity Labeling in Fixed Tissues
Authors: Daniel Z Bar, Francis S Collins
Journal: (2019): 73–81

Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒 橙色荧光

	货号	11105	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 tests	价格	2544
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要任务。通常使用Biuret，Lowry，BCA和Bradford测定来估计蛋白质浓度。但是，这些比色测定法不太灵敏，并且需要大量样品以确保准确性。我们的Amplite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测量（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定）敏感得多。该试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中不发荧光，但能快速与蛋白质反应并产生明亮的荧光。 Amplite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种定量分析溶液中蛋白质浓度的简单方法。只能检测到0.1μg/ mL的BSA。该试剂盒可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。它可以在30分钟内完成，荧光信号易于在Ex / Em = 485/590 nm处监测。该试剂盒已被用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测量柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率;和（4）融合蛋白的高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备Prolite 橙色工作溶液（50μL）
2.添加BSA标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30分钟
4.在Ex / Em = 485 / 590nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
Protein Enhancer原液（500X）：
将100μL蛋白质增强缓冲液（组分E）加入到蛋白质增强剂（组分C）的小瓶中。 注意：20μL蛋白质增强剂原液（500X）足以制备10 mL工作溶液。 未使用的Protein Enhancer储备液（500X）应在-20 oC下以单次使用的等分试样储存。

2.标准溶液

BSA标准
注意：标准品和测试样品应在Protein Enhancer工作溶液中制备。

3.工作溶液

1.蛋白质增强剂工作溶液：
将20μL蛋白质增强剂储备溶液（500X）加入10 mL分析缓冲液（组分D）中并充分混合。

2. Prolite 橙色工作溶液：
将10μLProliteTM Orange（组分A）加入5mL测定缓冲液（组分D）中并充分混合。 注意：5 mL Prolite Orange工作溶液足以容纳1个平板。 为每个实验准备足够的Prolite 橙色工作溶液。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准（BS1-BS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

蛋白质分析

1.将50μLBSA标准品，空白对照和测试样品（参见表1和2）加入到实心黑色96孔板中。 注意：对于384孔板，添加20μL样品。

2.将50μL/孔的Prolite Orange工作溶液加入BSA标准品，空白对照和测试样品中，使总测定体积为100μL/孔。 注意：对于384孔板，在每个孔中加入20μLProlite Orange工作溶液。

3.将反应在37℃孵育10至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 485 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Dual Amplification Fluorescence Assay for Alpha Fetal Protein Utilizing Immunohybridization Chain Reaction and Metal-Enhanced Fluorescence of Carbon Nanodots
Authors: Xu, D. D.; Liu, C.; Li, C. Y.; Song, C. Y.; Kang, Y. F.; Qi, C. B.; Lin, Y.; Pang, D. W.; Tang, H. W.
Journal: ACS Appl Mater Interfaces (2017): 37606-37614

Quantification of Membrane Protein Self-Association with a High-Throughput Compatible Fluorescence Assay
Authors: Li, J.; Qiu, X. J.
Journal: Biochemistry (2017): 1951-1954

Use of anchor protein modules in fluorescence polarisation aptamer assay for ochratoxin A determination
Authors: Samokhvalov, A. V.; Safenkova, I. V.; Eremin, S. A.; Zherdev, A. V.; Dzantiev, B. B.
Journal: Anal Chim Acta (2017): 80-87

Tryptophan fluorescence quenching as a binding assay to monitor protein conformation changes in the membrane of intact mitochondria
Authors: Akbar, S. M.; Sreeramulu, K.; Sharma, H. C.
Journal: J Bioenerg Biomembr (2016): 241-7

Ag@SiO2-entrapped hydrogel microarray: a new platform for a metal-enhanced fluorescence-based protein assay
Authors: Jang, E.; Kim, M.; Koh, W. G.
Journal: Analyst (2015): 3375-83

Label-free fluorescence assay for protein kinase based on peptide biomineralized gold nanoclusters as signal sensing probe
Authors: Song, W.; Wang, Y.; Liang, R. P.; Zhang, L.; Qiu, J. D.
Journal: Biosens Bioelectron (2015): 234-40

Budded baculoviruses as a tool for a homogeneous fluorescence anisotropy-based assay of ligand binding to G protein-coupled receptors: the case of melanocortin 4 receptors
Authors: Veiksina, S.; Kopanchuk, S.; Rinken, A.
Journal: Biochim Biophys Acta (2014): 372-81

Characterization of G protein-coupled receptors by a fluorescence-based calcium mobilization assay
Authors: Caers, J.; Peymen, K.; Suetens, N.; Temmerman, L.; Janssen, T.; Schoofs, L.; Beets, I.
Journal: J Vis Exp (2014): e51516

Cleavage of pro-tumor necrosis factor alpha by ADAM metallopeptidase domain 17: a fluorescence-based protease assay cleaves its natural protein substrate
Authors: Zhang, C.; Zheng, L.; Nurnberg, J.; Vacari, B. M.; Zhou, J.; Wang, Y.
Journal: Anal Biochem (2014): 14-9

A fluorescence-based thermal shift assay identifies inhibitors of mitogen activated protein kinase kinase 4
Authors: Krishna, S. N.; Luan, C. H.; Mishra, R. K.; Xu, L.; Scheidt, K. A.; Anderson, W. F.; Bergan, R. C.
Journal: PLoS One (2013): e81504

相关产品

Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒

简要概述

Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它参与许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病性血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症相关的生物事件。也许H₂O₂生物学最引人入胜的方面是最近的报道，抗体有能力将分子氧转化为过氧化氢，从而有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种反应物种将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。此Amplite 比色过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的Amplite IR过氧化物酶底物来定量溶液和细胞提取液中的过氧化氢。在过氧化氢氧化时，无色的Amplite IR产生强烈的蓝色产物，其pH值与pH 4至10无关。现有比色法过氧化氢分析（来自其他供应商）通常具有严重的样品干扰，这些样品干扰是由生物样品的固有吸收。 Amplite IR产品的近红外吸收最大限度地减少了测定背景，因为生物样品很少吸收超过600 nm的光。它也可以用于通过酶偶联反应检测各种氧化酶活性。该试剂盒是与HTS液体处理仪器兼容的优化“混合和读取”分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备H₂O₂工作溶液（50μL）
2.添加H₂O₂标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-60分钟
4.监测650 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite IR过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite IR过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中。

2.过氧化物酶原液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

3. H₂O₂标准溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中。 注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

H₂O₂标准
将5μL20mM H₂O₂标准溶液加入995μL测定缓冲液（组分C）中，得到100μM H₂O₂标准品（HS7）。 取200μL100μM H₂O₂标准品进行1：2连续稀释，得到 H₂O₂标准品（HS6-HS1）的连续稀释液。

3.工作溶液

将50μLEKYellow 储备液和50μL肠激酶底物储备液加入5 mL分析缓冲液（组分C）中; 混合均匀，制成肠激酶（EK）工作溶液（组分A + B + C）。 注意：对于一个96孔板，测定混合物就足够了。 它不稳定，立即使用。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔板中H2O2标准品和测试样品的布局。 HS = H2O2标准品（HS1-HS7,1.563至100μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.H₂O₂测定上清液反应

1.1根据表1和2中提供的布局制备H2O2标准品（HS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLH₂O₂工作溶液，使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLH₂O₂工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

1.4用吸光度读板仪在650nm处监测吸光度。

H₂O₂测定细胞
Amplite 比色过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。以下是建议的说明书，可以进行修改以满足特定的研究需求。

除了应使用细胞培养系统中使用的培养基替换测定缓冲液（组分C）外，应按照给定的方式制备H₂O₂细胞工作溶液。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）; （b）中。汉克斯平衡盐溶液（HBSS）;或（c）无血清培养基。

在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。注意：包括阴性对照（单独的培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

向细胞和H₂O₂标准品的每个孔中加入50μL H₂O₂细胞工作溶液，使总H2O2测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLH₂O₂细胞工作溶液，总体积为50μL/孔。

在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

用吸光度读板仪在650nm处监测吸光度。

参考文献

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
Journal: Regenerative Therapy (2016): 55–63

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Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 红色荧光

	货号	11501	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	3192
	Ex (nm)	571	Em (nm)	584
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。也许H₂O₂生物学最有趣的方面是最近的报告，即抗体具有将分子氧转化为过氧化氢的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种活性物质将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。

这种Amplite 荧光过氧化氢测定试剂盒使用我们的非荧光Amplite 红色过氧化物酶底物来量化溶液和细胞提取物中的过氧化氢。它还可用于通过酶偶联反应检测多种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。它提供灵敏的一步荧光测定法，可在100μL测定体积（30 nM，图1）中检测少至3皮摩尔的H₂O₂。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = ~540 / 590 nm的荧光酶标仪或~570 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备H₂O₂反应混合物（50μL）

加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1100X Amplite 红色过氧化物酶底物原液：将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环并避免光照。

1.220U / mL过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

1.320mM H₂O₂储备溶液：将22.7L的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977L的测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.准备H₂O₂反应混合物：

3.准备H₂O₂标准品（0至10μM）的连续稀释液：

注意1：在存硫醇如DTT和β-巯基乙醇的情况下，组分A不稳定。 高于10M（最终浓度）的硫醇将显着降低测定动态范围。

注意2：NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰检测。

3.1将1μL20mM H₂O₂溶液（来自步骤1.3）加入1999μL测定缓冲液（组分C）中，得到10μMH₂O₂标准品。

3.2取200μL10μMH₂O₂标准品进行1：3连续稀释，得到3，1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μMH₂O₂标准品系列稀释液。

3.3如说明书中表2和3中所述，将H₂O₂标准品和含H₂O₂的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.在上清液反应中进行H₂O₂测定：

4.1将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤2）加入到H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3在Ex / Em = 540±10/590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

5.对细胞进行H₂O₂检测：

Amplite 荧光过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。 以下是建议的协议，可以进行修改以满足特定的研究需求。

5.1 H2O2反应混合物应按步骤2制备，但分析缓冲液（组分C）应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b）汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

5.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

5.3将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤5.1）加入到细胞和H₂O₂标准品的每个孔中（来自步骤3.3）

5.4在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

5.5用Ex / Em = 540±10/590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Bio-inspired redox-cycling antimicrobial film for sustained generation of reactive oxygen species
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Eunkyoung Kim, Miao Lei, Kai Dai, Xiaoli Tan, Miao Xu, Jinyang Li, Yangping Liu, Xiaowen Shi
Journal: Biomaterials (2018)

PPARα-mediated peroxisome induction compensates PPARγ-deficiency in bronchiolar club cells
Authors: Srikanth Karnati, Gani Oruqaj, Harshavardhan Janga, Srinu Tumpara, Claudia Colasante, Paul P Van Veldhoven, Nancy Braverman, Adrian Pilatz, Thomas J Mariani, Eveline Baumgart-Vogt
Journal: PloS one (2018): e0203466

Semaphorin 4D inhibits neutrophil activation and is involved in the pathogenesis of neutrophil-mediated autoimmune vasculitis
Authors: Masayuki Nishide, Satoshi Nojima, Daisuke Ito, Hyota Takamatsu, Shohei Koyama, Sujin Kang, Tetsuya Kimura, Keiko Morimoto, Takashi Hosokawa, Yoshitomo Hayama
Journal: Annals of the Rheumatic Diseases (2017): annrheumdis–2016

Aggravation of brain infarction through an increase in acrolein production and a decrease in glutathione with aging
Authors: Takeshi Uemura, Kenta Watanabe, Misaki Ishibashi, Ryotaro Saiki, Kyoshiro Kuni, Kazuhiro Nishimura, Toshihiko Toida, Keiko Kashiwagi, Kazuei Igarashi
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 630–635

Hydrogen peroxide detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
Authors: Lei Rong, Chi Zhang, Qi Lei, Ming-Ming Hu, Jun Feng, Hong-Bing Shu, Yi Liu, Xian-Zheng Zhang
Journal: Regenerative Biomaterials (2016): rbw022

Modification of lignin in sugarcane bagasse by a monocopper hydrogen peroxide-generating oxidase from Thermobifida fusca
Authors: Cheng-Yu Chen, Cheng-Cheng Lee, Hung-Shuan Chen, Chao-Hsun Yang, Shu-Ping Wang, Jyh-Horng Wu, Menghsiao Meng
Journal: Process Biochemistry (2016): 1486–1495

Dopamine-mediated oxidation of methionine 127 in α-synuclein causes cytotoxicity and oligomerization of α-synuclein
Authors: Kazuhiro Nakaso, Naoko Tajima, Satoru Ito, Mari Teraoka, Atsushi Yamashita, Yosuke Horikoshi, Daisuke Kikuchi, Shinsuke Mochida, Kenji Nakashima, Tatsuya Matsura
Journal: PLoS One (2013): e55068

Hydrogen peroxide stimulates the epithelial sodium channel through a phosphatidylinositide 3-kinase-dependent pathway
Authors: He-Ping Ma
Journal: Journal of Biological Chemistry (2011): 32444–32453

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Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光

简要概述

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这种Amplite 荧光过氧化氢测定试剂盒使用我们的非荧光Amplite 红色过氧化物酶底物来量化溶液和细胞提取物中的过氧化氢。它还可用于通过酶偶联反应检测多种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。它提供灵敏的一步荧光测定法，可在100μL测定体积（30 nM，图1）中检测少至3皮摩尔的H₂O₂。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = ~540 / 590 nm的荧光酶标仪或~570 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒。

点击查看光谱

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备H₂O₂反应混合物（50μL）

加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1100X Amplite 红色过氧化物酶底物原液：将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环并避免光照。

1.220U / mL过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

1.320mM H₂O₂储备溶液：将22.7L的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977L的测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.准备H₂O₂反应混合物：

3.准备H₂O₂标准品（0至10μM）的连续稀释液：

注意1：在存硫醇如DTT和β-巯基乙醇的情况下，组分A不稳定。 高于10M（最终浓度）的硫醇将显着降低测定动态范围。

注意2：NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰检测。

3.1将1μL20mM H₂O₂溶液（来自步骤1.3）加入1999μL测定缓冲液（组分C）中，得到10μMH₂O₂标准品。

3.2取200μL10μMH₂O₂标准品进行1：3连续稀释，得到3，1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μMH₂O₂标准品系列稀释液。

3.3如说明书中表2和3中所述，将H₂O₂标准品和含H₂O₂的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.在上清液反应中进行H₂O₂测定：

4.1将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤2）加入到H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3在Ex / Em = 540±10/590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

5.对细胞进行H₂O₂检测：

Amplite 荧光过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。 以下是建议的协议，可以进行修改以满足特定的研究需求。

5.1 H2O2反应混合物应按步骤2制备，但分析缓冲液（组分C）应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b）汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

5.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

5.3将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤5.1）加入到细胞和H₂O₂标准品的每个孔中（来自步骤3.3）

5.4在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

5.5用Ex / Em = 540±10/590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Bio-inspired redox-cycling antimicrobial film for sustained generation of reactive oxygen species
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Eunkyoung Kim, Miao Lei, Kai Dai, Xiaoli Tan, Miao Xu, Jinyang Li, Yangping Liu, Xiaowen Shi
Journal: Biomaterials (2018)

PPARα-mediated peroxisome induction compensates PPARγ-deficiency in bronchiolar club cells
Authors: Srikanth Karnati, Gani Oruqaj, Harshavardhan Janga, Srinu Tumpara, Claudia Colasante, Paul P Van Veldhoven, Nancy Braverman, Adrian Pilatz, Thomas J Mariani, Eveline Baumgart-Vogt
Journal: PloS one (2018): e0203466

Semaphorin 4D inhibits neutrophil activation and is involved in the pathogenesis of neutrophil-mediated autoimmune vasculitis
Authors: Masayuki Nishide, Satoshi Nojima, Daisuke Ito, Hyota Takamatsu, Shohei Koyama, Sujin Kang, Tetsuya Kimura, Keiko Morimoto, Takashi Hosokawa, Yoshitomo Hayama
Journal: Annals of the Rheumatic Diseases (2017): annrheumdis–2016

Aggravation of brain infarction through an increase in acrolein production and a decrease in glutathione with aging
Authors: Takeshi Uemura, Kenta Watanabe, Misaki Ishibashi, Ryotaro Saiki, Kyoshiro Kuni, Kazuhiro Nishimura, Toshihiko Toida, Keiko Kashiwagi, Kazuei Igarashi
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 630–635

Hydrogen peroxide detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
Authors: Lei Rong, Chi Zhang, Qi Lei, Ming-Ming Hu, Jun Feng, Hong-Bing Shu, Yi Liu, Xian-Zheng Zhang
Journal: Regenerative Biomaterials (2016): rbw022

Modification of lignin in sugarcane bagasse by a monocopper hydrogen peroxide-generating oxidase from Thermobifida fusca
Authors: Cheng-Yu Chen, Cheng-Cheng Lee, Hung-Shuan Chen, Chao-Hsun Yang, Shu-Ping Wang, Jyh-Horng Wu, Menghsiao Meng
Journal: Process Biochemistry (2016): 1486–1495

Dopamine-mediated oxidation of methionine 127 in α-synuclein causes cytotoxicity and oligomerization of α-synuclein
Authors: Kazuhiro Nakaso, Naoko Tajima, Satoru Ito, Mari Teraoka, Atsushi Yamashita, Yosuke Horikoshi, Daisuke Kikuchi, Shinsuke Mochida, Kenji Nakashima, Tatsuya Matsura
Journal: PLoS One (2013): e55068

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Authors: He-Ping Ma
Journal: Journal of Biological Chemistry (2011): 32444–32453

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	货号	11505	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	3192
	Ex (nm)	405	Em (nm)	450
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化物的试剂盒，过氧化氢是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。 它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。 这种活性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的OxiVision Blue过氧化物来定量活细胞中的过氧化氢。 OxiVision 蓝色过氧化物具有细胞渗透性，当与过氧化氢反应时会产生蓝色荧光。 该试剂盒提供了一种监测活细胞中过氧化氢水平的敏感工具，并且它被优化用于流式细胞术。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒。 

活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.用OxiVision 蓝色过氧化物传感器染色细胞
3.用测试化合物处理细胞
4.使用流式细胞仪Pacific Blue Channel监测荧光强度（Ex / Em = 405/450 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. OxiVision 蓝色过氧化物传感器原液：
将100μLDMSO（组分B）加入到OxiVision 蓝色过氧化物传感器（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：1μL重组的OxiVision 蓝色过氧化物传感器原液足以容纳0.5 mL细胞。 应立即使用原液,避光。

点击查看细胞制备指南

样品分析

1.用OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备液在完全培养基或37°C所需缓冲液中染色细胞20-30分钟，避光。

2.用测试化合物在完全培养基或37℃的所需缓冲液中处理细胞一段所需的时间。对于对照样品（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。注意：建议在完全培养基中处理细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在治疗前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后，将细胞重悬于1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中。或者，可以在无血清培养基中处理细胞。注意：我们用完全培养基中的100μM过氧化氢在37°C处理Jurkat细胞90分钟以诱导过氧化氢。详细信息请参见图1。

3.使用流式细胞仪监测太平洋蓝色通道（Ex / Em = 405 / 450nm）的荧光强度。

参考文献

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
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	Ex (nm)	498	Em (nm)	517
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简要概述

Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化物的试剂盒，过氧化氢是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关事件的关键调节剂。 它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学过程。 这种活性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的OxiVision Green过氧化物传感器来定量活细胞中的过氧化氢。 OxiVision 绿色过氧化物传感器具有细胞渗透性，当与过氧化氢反应时会产生绿色荧光。 该试剂盒提供了一种监测活细胞中过氧化氢水平的敏感工具，并且它被优化用于流式细胞术。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒。 

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.使用OxiVision Green过氧化物染色细胞
3.用测试化合物处理细胞
4.用流式细胞仪FITC通道监测荧光强度（Ex / Em = 490/530 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. OxiVision 绿色过氧化物传感器原液：
将100μLDMSO（组分B）加入到OxiVision 绿色过氧化物（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：1μL重组的OxiVision 绿色过氧化物储备溶液适用于0.5 mL细胞。 应立即使用原液,避光。

点击查看细胞制备方案

样品分析

1.使用OxiVision 绿色过氧化物传感器储备溶液在完全培养基或37°C所需缓冲液中染色细胞30分钟，避光。

2.用测试化合物在完全培养基或37℃的所需缓冲液中处理细胞一段所需的时间。对于对照样品（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。注意：建议在完全培养基中处理细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在治疗前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后，将细胞重悬于1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中。或者，可以在无血清培养基中处理细胞。注意：我们用完全培养基中的100μM过氧化氢在37°C处理Jurkat细胞90分钟以诱导过氧化氢。详细信息请参见图1。

3.用测试化合物在37℃处理细胞一段所需的时间。取出处理溶液，然后用OxiVision 绿色过氧化物传感器储备液在全培养基或37°C所需的缓冲液中染色细胞一段所需的时间。

4.使用流式细胞仪监测FITC通道（Ex / Em = 490 / 530nm）的荧光强度。

参考文献

Role of Polydopamine’s Redox-Activity on its Pro-oxidant, Radical-Scavenging, and Antimicrobial Activities
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Haoqi Tan, Jialin Song, Miao Lei, Eunkyoung Kim, Gregory F Payne, Changsheng Liu
Journal: Acta Biomaterialia (2019)

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
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Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒 蓝色

简要概述

Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有最大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过最优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 蓝色底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到HRP小瓶（组分D）中以制备20U / mL HRP储备溶液。

1.3 H₂O₂溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂溶液。 注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液（组分C）中，得到300mU / mL的HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 – SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液（100X）和50μL的H₂O₂储备溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析缓冲液（组分C）中，使总体积为5 mL的HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。

参考文献

Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
Authors: Almeida LE, Imasato H, Tabak M.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 216

Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295

Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547

Vesicular transport route of horseradish C1a peroxidase is regulated by N- and C-terminal propeptides in tobacco cells
Authors: Matsui T, Nakayama H, Yoshida K, Shinmyo A.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol (2003): 517

Development of a novel enzyme/prodrug combination for gene therapy of cancer: horseradish peroxidase/indole-3-acetic acid
Authors: Greco O, Folkes LK, Wardman P, Tozer GM, Dachs GU.
Journal: Cancer Gene Ther (2000): 1414

Preparation, morphological characterization, and activity of thin films of horseradish peroxidase
Authors: Vianello F, Zennaro L, Di Paolo ML, Rigo A, Malacarne C, Scarpa M.
Journal: Biotechnol Bioeng (2000): 488

Synthesis and purification of horseradish peroxidase-labeled oligonucleotides for tyramide-based fluorescence in situ hybridization
Authors: van Gijlswijk RP, van de Corput MP, Bezrookove V, Wiegant J, Tanke HJ, Raap AK.
Journal: Histochem Cell Biol (2000): 175

Evidence for free radical formation during the oxidation of 2′-7′-dichlorofluorescin to the fluorescent dye 2′-7′-dichlorofluorescein by horseradish peroxidase: possible implications for oxidative stress measurements
Authors: Rota C, Chignell CF, Mason RP.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 873

In situ identification of cyanobacteria with horseradish peroxidase-labeled, rRNA-targeted oligonucleotide probes
Authors: Schonhuber W, Zarda B, Eix S, Rippka R, Herdman M, Ludwig W, Amann R.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 1259

Relative number of cells projecting from contralateral and ipsilateral nucleus isthmi to loci in the optic tectum is dependent on visuotopic location: horseradish peroxidase study in the leopard frog
Authors: Dudkin EA, Gruberg ER.
Journal: J Comp Neurol (1999): 212

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。 应立即使用原液，避光。

2. HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中以制备20U / mL的HRP标准溶液。

3. H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。 注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL分析缓冲液（组分C）中加入1μL的20U / mL HRP标准溶液，得到10mU / mL HRP标准溶液（SD7）。 取10 mU / mL HRP标准溶液（SD7）并进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6-SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H₂O₂储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液（组分C）中以制备HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.01至10 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。注意：高水平的HRP（例如，> 100mU / mL终浓度）可能由于Amplite TM Red（至非荧光）的过度氧化而导致荧光信号降低。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 540±10nm，发射= 590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 575nm）监测荧光增加。注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Identification of acetylcholinesterase inhibitors using homogenous cell-based assays in quantitative high-throughput screening platforms
Authors: Shuaizhang Li, Ruili Huang, Samuel Solomon, Yitong Liu, Bin Zhao, Michael F Santillo, Menghang Xia
Journal: Biotechnology journal (2017): 1600715

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样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30分钟至2小时
4.监测发光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 HRP原液（20 U / mL）：
将1mL含有0.1％BSA的PBS加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL含0.1％BSA的PBS中加入1μL20U / mL HRP储备液，得到10 mU / mL HRP标准溶液（PS7）。 然后使用10 mU / mL标准溶液并进行1：2连续稀释以获得剩余的连续稀释的标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

将30μL3％稳定的H₂O₂溶液（组分B）加入5mL分析缓冲液（组分A）中以制备HRP工作溶液并避光。 注意：HRP工作溶液在室温下稳定至少8小时，如果避光，不会造成活性损失。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 PS =过氧化物酶标准品（PS1-PS7,0.156至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

4.使用标准光度计监测发光强度。

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

简要概述

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的检测谷胱甘肽过氧化物酶的试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是具有过氧化物酶活性的酶家族，以保护生物体免受氧化损伤。GPx在将有机氢过氧化物（例如脂质氢过氧化物）还原成其相应的醇或将游离过氧化氢还原成水。因此，它可以防止细胞膜和细胞中其他氧化剂敏感位点的氧化损伤。现在科研已经注意到，改变GPx水平与由许多评论和复杂疾病引起的损伤相关。在生物样品中测量GPx水平，作为潜在治疗癌症，糖尿病，神经退行性疾病和心血管疾病的潜在指标。AAT Bioquest的荧光谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒提供灵敏的荧光测定法，用于测量生物样品中的GPx水平。该测定基于GPx催化的谷胱甘肽（GSH）氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。生成的GSSG通过谷胱甘肽还原酶（GR）和NADPH再循环至还原态GSH：

R-O-O-H + 2GSH     ^GPx             R-O-H + GSSG + H₂O

GSSG + NADPH + H^{+        GR}           2GSH + NADP⁺

产品NADP +可以使用我们新开发的专有NADP传感器Quest Fluor™NADP Probe进行专门监控。 NADP传感器仅与NADP反应产生荧光产物。 荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 420 / 480nm处测量，其与GPx活性成正比。与测量NADPH在340 nm处吸光度降低的其他商业试剂盒相比，我们的Quest Fluor™NADP探针可用于直接量化NADP水平。通过这种荧光测定GPx测定，我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备GPx分析混合物（50μL）

添加GPx标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟

加入20μLQuestFluor™NADP探针

添加20μLNAP检测溶液

在室温下孵育10-20分钟

添加15μL增强剂

溶液在室温孵育30-60分钟，在Ex / Em = 420 / 480nm处记录荧光

注意1.为了获得最佳效果，强烈建议使用黑色版。

注意2.在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方法

1.制备谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）标准储备液：

将50μLddH2O或1×PBS缓冲液加入到GPx标准品（组分A）的小瓶中，制成10U / mL标准储备溶液。

注意：未使用的GPx标准储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

2.准备GPx标准的系列稀释液：

2.1将4μLGPx标准储备溶液（10U / mL，来自步骤1）加入996L 1×PBS缓冲液中，以产生浓度为40mU / mL的标准溶液。

注意：稀释的GPx标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

2.2取200μL40mU / mL GPx标准溶液进行1：2连续稀释，得到大约20,10,5,2.5,1.25,0.625和0 mU / mL的GPx标准品系列稀释液。

2.3如表1和2中所述，将GPx标准品和含有GPx的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

表1实心黑色96孔微孔板中GPx标准品和测试样品的布局

注意：GP = GPx标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的GPx标准品从大约0.6 mU / mL加到40 mU / mL，一式两份加入GP1到GP7的孔中。

3.准备GSH原液（100X）：

将100μlddH2 O加入到GSH小瓶（组分D）中以制备100X GSH储备溶液。

4.准备GPx底物储备液（100X）：

将100μlddH2O加入到基质小瓶（组分E）中以制备100X底物储备溶液。

5.准备GPx分析混合物：

5.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分C）中。

5.2将50μLGSH储备溶液（来自步骤3的组分D），50μL底物储备溶液（组分E，来自步骤4）加入到组分B + C的瓶子中（来自步骤5.1），并充分混合以进行GPx测定 混合物（组分B + C + D + E）。

注1：该GPx测定混合物足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

注2：不建议储存未使用的GPx分析混合物。 可以将未使用的组分B + C混合物（来自步骤5.1）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC，尽管灵敏度可能会降低。

注3; 将未使用的100X GSH储备溶液（来自步骤3）和100X GPx底物储备溶液（来自步骤4）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

6.运行GPx分析：

6.1将50μLGPx测定混合物（来自步骤5.2）加入到GPx标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGPx测定混合物。

6.2在室温下孵育反应30分钟，避光。

7.运行NADP测定：

7.1将20μLQuestFluor™NADP探针（组分F）加入到GPx标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中，充分混合。

7.2在每个孔中加入20μLNAP检测溶液（组分G），充分混匀。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NADP探针（组分F）和10μLNAP检测溶液（组分G）。

7.3在室温下孵育反应10-20分钟，避光。

7.4向每个孔中加入15μL增强剂（组分H），使总测定体积为155μL/孔，并在室温下孵育30-60分钟，避光。

注意：对于384孔板，添加7.5μL增强剂。

7.5使用荧光读板仪在Ex / Em = 420/480 nm处监测荧光增加。

参考文献

A mechanistic mathematical model for the catalytic action of glutathione peroxidase
Authors: Pannala VR, Bazil JN, Camara AK, Dash RK.
Journal: Free Radic Res (2014): 487

A supramolecular microgel glutathione peroxidase mimic with temperature responsive activity
Authors: Yin Y, Jiao S, Lang C, Liu J.
Journal: Soft Matter (2014): 3374

Basal levels of glutathione peroxidase correlate with onset of radiation induced lung disease in inbred mouse strains
Authors: Kunwar A, Haston CK.
Journal: Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol (2014): L597

Can recombinant human glutathione peroxidase 1 with high activity be efficiently produced in Escherichia coli
Authors: Guo X, Song J, Yu Y, Wei J.
Journal: Antioxid Redox Signal (2014): 1524

Changes of the Thioredoxin System, Glutathione Peroxidase Activity and Total Antioxidant Capacity in Rat Brain Cortex During Acute Liver Failure: Modulation by L-histidine
Authors: Ruszkiewicz J, Albrecht J.
Journal: Neurochem Res. (2014)

Characterization and structural analysis of human selenium-dependent glutathione peroxidase 4 mutant expressed in Escherichia coli
Authors: Yu Y, Song J, Guo X, Wang S, Yang X, Chen L, Wei J.
Journal: Free Radic Biol Med (2014): 332

Characterization of biochemical properties of a selenium-independent glutathione peroxidase of Cryptosporidium parvum
Authors: Kang JM, Ju HL, Sohn WM, Na BK.
Journal: Parasitology (2014): 570

Clinical significance and therapeutic value of glutathione peroxidase 3 (GPx3) in hepatocellular carcinoma
Authors: Qi X, Ng KT, Lian QZ, Liu XB, Li CX, Geng W, Ling CC, Ma YY, Yeung WH, Tu WW, Fan ST, Lo CM, Man K.
Journal: Oncotarget. (2014)

Construction of a highly stable artificial glutathione peroxidase on a protein nanoring
Authors: Miao L, Zhang X, Si C, Gao Y, Zhao L, Hou C, Shoseyov O, Luo Q, Liu J.
Journal: Org Biomol Chem (2014): 362

Daily rhythms of catalase and glutathione peroxidase expression and activity are endogenously driven in the hippocampus and are modified by a vitamin A-free diet
Authors: Navigatore-Fonzo LS, Delgado SM, Gimenez MS, Anzulovich AC.
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葡糖基转称酶与梭菌酶荧光底物UDP-Gic-FITC

	货号	11705	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 ug	价格	2544
	Ex (nm)	498	Em (nm)	517
	分子量	1283.25	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：11705

产品名称：葡糖基转称酶与梭菌酶荧光底物UDP-Gic-FITC

规格：100ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：1283.25

溶剂：水

激发波长(nm)：490

发射波长(nm)：514

产品介绍

葡糖基转称酶与梭菌酶荧光底物UDP-Gic-FITC是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，尿苷-5′-二磷酸-1-α-D-葡萄糖（UDP-Glc）是碳水化合物代谢的关键中间体。 UDP-Glc作为糖原的前体，可以代谢成UDP-半乳糖和UDP-葡糖醛酸，然后可以将其作为半乳糖和葡糖醛酸掺入多糖中。 UDP-Glc用作蔗糖脂多糖和糖鞘脂的前体。 UDP-Glc是葡糖基转移酶使用的常见底物，包括某些细菌毒素，例如来自梭菌（Clostridium dicile）的毒素A和B. UDP-Glc的荧光类似物可用于研究葡糖基转移酶和梭菌毒素。 该荧光素UDP-Glc衍生物具有与FITC缀合物相同的光谱性质。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的葡糖基转称酶与梭菌酶荧光底物UDP-Gic-FITC。 

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参考文献

cDNA cloning and characterization of UDP-glucose: anthocyanidin 3-O-glucosyltransferase in Freesia hybrida
Authors: Sui X, Gao X, Ao M, Wang Q, Yang D, Wang M, Fu Y, Wang L.
Journal: Plant Cell Rep (2011): 1209

Downregulation of putative UDP-glucose: flavonoid 3-O-glucosyltransferase gene alters flower coloring in Phalaenopsis
Authors: Chen WH, Hsu CY, Cheng HY, Chang H, Chen HH, Ger MJ.
Journal: Plant Cell Rep (2011): 1007

Functional analysis of a rice late pollen-abundant UDP-glucose pyrophosphorylase (OsUgp2) promoter
Authors: Huang Z, Gan Z, He Y, Li Y, Liu X, Mu H.
Journal: Mol Biol Rep (2011): 4291

Identification of a UDP-glucose pyrophosphorylase from cotton (Gossypium hirsutum L.) involved in cellulose biosynthesis in Arabidopsis thaliana
Authors: Wang Q, Zhang X, Li F, Hou Y, Liu X.
Journal: Plant Cell Rep (2011): 1303

Molecular analysis of a UDP-glucose: flavonoid 3-O-glucosyltransferase (UFGT) gene from purple potato (Solanum tuberosum)
Authors: Hu C, Gong Y, Jin S, Zhu Q.
Journal: Mol Biol Rep (2011): 561

Molecular cloning and analysis of the UDP-Glucose Pyrophosphorylase in Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
Authors: Ma Z, Fan HJ, Lu CP.
Journal: Mol Biol Rep (2011): 2751

Regulation of UDP-glucose dehydrogenase is sufficient to modulate hyaluronan production and release, control sulfated GAG synthesis, and promote chondrogenesis
Authors: Clarkin CE, Allen S, Kuiper NJ, Wheeler BT, Wheeler-Jones CP, Pitsillides AA.
Journal: J Cell Physiol (2011): 749

An enzymatic method to distinguish tetrahydrobiopterin from oxidized biopterins using UDP-glucose:tetrahydrobiopterin glucosyltransferase
Authors: Kim HL, Kim do H, Lee YK, Park SO, Lee YW, Kwon OS, Park YS.
Journal: Anal Biochem (2010): 79

Functional characterization of a UDP-glucose:flavonoid 3-O-glucosyltransferase from the seed coat of black soybean (Glycine max (L.) Merr.)
Authors: Kovinich N, Saleem A, Arnason JT, Miki B.
Journal: Phytochemistry (2010): 1253

A chloroplastic UDP-glucose pyrophosphorylase from Arabidopsis is the committed enzyme for the first step of sulfolipid biosynthesis
Authors: Okazaki Y, Shimojima M, Sawada Y, Toyooka K, Narisawa T, Mochida K, Tanaka H, Matsuda F, Hirai A, Hirai MY, Ohta H, Saito K.
Journal: Plant Cell (2009): 892

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光

简要概述

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，碱性磷酸酶是用于ELISA，免疫组织化学，Northern，Southern和Western印迹应用的高度灵敏的酶。 它广泛用于各种生物测定（特别是免疫测定）和基于ELISA的诊断。 这种Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒使用pNPP（一种生色磷酸酶底物）来定量溶液，细胞提取物以及固体表面（如PVDF膜）上的碱性磷酸酶活性。 该试剂盒通过我们优化的“混合和读取”测定方案提供所有必需组分，该方案与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
2.添加ALP工作溶液（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测400nm处的吸光度增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 pNPP储备液（100X）：
将300μL蒸馏水加入pNPP小瓶（组分A）中。 好好混合。 应立即使用pNPP储备溶液。 注意：如果妥善保存，解决方案应该有效期为3-4周。

1.2 碱性磷酸盐标准溶液：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

2.标准溶液

碱性磷酸盐标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 然后取100μL的1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液进行1:10稀释，得到100 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。 然后进行1：3连续稀释以获得剩余标准品（AS6-AS1）。 注意：应丢弃未使用的稀释碱性磷酸酶标准溶液部分。

3.工作溶液

将50μLpNPP储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.05mL的pNPP工作溶液。

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.在上清液中：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液，使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLpNPP工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

1.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

2.在细胞中：

2.1根据需要处理细胞。

2.2将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）中。 注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

参考文献

An mTOR Signaling Modulator Suppressed Heterotopic Ossification of Fibrodysplasia Ossificans Progressiva
Authors: Kyosuke Hino, Chengzhu Zhao, Kazuhiko Horigome, Megumi Nishio, Yasue Okanishi, Sanae Nagata, Shingo Komura, Yasuhiro Yamada, Junya Toguchida, Akira Ohta
Journal: Stem cell reports (2018): 1106–1119

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Journal: bioRxiv (2018): 332551

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测Ex / Em = 360/450 nm处的荧光强度（截止= 435 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 MUP Plus 原液（250X）：
将100μL无菌H2O加入到MUP Plus （组分A）的小瓶中，制成250X MUP Plus 原液。 应立即使用MUP Plus 原液。

1.2 碱性磷酸酶标准溶液（100 mU / mL）：
加入100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），得到100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL标准溶液，在H2O-0.1％BSA中进行1:10，得到100 mU / mL标准溶液（AS7）。 然后取100 mU / mL标准溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）。 注意：应丢弃未使用部分稀释的碱性磷酸酶标准溶液。

3.工作溶液

将20μL250XMUP Plus 储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，制成碱性磷酸酶工作溶液。 注意：避光。 为每个实验准备新鲜的碱性磷酸酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

表1.在实心黑色96孔微孔板中的碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1-100mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.在上清液中进行碱性磷酸盐测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

1.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm，发射= 450±10nm（截止= 435nm）监测荧光增加。

2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2向每个细胞孔中加入等体积的碱性磷酸酶工作溶液（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）。 注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL碱性磷酸酶工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm，发射= 450±10nm（截止= 435nm）监测荧光增加。

参考文献

The impact of various scaffold components on vascularized bone constructs
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