泪液粘蛋白检测试剂盒 Tear Mucin Assay kit

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泪液粘蛋白检测试剂盒泪液粘蛋白检测试剂盒                              Tear Mucin Assay kit

Tear Mucin Assay kit

  本试剂盒的原理是在碱性条件下,O-聚糖通过β氢脱离反应从核心蛋白中脱离的同时,在糖链还原末端标记荧光,根据荧光强度检测泪液中的粘蛋白含量。



◆背景

  粘蛋白是泪液和眼表上皮顶端细胞膜的主要组分,由O-糖链结合核心蛋白而成。其中,核心蛋白是由10-80氨基酸残基,通过高度O-糖基化的丝氨酸和苏氨酸残基串联重复结构域而组成。,而具有亲水性质的O-聚糖占粘蛋白重量的一半以上(图1)。重糖基化的粘蛋白具有高负电荷和亲水性,该特性具有阻止病原体粘附或穿透进入上皮的功能(图2)。干眼病患者眼表面粘蛋白及其分泌均发生改变(图2)。在眼表上皮,存在三种类型的粘蛋白,由结膜杯状细胞表达的大凝胶形成的粘蛋白MUC5AC,一些来自泪腺腺泡的细胞表达小溶性粘蛋白MUC7,角膜和结膜上皮细胞表达膜相关粘蛋白MUC1,4和16(图2)。

泪液粘蛋白检测试剂盒                              Tear Mucin Assay kit


 图1 粘蛋白的构造 


泪液粘蛋白检测试剂盒                              Tear Mucin Assay kit


2 围绕在角膜表面的粘蛋白表达以及泪液粘蛋白的屏障功能


 

泪液粘蛋白检测试剂盒                              Tear Mucin Assay kit


图3 泪液粘蛋白的防护机能

  泪液中粘蛋白的减少被认为是干眼症的病因。泪液中的粘蛋白可大致分为两大类,分别是分泌型粘蛋白以及膜型粘蛋白(图2)。分泌型粘蛋白包括MUC5AC(由结膜杯状细胞分泌)、MUC7(由泪腺分泌);膜型粘蛋白包括MUC1、MUC4、MUC16(存在于角膜上皮的细胞膜上)等。

 

 

◆特点


●  本试剂盒的原理是在碱性条件下,O-聚糖通过β氢脱离反应从核心蛋白中脱离的同时,在糖链还原末端标记荧光,根据荧光强度检测

  泪液中的粘蛋白含量。

  使用检测泪液量的泪液分泌试纸可检测泪液中粘蛋白的含量。
  可用于针对干眼症等眼部问题的药物及保健食品的研发以及眼科相关研究。



◆试剂盒组成


NO.

组成

规格

数量

贮存温度

1

提取液

 30 mL 


4~10℃

2

凝胶过滤载体

 45 mL

3

标准液

(100 µg/mL 

N-乙酰)

1.0 mL 

4

试剂 A

0.3 mL

5

试剂 B

1.5 mL

6

反应停止液

15 mL

7

空柱

1 mL用

50

8

离心管

50

该试剂盒包含检测数目泪液黏蛋白所有组件

 


◆应用


  用于测定泪液中粘蛋白含量。

测定原理


  粘蛋白属于高分子(1000 kda-10000 kda)重糖基化蛋白家族,主要由富含苏氨酸与丝氨酸的核心蛋白组成。糖链N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)的还原末端与翻译后的O-糖基化氨基酸连接(图1)。在碱性条件下,O-聚糖通过β氢脱离反应从核心蛋白中脱离的同时,在高温下糖链还原末端与2-氰基乙酰胺(2-CAN)反应产生强烈荧光缩合物,根据荧光强度检测泪液中的粘蛋白含量。

检测步骤


● 本产品专为荧光(96孔板)测量而设计。

● 使用荧光读板机可以测量100个样品。

● 使用分光光度计测量时,请使用微细胞。



样品制备

● 使用Schirmer氏泪液分泌条收集泪液5分钟。

● 储存泪液分泌条收集的泪液时,请放入微量试管中,并在4℃保存,同时避免冻结。



泪液粘蛋白的测定

1、将泪液分泌条转移至微量试管中,加入 200 μL 缓冲液洗脱,并在室温下提取粘蛋白1小时。

2、在步骤1的1小时内,准备空柱,并将空柱放入离心管中。搅拌凝胶浆液至均匀后,将 800 μL 凝胶浆液加入到空柱中,并在室温下以 800×g 

   离心 10 分钟,(推荐使用具有摆动转子系统的离心机。)去除管中底部液体。

3、将步骤1用泪液分泌条提取的 50 μL 粘蛋白加入到步骤2凝胶的上部。

4、在室温下以 800×g 离心加有样品的柱子 10 分钟,并收集过滤的样品组分(约50 μL)。


泪液粘蛋白检测试剂盒                              Tear Mucin Assay kit


5、将每次通过的组分(4)或标准溶液(①~⑧)的 20 μL 转移到另一个微量试管(500 μL)中。在试管中加入 24 μL 混合试剂(使用前,

   将试剂A和试剂B以 1:5 的体积混合)。混合后,将试管加热至100℃ 30分钟。

6、将试管冷却至室温后,加入 200 μL 终止溶液,并用涡旋混合器混匀。

7、将100 μL溶液放入96孔黑色孔板中,设置波长(荧光:336 nm,发射:383 nm)后用荧光读板机测量。

8、按照如下稀释浓度创建标准曲线。


  构建校准曲线,并从标准曲线中读取样品浓度。


标准曲线:


泪液粘蛋白检测试剂盒                              Tear Mucin Assay kit


参考数据:

建议测量 Ex 时使用 336 nm 波长,测量 Em 时使用 383 nm,但使用具有干涉滤光片系统的荧光板作为前导时,可能无法测量荧光波长,这种情况下,需将荧光波长调到较长数值。



相关产品信息请点击:粘蛋白检测试剂盒


参考文献

[1]


Gipson IK, Hori Y, Argüeso P. Character of ocular surface mucins and their alteration in dry eye disease.(2004)Ocul Surf., Apr;2(2):131-48


[2]


Argüeso P, Balaram M, Spurr-Michaud S, Keutmann HT, Dana MR, Gipson IKGipson IK et al., Decreased levels of the goblet cell mucin MUC5AC in tears of patients with Sjögren syndrome. (2002) Invest Ophthalmol Vis Sci, April; 43(4): 1004-11


[3]


Uchino Y, Uchino M, Yokoi N, Dogru M, Kawashima M, Okada N, Inaba T, Tamaki S, Komuro A, Sonomura Y, Kato H, Argüeso P, Kinoshita S, Tsubota, Alteration of tear mucin 5AC in office workers using visual display terminals: The Osaka Study. (2014) JAMA Ophthalmol., Aug;132(8):985-92


[4]


natomi T, Spurr-Michaud S, Tisdale AS, Zhan Q, Feldman ST, Gipson IK. Expression of secretory mucin genes by human conjunctival epithelia. (1996) Invest Ophthalmol Vis Sci., Aug;132(8):985-92


[5]


Susumu Honda, Yoshikazu Matsuda, Masaye Takahashi, and Kazuaki Kakehi Fluorimetric Determination of Reducing Carbohydrates with2-Cyanoacetamide and Application to Automated Analysis of Carbohydrates as Borate Complexes. (1980) Analytica Chimica, Vol. 52, No. 7


[6]


Crowther RS, Wetmore RF: Fluorometric assay of O-linked glycoproteins by reaction with 2-cyanoacetamide. Anal Biochem 163: 170-174, 1987.


[7]


Okazaki Y, Han Y, Kayahara M, Watanabe T, Arishige H, Kato N. Consumption of curcumin elevates fecal immunoglobulin A, an index of intestinal immune function, in rats fed a high-fat diet. J Nutr Sci Vitaminol (2010); 56(1): 68-71.


[8]


Yukako Okazaki, Hiroyuki Tomotake, Kazuhisa Tsujimoto, Masahiro Sasaki,and Norihisa Kato. Consumption of a Resistant Protein, Sericin, Elevates Fecal Immunoglobulin A, Mucins, and Cecal Organic Acids in Rats Fed a High-Fat Diet. (2011) The Journal of Nutrition , 21, 10.3945/ jn.111.144246.


[9]


Zaki Utama & Yukako Okazaki & Hiroyuki Tomotake & Norihisa Kato, Tempe Consumption Modulates Fecal Secondary Bile Acids, Mucins, Immunoglobulin A, Enzyme Activities, and Cecal Microflora and Organic Acids in Rats. Plant Foods Hum Nutr (2013) 68: 177–183


 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
MUC01  Tear Mucin Assay Kit (O-Glycan Assay Method 1 KIT [50TEST] 

粘蛋白检测试剂盒 Mucin Assay Kit

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粘蛋白检测试剂盒粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

Mucin Assay Kit

——健康和美容研究试剂

 


背景


粘蛋白属于高度糖基化蛋白质家族,是粘膜的主要成分,例如唾液,泪液,胃液,肠液。粘蛋白的 基本构型是枝状糖链连接到多肽的大分子。糖链的非均质特性使其具有多样性,分子具有各种功能,如特异性分子识别。
  一些糖链识别病毒和细菌的特定蛋白质。粘蛋白锚定在肠中粘膜屏障功能中,阻止病原体和毒素通过肠壁进入血管中。该试剂盒可用于检测粪便中的粘蛋白含量。
  粘蛋白属于高分子(1000 kda-10000 kda)高度糖基化蛋白的家族。蛋白质核内的粘蛋白结构域富含苏氨酸、丝氨酸和羟脯氨酸,糖链的还原末端(GalNAc)通过翻译后O-糖基化与这些氨基酸频繁连接。该试剂盒具有确定粪便
粘蛋白含量组分的功能。

  粪便粘蛋白测定可用作肠屏障功能的指标。该试剂盒利用荧光检测来测定粘蛋白的含量。

  我们提供的该试剂盒可以供研究功能性食物和感染的客户使用。

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

步骤1:从粪便中提取和部分纯化粘蛋白。

步骤2:粘蛋白O-糖苷连接的寡糖链的测定通过稀碱进行β-消除,形成糖链的还原端。还原碳水化合物在高温下进行荧光标记以产生荧光缩合

            物。


粘蛋白的结构

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

 试剂盒组分


组件

规格

数量

储存条件

缓冲溶液A

100 mL

3

4-10℃

缓冲溶液B

25 mL

1

缓冲溶液C

25 mL

1

试剂A

1.0 mL

1

试剂B

1.5 mL

2

标准溶液

(GalNA,250 μg/mL)

1.0 mL

1

酶溶液

1.5 mL

1

◆优点特色


●  粘蛋白和 IgA 能阻止细菌和毒素的入侵

●  作为肠屏障的一部分,粘蛋白和 IgA 能防止病原菌和毒素通过肠壁转移到血管内。


测定理论
  通过对粪便中的 β-葡萄糖苷酶热变性防止粪便粘蛋白降解
  ↓
  粗提取粘蛋白
  ↓
  用酶溶液分解淀粉
  ↓
  用乙醇沉淀纯化粘蛋白
  ↓
  将试剂A加入纯化的粘蛋白中,并在碱性条件下进行热处理。 (试剂A将与粘蛋白的糖还原末端反应,并在碱处理后发出荧光)
  ↓
  加入缓冲液C并测定荧光强度(激发336nm,荧光383nm)

  (具体操作请看相关资料)

◆案例应用


喂食高脂肪食物的大鼠肠屏障部分注射多酚的效果

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

图1 粘蛋白定量标准曲线

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

图2 粪便中的粘蛋白含量

应用

  用于测定粪便中的粘蛋白含量。

 


相关资料

粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

Mucin_Assay_Kit.

◆操作步骤


● 本产品是专为荧光酶标仪测量设计(96孔板)。
● 当使用荧光读板机时,可测量100个样品。
● 当使用分光光度计测量时,请使用微细胞。



缓冲液A的制备
用100 mL蒸馏水溶解1块片剂。
粪便粉末的制备:粪便冻干并在研钵中研磨,储存在-20℃备用。

II.粪便粘蛋白的测定
  1称量100 mg粪便粉末放入微量试管(2 mL)中,加入1 mL缓冲液A,然后用涡流混合器混合30秒钟。


粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit

  

  2在95℃下加热试管10分钟使细菌的糖苷酶变性。


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  3在37℃下加热90分钟,从粪便中提取粘蛋白。

  4在4℃下离心20,000×g 15分钟。
  5将200 μL上清液转移到另一个微量试管中,加入200 μL缓冲液B,用涡流混合器混合溶液。

  6加入10 μL酶溶液混合,在50℃下加热试管20分钟分解淀粉。
  7将离心管冷却至室温,加入125 μL的99.5%乙醇,混合后,在-20℃下静置过夜。


粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit


  8次日,在4℃下20,000×g离心10分钟,去上清。向沉淀加入1mL缓冲液A,重溶沉淀。(样品溶液)


粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit


  9、将20 μL样品溶液和标准溶液转移到另一个微量试管(500 μL)中,加入24 μL试剂混合物(使用前以1:5混合试剂A和试剂B),混合后, 100℃下加热微量试管30分钟。

  10、冷却至室温,加入200 μL缓冲液C,用涡流混合器混合。


粘蛋白检测试剂盒                              Mucin Assay Kit


  11将100 μL溶液转移到96孔黑色孔板中,并在波长(例如:336 nm em:383 nm)实用荧光读板机测量荧光强度。
  12通过如下所示的连续稀释创建标准曲线。 通过这些点绘制平滑曲线以构建标准曲线。 通过标准曲线读取样品的浓度。
  13计算1 g粪便中的粘蛋白含量。步骤(12)测得的值的50倍是1g粪中的粘蛋白含量。

Calibrator Number

Quantaity of Standard

Quantaity of Dilution Buffer 

Final Concentration

1

500 μL of Standard Solution

0

250 μg/mL

2

500 μL of Calibrator 1

500 μL

125 μg/mL

3

500 μL of Calibrator 2

500 μL

63 μg/mL

4

500 μL of Calibrator 3

500 μL

31.5 μg/mL

5

500 μL of Calibrator 4

500 μL

15.75 μg/mL

6

500 μL of Calibrator 5

500 μL

7.875 μg/mL

7

0

500 μL

0

工作校准品:N-乙酰葡萄糖胺250 μg/ mL
● 通过连续稀释创建标准曲线,如下图所示。
● 剩余的未稀释校准品应储存在2-10°C。
● 稀释校准品稳定,可在2-10°C保存1个月。

参考文献


[1]

Susumu Honda,Yoshikazu Matsuda, Masaye Takahashi, and Kazuaki KakehiFluorimetric Determination of Reducing Carbohydrates with2-Cyanoacetamide and Application to Automated Analysis of Carbohydrates as Borate Complexes.(1980) Analytical Chemistry, Vol.52, No. 7


[2

Bovee-OudenhovenIM, Termont DS, Heidt PJ, et al.: Increasing the intestinal resistance of rats to the invasive pathogen Salmonella enteritidis: additive effects of dietary lactulose and calcium. Gut 40: 497-504, 1997.


[3

Crowther RS, Wetmore RF: Fluorometric assay of O-linked glycoproteins by reaction with 2-cyanoacetamide. Anal Biochem 163: 170-174, 1987.


[4

Okazaki Y, Han Y, Kayahara M, Watanabe T, Arishige H, Kato N. Consumption of curcumin elevates fecal immunoglobulin A, an index of intestinal immune function, in rats fed a high-fat diet. J NutrSciVitaminol (2010);56(1):68-71.

[5

YukakoOkazaki,HiroyukiTomotake, Kazuhisa Tsujimoto, Masahiro Sasaki,andNorihisa Kato. Consumption of a Resistant Protein, Sericin, Elevates Fecal Immunoglobulin A, Mucins, and Cecal Organic Acids in Rats Fed a High-Fat Diet. (2011) The Journal of Nutrition, 21, 10.3945/jn.111.144246.

[6

ZakiUtama,Yukako Okazaki, Hiroyuki Tomotake, Norihisa Kato, Tempe Consumption Modulates Fecal Secondary Bile Acids, Mucins, Immunoglobulin A, Enzyme Activities, and CecalMicroflora and Organic Acids in Rats. Foods Hum Nutr(2013) 68:177-183

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
CSR-FFA-Mu-K01E Mucin Assay Kit
粘蛋白检测试剂盒
1盒

组胺ELISA试剂盒 Histamine ELISA kit

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组胺ELISA试剂盒组胺ELISA试剂盒                              Histamine ELISA kit

Histamine ELISA kit

2小时高灵敏度检测血清,血浆,尿和组织培养基的组胺含量ELISA试剂盒。

 


◆背景

  组胺是从氨基酸组氨酸合成的内源性短效生物胺,广泛分布在整个身体。组胺是立即型过敏反应的重要介质。通常人体内存在少量的组胺量。有报道称在过敏性反应期间和在研究皮肤和气道的过敏反应的实验系统中血浆和组织的组胺水平会升高。由于其在免疫应答中的有效作用,体内组胺存在处于非常短暂的状态,并且只能在释放后几分钟内可测定。生物系统中组胺的半衰期在其转化为正甲基组胺之前为4分钟。 N-甲基组胺是组胺代谢的主要产物,存在于尿中并且具有比组胺更长的半衰期。对N-甲基组胺和组胺的测定原理是一样的,使这使得测量尿中组胺水平是一个极好选择。

  组胺也是一类称为“小分子神经递质物质”的神经递质。包括5-羟色胺,肾上腺素和多巴胺的分子。此外,组胺在胃酸分泌中起作用,有助于诱导酸生产。



特点


● 灵敏检测组胺,检测低至0.03 ng/mL。

● 独特测定,不需要额外的酰化步骤。

● 动态范围宽,适用于各种样品。

● 获得高通量分析结果2小时,最多40个样品重复。

● 组胺ELISA试剂盒是比色竞争性免疫测定试剂盒,2小时内得到结果。



产品规格

组胺ELISA试剂盒                              Histamine ELISA kit
灵敏度:0.03 ng/mL(0.098-25 ng/mL)
测定时间:2小时
应用:ELISA,比色检测
应用备注:用于定量测定人,小鼠,大鼠和狗(仅血清)样品的组织

                 培养基,血清,血浆和尿中的组胺。
物种反应性:人类,小鼠,大鼠,狗

运送:冰袋
长期存储: 4°C

试剂盒/套装包含:微量滴定板,测定缓冲液13,标准液,浓缩洗涤缓

                             冲液,抗体,示踪剂,偶联物,底物和终止液

案例


组胺ELISA试剂盒                              Histamine ELISA kit 组胺ELISA试剂盒                              Histamine ELISA kit

食品中的组胺检测试剂盒了解详情请点击文字)



参考文献


[1]IL-33 ameliorates Alzheimer's disease-like pathology and cognitive decline: A.K. Fu, et al.; PNAS 113, E2705 (2016),

[2]应用:测量血浆组胺水平,摘要全文

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ENZ-KIT140-0001 Histamine ELISA kit
组胺ELISA试剂盒
96次

Alithea Genomics MERCURIUS BRB-Seq™ 试剂盒 高通量RNA二代测序文库制备试剂盒

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高通量RNA二代测序文库制备试剂盒Alithea Genomics MERCURIUS BRB-Seq™ 试剂盒                              高通量RNA二代测序文库制备试剂盒

Alithea Genomics MERCURIUS BRB-Seq™ 试剂盒

Alithea Genomics MERCURIUS BRB-Seq™ 试剂盒                              高通量RNA二代测序文库制备试剂盒

Bulk RNA Barcoding followed by sequencing(批量RNA条形码和测序,BRB-seq™)是 Alithea 的专利技术。该技术对样品进行条形码标记,再集中到单管中统一处理,大幅减少试剂消耗及人工操作。

 


◆MERCURIUS BRB-seq™ 试剂盒的主要特点


● 第一次逆转录反应后,可立即集中在单管中处理数百个RNA样品

● 减少全程的试剂消耗和人工操作

● 优化测序,以确保从大量样本中获得一致且可重复的数据

● 针对不同组织类型的RNA样本进行了优化

●兼容细胞裂解物(即无需提取RNA)和血液RNA样本(即珠蛋白mRNA去除整合到BRB-seq™ 流程)。

● 可应用于模型生物、植物和体外模型

◆药物发现研究的理想选择

3’mRNA Sequencing of Bulk RNA samples的优势


快速:高通量,人工操作量减少10倍

性价比高:成本更低,试剂消耗减少10倍

稳定:将96个样本作为一个样本处理,降低技术可变性

精确:利用唯一分子标识符 (UMI) 删除PCR重复项

All-in-One:珠蛋白mRNA去除步骤整合到测序流程中,无需进行额外的处理

◆产品列表

产品编号

产品名称

样品

包装

ALG-PN10811

MERCURIUS BRB-seq™ Library Preparation Kit

纯化的RNA或细胞裂解物RNA

1 kit

ALG-PN10821

MERCURIUS Blood BRB-seq™ Library Preparation Kit

纯化的人血RNA

1 kit

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

点击此处下载Alithea Genomics产品彩页


Alithea Genomics MERCURIUS BRB-Seq™ 试剂盒                              高通量RNA二代测序文库制备试剂盒


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

AMPIXTRACT™ 病毒和病原体核酸提取试剂盒

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AMPIXTRACT™ 病毒和病原体核酸提取试剂盒AMPIXTRACT™ 病毒和病原体核酸提取试剂盒


病毒及病原体的核酸提取(目标不限于:流感病毒,人乳头瘤病毒(HPV)丙型肝炎病毒(HCV)SARS-CoV-2阴道鞭毛滴虫(TV沙眼衣原体(CT)和淋球菌(NG))。

 

● 有效性 – 使用磁珠和经优化的提取试剂,分离高质量的DNA和RNA

● 可靠性 – 少量的初始样品中即可稳定提取RNA和DNA

● 验证性 – 对下游应用已进行了验证,如RT-qPCR等

 

AMPIXTRACT™病毒和病原体核酸提取试剂盒利用磁珠技术,对无细胞水溶液中的核酸进行自动化分离和纯化。该试剂盒适用于下游检测方法,如RT-qPCR。该提取法可手动操作,也可应用在自动化平台,如Enzo的 GENFLEX™平台(详情请联系客服了解)或任何开放的第三方试剂提取平台

利用磁珠技术能够纯化不含蛋白质、核酸酶和其他杂质的高质量核酸。经纯化的核酸能直接用于下游应用,例如生物样品中微生物的扩增和定性检测、酶促反应,亦可储存起来备用。

如果您考虑在其他平台上使用该提取试剂盒,请联系我们。



◆产品信息

 应用

 PCR,qPCR

 应用备注

 提取病毒RNA,   用于qPCR 

 使用/稳定性

 收货后:

(1)AMPIXTRACT™ Wash Reagent 和 AMPIXTRACT™ Lysis Reagent在室温下保存。


(2)AMPIXTRACT™ Elution Buffer、AMPIXTRACT™ Magnetic Beads和

(2)AMPIXTRACT™ PK Dilution Buffer在4°C保存。


(3)AMPIXTRACT™ Stabilizer、AMPIXTRACT™ Carrier RNA和

(2)AMPIXTRACT™ Proteinase在-20°C下保存。

 运输条件

 蓝冰运输

 试剂盒组成

 AMPIXTRACT™ Wash Reagent

 AMPIXTRACT™ Lysis Reagent

 AMPIXTRACT™ Elution Buffer

 AMPIXTRACT™ Magnetic Beads

 AMPIXTRACT™ PK Dilution Buffer

 AMPIXTRACT™ Stabilizer

 AMPIXTRACT™ Proteinase

 AMPIXTRACT™ Carrier RNA

 技术信息/产品备注

 ENZ-GEN249-0960 试剂盒单个组分的 MSDS如有要求可以提供

 规管状态

 RUO – 仅限科研使用

◆产品列表

产品编号

产品名称

包装

ENZ-GEN249-0960

AMPIXTRACT™ Viral & Pathogen Nucleic Acid Extraction Kit

AMPIXTRACT™ 病毒和病原体核酸提取试剂盒

960 Reactions

ENZ-GEN249-0096

96 Reactions

相关产品

产品编号

产品名称

包装

ENZ-GEN-FLX-RUO

GENFLEX® Molecular System

1 EA

ENZ-NUC108-1000

AMPIGENE® qPCR 1-Step Green Kit Lo-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC108-0200

200 Reactions

ENZ-NUC109-1000

AMPIGENE® qPCR 1-Step Green Kit Hi-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC109-0200

200 Reactions

ENZ-NUC110-1000

AMPIGENE® qPCR 1-Step Probe Kit Lo-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC110-0200

200 Reactions

ENZ-NUC111-1000

AMPIGENE® qPCR 1-Step Probe Kit Hi-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC111-0200

200 Reactions

ENZ-NUC112-1000

AMPIGENE® qPCR 1-Step Probe Kit No-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC112-0200

200 Reactions

ENZ-NUC103-1000

AMPIGENE® qPCR Green Mix Lo-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC103-0200

200 Reactions

ENZ-NUC104-1000

AMPIGENE® qPCR Green Mix Hi-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC104-0200

200 Reactions

ENZ-NUC105-1000

AMPIGENE® qPCR Probe Mix Lo-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC105-0200

200 Reactions

ENZ-NUC106-1000

AMPIGENE® qPCR Probe Mix Hi-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC106-0200

200 Reactions

ENZ-NUC107-1000

AMPIGENE® qPCR Probe Mix No-ROX

1000 Reactions

ENZ-NUC107-0200

200 Reactions

ENZ-NUC100-1000

AMPIGENE® Taq Mix

1000 Reactions

ENZ-NUC100-0200

200 Reactions

ENZ-NUC100-0040

40 Reactions

ENZ-NUC101-1000

AMPIGENE® HS Taq Mix

1000 Reactions

ENZ-NUC101-0200

200 Reactions

ENZ-NUC101-0040

40 Reactions

ENZ-NUC102-0500

AMPIGENE® dNTP Mix

500 µL

ENZ-GEN105-0100

CYGREEN® Nucleic Acid Dye

100 µL

ENZ-PRT100-0500

AMPIGENE® Taq DNA Polymerase

500 U

ENZ-PRT101-0500

AMPIGENE® HS Taq DNA Polymerase

500 U

ENZ-KIT106-0200

AMPIGENE® cDNA Synthesis Kit

200 Reactions

ENZ-KIT106-0050

50 Reactions

ENZ-KIT105-1000

AMPIGENE® 1-Step RT-PCR Kit

1000 Reactions

ENZ-KIT105-0200

200 Reactions

ENZ-KIT105-0050

50 Reactions

※以上所有产品仅供实验研究用,不可用于人体,不可用作医药、食品、临床诊断等。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

Long ssDNA Gel Extraction Kit 长链单链DNA专用胶回收试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

长链单链DNA专用胶回收试剂盒Long ssDNA Gel Extraction Kit                              长链单链DNA专用胶回收试剂盒

Long ssDNA Gel Extraction Kit

本试剂盒用于在琼脂糖凝胶电泳后,将目的单链DNA从凝胶中切割下来后以离心柱法进行提取和纯化。

※ 本产品仅用于研究,研究以外不可使用。

 


◆特点


● 可以高回收率和高纯度地提取长链单链DNA,长链单链DNA在普通试剂盒中回收率低于双链DNA

● 试剂盒包含DNA染料,可在可见光下观察电泳中的条带

● 本系列包含可达3 kb的单链DNA纯化用和3~10 kb的单链DNA纯化用两种试剂盒

 


◆操作方法概率

Long ssDNA Gel Extraction Kit                              长链单链DNA专用胶回收试剂盒

◆试剂盒内容


● 离心柱(25 次)

● 琼脂糖凝胶溶解缓冲液

● 清洗缓冲液

● 洗脱缓冲液

● DNA染料(结晶紫溶液)

 


应用实例

Long ssDNA Gel Extraction Kit                              长链单链DNA专用胶回收试剂盒

◆相关产品


~1.5 kb用/3.0 kb用的单链DNA制备试剂盒

Long ssDNA Preparation Kit for 1.5 kb & 3.0 kb

根据专利申请中的新技术Nicking酶法,制备高纯度且拥有正确序列的长单链DNA(ssDNA, 1,500 base或3,000 base)



关于单链DNA的制备


单链DNA应用多样。单链DNA的传统制备方法包括使用PCR合成DNA片段、核酸外切酶反应转录酶反应等的工序,所以难以避免内部的突变以及产生末端的缺失。另外纯化时使用变性丙烯酰胺凝胶电泳和链霉亲和素固化磁珠等,被指出会混入大量的dsDNA。

Long ssDNA Preparation Kit操作简单,可以获得高纯度且有目的序列的长单链DNA。

 


3~10 kb用的单链DNA制备试剂盒


Long ssDNA Preparation Kit for 10 kb

挑战长单链DNA的极限!可制备达10 kb的单链DNA。

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
DS640 Long ssDNA Gel Extraction Kit for 3kb 25 tests
DS650 Long ssDNA Gel Extraction Kit for 10kb 25 tests

DNA index kits酶试剂盒Takara

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。

DNA index kits
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech R400664 DNA HT Dual Index Kit – 24N 48 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400660 DNA HT Dual Index Kit – 96N Set A 96 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400661 DNA HT Dual Index Kit – 96N Set B 96 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400662 DNA HT Dual Index Kit – 96N Set C 96 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400663 DNA HT Dual Index Kit – 96N Set D 96 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400665 DNA Unique Dual Index Kit – 24U Set A 48 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400666 DNA Unique Dual Index Kit – 24U Set B 48 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400667 DNA Unique Dual Index Kit – 24U Set C 48 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400668 DNA Unique Dual Index Kit – 24U Set D 48 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400695 DNA Single Index Kit – 12S Set A 96 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
Clontech R400697 DNA Single Index Kit – 12S Set B 96 Rxns 询价 DNA index kits DNA index kits DNA index kits
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无标题文档

 
 
DNA index kits
· 提供兼容Illumina NGS文库的index
· 最多可用于384个DNA-seq文库
· 可提供单端index或双端index
· 兼容:
   – PicoPLEX WGA Kit
   – PicoPLEX Gold Single Cell DNA-Seq Kit
   – ThruPLEX DNA-Seq Kit
   – ThruPLEX Plasma-Seq Kit
   – ThruPLEX Tag-Seq kits
 
DNA index kits含有PCR引物,是与 ThruPLEX或 PicoPLEX文库制备试剂盒搭配使用,用以构建Illumina测序文库的index引物试剂盒。
 
 
 
 

 

页面更新:2022-08-30 16:17:55

血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒 microRNA Extractor(R) SP Kit

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

血清·血浆(Serum·Plasma)microRNA提取试剂盒血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit

microRNA Extractor(R) SP Kit

 


本产品主要用于提取人(或者实验动物:小鼠等)血清、血浆中microRNA。不使用苯酚和氯仿等有害物质,蛋白酶和离液剂、离心柱组合使用可简便且高效率获得血清·血浆中microRNA。适用于提取血液循环microRNA,各种疾病研究、检测活体转染实验中血液siRNA残留量样本的制备。

血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit

◆试剂盒组成(50次/试剂盒)


(1) Lysis Solution 19 mL×1 bottle
(2) Reducing Agent 50 μL×1 vial
(3) Protease Solution 500 μL×1 vial
(4) Enhancer 500 μL×1 vial
(5) Wash Solution
Ⅰ 12 mL×1 bottle
(6) Wash SolutionⅡ 21 mL×1 bottle
(7) Elution Solution 5 mL×1 bottle
(8) Spin Column 50 columns
(9) Collection Tube 50 tubes



需要以下试剂


1-Butanol(Code No.022-16035)
2-Propanol(Code No.168-21675)

Ethanol(Code No.054-07225)



<用前注意事项>


血浆的抗凝剂请使用EDTA或者柠檬酸。如果使用肝素的话,会影响RNA提取后的PCR检测。

 


◆实验流程


详细实验流程请看相关资料的说明书



正常人血浆microRNA提取·定量结果


内源性has-miR-16定量结果           内源性has-miR-451定量结果

血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit


本产品比以往方法有更高的提取效率(试剂盒·试剂的比较对象)

A公司试剂盒:有机溶剂与硅胶膜柱组合产品

B公司试剂盒:有机溶剂与硅胶膜柱组合产品

C公司试剂:AGPC法产品。

 


正常人血浆·血清microRNA提取·定量结果


内源性has-miR-16 定量结果

血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit


本产品的血浆、血清提取率比其他产品高

左图:正常人血浆(抗凝剂:EDTA)右图:正常人血清

定量检测:TaqMan® MicroRNA Assays(Life Technologies公司

上图显示在血浆·血清提取效率方面,本试剂盒比A公司产品更高。另外,血浆比血清含有更多microRNA。

 


大鼠血浆·血清microRNA提取·定量结果


内源性rno-miR-16 提取▪定量结果

血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit

● 提取对象:实验动物亦可

● 血浆的抗凝剂:EDTA。

● 定量检测:TaqMan® MicroRNA Assays(Life Technologies公

      司)。

● 已确认在实验动物(大鼠)的血浆以及血清的提取效率方面,使用

      本试剂盒比A公司试剂盒高。

回收效率的可重复性评估


                                                        正常人血浆滴加cel-miR-238定量回收结果


血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit

  



● 确认可重复性高

● 定量检测:TaqMan® MicroRNA Assays(Life Technologies公

      司)。

● 左图是添104~108拷贝数的cel-miR-238至正常人血浆(抗凝剂:柠檬

      酸钠)的回收率。

● 在添加104拷贝数/test的低浓度下能够稳定地回收microRNA,回收

      率在60%-80%。与基因组DNA和total RNA相比获取较困难的低分子

      RNA也具有高回收率。

● 注意:将Protocol记录的洗脱液添加量从50 μL提升到100 μL,回收率

      增加5~20%。

相关资料


血清•血浆(Serum•Plasma)microRNA提取试剂盒                              microRNA Extractor(R) SP Kit

说明书

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
295-71701 microRNA Extractor(R) SP Kit
血清•血浆microRNA提取试剂盒
50次
291-70201 microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 
microRNA纯化试剂盒,人/鼠Ago1
10次
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 
microRNA纯化试剂盒,人Ago2
10次
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 
microRNA纯化试剂盒,小鼠Ago2
10次
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 
microRNA纯化试剂盒,人Ago3
10次

ISOSPIN Plant RNA 从植物组织提取RNA试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

从植物组织提取RNA试剂盒ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA


ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

  ISOSPIN Plant RNA用于从植物组织提取和纯化RNA。本产品的原理是在离液剂离子条件下,RNA吸附于二氧化硅。无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂。所使用的离心柱最大限度地确保了柱容积,内封的硅胶模确保足够的RNA吸附容量和高洗脱率。
  本试剂盒采用离心法去除杂物,在硅胶模上进行 DNase I 处理,提取和纯化高纯度RNA用时仅约1小时。



◆特点


  • 高纯度 RNA

       离心法去除杂物和硅基质膜上的 DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

  • 无需使用过滤器

       无需使用过滤器样品均匀化或过滤时后。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

  • 无需苯酚、氯仿

       无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

  • 包装附有 DNase I

       试剂盒内含有 DNase I (RNase free),不需另外购买。


◆产品列表

ISOSPIN Plant RNA (50次用量)

产品

容量

保存

备注

PT Extraction Buffer

30 mL x 1支

室温

PT Binding Buffer

40 mL x 1支

室温

含乙醇

PT Wash1 Buffer

40 mL x 1支

室温

含乙醇(清洗液)

PT Wash2 Buffer

40 mL x 1支

室温

含乙醇(清洗液)

DNase I (RNase free)

2,000 units x 1支

-20°C

10× DNase I Buffer

1 mL x 1支

-20°C

ddWater (RNase free)

1 mL x 8支

室温

调制DNase I 溶液・洗提

离心柱

50 支 x 1袋

冷藏

上端组成:吸附柱
下端组成:收集管

运送方法


  NIPPON GENE提供直送服务,将室温品和冷藏品的试剂盒、-20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱,在常温下进行运输。



◆使用实例


ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒


Data.1 RNA的回收量标准

  本产品可提取的RNA的回收量标准如下表。

样品


菠菜(叶)

0.5 μg RNA/mg 组织

青花菜(芽)

1.0 μg RNA/mg组织

卷心菜(种子)

1.3 μg RNA/mg组织

卷心菜(芽)

1.4 μg RNA/mg组织

卷心菜(叶)

0.1 μg RNA/mg组织

竹子(叶)

0.3 μg RNA/mg组织

郁金香(球根)

0.2 μg RNA/mg组织

Data.2 从卷心菜(十字花科)种子及从叶子提取RNA

  使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品按照步骤提取卷心菜的种子(约 4 mg)和叶(约 30 mg)的RNA。用吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板逆进行转录,使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

实验条件

1.  样品量
  ・种子(约4 mg)
  ・叶(约30 mg)

2.  变性凝胶电泳
  ・凝胶:1% Agarose S(甲醛变性)
  ・RNA添加量:种子(1 μg)/叶(0.5 μg)
  ・RNA Ladder:与RNA添加量等量

3.  实时qPCR
  ・试剂:GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX
  ・装置:ABI 7500 Fast
  ・模板cDNA:以提取出的总RNA为模板进行逆转录
  ・扩增片段长度:441 bp
  ・实验次数: n=3

结果

  从吸收光谱结果看,在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低,说明本产品更能有效去除多糖类杂物(图1)。

卷心菜种子

卷心菜叶

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

图1 吸收光谱

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

【RNA添加量】

  种子(1 μg)/叶子(0.5 μg)


【Marker】
  RNA Ladder(与RNA的添加量等量)
  1% Agarose S(甲醛变性)

图2 变性凝胶电泳

卷心菜种子

卷心菜叶

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

图3 实时qPCR

【试剂】

  GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX

【模板】

  以提取出的总RNA为模板进行逆转录

【装置】ABI 7500 Fast

【扩增片段长度】441 bp

【循环数】n=3

红色: ISOSPIN Plant RNA
绿色: A公司产品



Data.3 从竹子(禾本科)愈伤组织提取RNA

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

竹子愈伤组织

(淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)形成)

  

使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品,按照步骤对各样品量竹子愈伤组织提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录,使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时 qPCR。

  ※本实验使用的竹子愈伤组织由富山县立大学荻田信二郎博士(现公立大学法人县立广岛大学)提供。竹子愈伤组织委托理化学研究所 BioResource Center 获得的淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)培养形成的。

实验条件

1.  样品量
  ① 约 65 mg
  ② 约 50 mg
  ③ 约 40 mg


2.  琼脂糖凝胶电泳
  ・凝胶:0.8% 琼脂糖 S/TAE
  ・RNA添加量:最终提取量的1/10(5 μL)
  ・Marker:OneSTEP Marker6(5 μL)


3.  实时qPCR
  ・试剂:GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
  ・装置:ABI 7500 Fast
  ・模板cDNA:以提取的总RNA为模板进行逆转录
  ・扩增片段长度:197 bp
  ・循环数: n=3

结果

  从吸收光谱结果看,在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低,说明更能有效去除多糖类杂物(图1)。根据琼脂糖凝胶电泳比较结果显示,ISOSPIN Plant RNA更有效提取出RNA(图2)。

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

图1 吸收光谱

图2 变性凝胶电泳

【凝胶】

  0.8% 琼脂糖 S/TAE

【RNA添加量】

  最终提取量的1/10(5 μL)

【Marker】

  OneSTEP Marker6(5 μL)

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒



【试剂】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX


【装置】ABI 7500 Fast


模板cDNA】以提取出的总RNA为模板进行逆转录


【扩增片段长度】197 bp


【循环数】n=3

图3 实时qPCR

Data.4 从郁金香(百合科)球根中提取RNA


ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

     

提取液的粘性状态
左:ISOSPIN Plant RNA
右:B公司产品

  使用 ISOSPIN Plant RNA 与B公司产品,按照步骤对郁金香球根(100 mg)提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录,使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时qPCR。

  郁金香球根样品粘性高,提取困难。郁金香球根在液氮中碎成粉末状后,取1.5 mL移至离心管,并在各公司提取Buffer中用研磨棒磨碎,右图将离心管倒置比较溶液的粘性。

实验条件

1.  样品量

  100 mg

2.  琼脂糖凝胶电泳
  RNA添加量:最终提取量的1/10(5 μL)

结果

  ISOSPIN Plant RNA 也能从粘性高的郁金香球根提取出RNA。

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA                              从植物组织提取RNA试剂盒

 最终提取量的1/10(5 μl)

图1吸收光谱

图2 琼脂糖凝胶电泳

◆备注

  

  · 本产品仅用于实验研究,不能作医药及其他目的使用。

◆资料 Data Sheet

产品指南

  ·ISOSPIN Plant RNA(PDF 299KB)


SDS(Safety Data Sheet)

  ·ISOSPIN Plant RNA (PDF)


宣传册子

  ·ISOSPIN Plant RNA宣传册子(PDF 2.7MB)

◆相关产品

  ·Collection Tube(收集管单品套装)

  ·ISOSPIN Cell & Tissue RNA (提取动物细胞、动物组织的RNA)

  ·ISOSPIN Plasmid (提取大肠杆菌质粒)

  ·ISOSPIN PCR Product (纯化PCR产物)

  ·ISOSPIN Agarose Gel (纯化琼脂糖凝胶的DNA)

  ·ISOSPIN Blood & Plasma DNA (提取血液、血清、血浆的DNA)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
310-08171 ISOSPIN Plant RNA 50次用量

ISOSPIN Cell & Tissue RNA 从动物细胞和组织提取RNA试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

从动物细胞和组织提取RNA试剂盒ISOSPIN Cell & Tissue RNA                              从动物细胞和组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Cell & Tissue RNA

ISOSPIN Cell & Tissue RNA                              从动物细胞和组织提取RNA试剂盒

◆特点


 高纯度RNA

 离心法去除杂物和硅基质膜上的DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

 无需使用过滤器进行前处理

 无需使用过滤器对样品均匀化或过滤。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

 无需苯酚、氯仿

 无需苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

 包装附有DNase I

 试剂盒内含有DNase I (RNase free),无需另外购买。

◆产品列表

ISOSPIN Cell & Tissue RNA (50次用量)


产品

包装

保存

备注

PT Extraction Buffer(组织用)

30 mL × 1 支

室温

C Extraction Buffer(细胞用)

30 mL × 1 支

室温

PT Binding Buffer

40 mL × 1 支

室温

含有乙醇

PT Wash1 Buffer

40 mL × 1 支

室温

含有乙醇(清洗液)

PT Wash2 Buffer

40 mL × 1 支

室温

含有乙醇(清洗液)

DNase I (RNase free)

2,000 units × 1 支

-20°C

10× DNase I Buffer

1 mL × 1 支

室温/ -20°C

ddWater (RNase free)

1 mL × 8 支

室温

配制DNase I 溶液・洗脱

Spin Column

50 支 × 1 袋

冷藏

上端组成:吸附柱
下端组成:收集管

运送方法


NIPPON GENE 提供直送服务,将室温品和冷藏品的试剂盒、-20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱,在常温下进行运输。

◆使用实例

步骤

  动物培养细胞:往动物细胞(不超过3×106 cells)里加入600 μL的C Extraction Buffer(细胞用),用移液器溶解细胞。

  动物组织: 取新鲜动物组织(不超过10 mg)或冷冻组织置于1.5 mL微量离心管,加入600 μL PT Extraction Buffer(组织用),直接用研磨

                         杵捣碎。涡旋30 秒以上。

  ▶ 提取步骤如下:

ISOSPIN Cell & Tissue RNA                              从动物细胞和组织提取RNA试剂盒

Data 1 RNA的回收量标准和吸光谱

RNA的回收量标准

HeLa细胞

15 μg RNA/10cells

Jurkat细胞

10 μg RNA/10cells

Vero 细胞

15 μg RNA/106 cells

小鼠脑

1.0 μg RNA/mg tissue

小鼠肝脏

3.5 μg RNA/mg tissue

小鼠肾脏

3.0 μg RNA/mg tissue

小鼠精巢

1.5 μg RNA/mg tissue

RNA的吸光度

ISOSPIN Cell & Tissue RNA                              从动物细胞和组织提取RNA试剂盒

Data 2 从培养细胞(HeLa)中提取RNA

ISOSPIN Cell & Tissue RNA                              从动物细胞和组织提取RNA试剂盒


1%凝胶琼脂糖 S

右端: Marker 6

泳道 1, 2, 3

各0.5μg


  从1×106 HeLa细胞中提取出RNA后,进行吸光值测定和电泳(n = 3)。

260/280

260/230

µg/106 cells

2.035±0.019

2.254±0.028

19.30± 4.69

◆备注


  本产品仅用于实验研究,不能作医药及其他目的使用。

◆资料 Data Sheet

产品指南

  · ISOSPIN Cell & Tissue RNA(PDF 356KB)

SDS(Safety Data Sheet)

  · ISOSPIN Cell & Tissue RNA (PDF)

宣传册子

  · ISOSPIN Cell & Tissue RNA 手册(PDF 1MB)

◆相关产品

  · Collection Tube (收集管单品套装)

  · ISOGEN II (total RNA和small RNA提取试剂)

  · ISOGEN、ISOGEN-LS(RNA提取试剂)

  · ISOGEN with Spin Column(RNA提取试剂)

  · ISOSPIN Plant RNA (从植物组织提取RNA试剂盒)

  · ISOSPIN Plasmid (从大肠杆菌中提取质粒)

  · ISOSPIN PCR Product (PCR产物的纯化)

  · ISOSPIN Agarose Gel (琼脂糖凝胶中DNA的纯化)

  · ISOSPIN Blood & Plasma DNA (从血液、血清、血浆中提取DNA)


Q:与RNA提取试剂 ISOGEN 的使用区别是?

A:两者有以下的区别,请根据实验目的进行选择。

  • ISOGEN 含有苯酚等抑制RNase活性的成分,样品溶液(匀浆)可中途冷冻保存。
  • 虽然在步骤过程中,不可保存ISOSPIN Cell & Tissue RNA,但无需苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

  • ISOGEN 是在溶液分层后使用乙醇沉淀提取RNA,能简单地扩大提取。
  • ISOSPIN Cell & Tissue RNA 使用离心柱进行提取,操作简单,适合多样品处理。

Q:用 RNA later®(RNA稳定剂)保存的样本也可使用本试剂盒提取RNA吗?

A:可以提取。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
314-08211 ISOSPIN Cell & Tissue RNA 50次用量

SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina酶试剂盒Takara

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。

SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635029 SMARTer® smRNA-Seq Kit for Illumina 12 Rxns ¥8,777 SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
Clontech 635030 SMARTer® smRNA-Seq Kit for Illumina 48 Rxns ¥31,178 SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
Clontech 635031 SMARTer® smRNA-Seq Kit for Illumina 96 Rxns ¥55,431 SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
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SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina   SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
 
SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina  
 
 
SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina—高灵敏度,低偏差的小RNA测序
· 分析不同种类的小RNA—适用于15-150 nt 小RNA测序文库构建
· 起始样品灵活—可以 1 ng-2 μg总RNA或富集的小RNA起始
· Illumina-ready 测序文库—无需接头连接即可添加Illumina接头和indexes序列
· 快速的单管操作—~3 h即可构建测序文库(不包括检测和PCR后片段筛选过程)
 
发现和分析小非编码RNA(smRNAs)已经成为理解基因表达调控非常重要的一部分。一些熟知的小RNA种类如miRNAs, siRNAs, piRNAs和snoRNAs长度在20到30 nt。 SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina专门设计用于从这些微量小RNA中构建高品质Illumina-ready测序文库。
试剂盒可以直接从1 ng-2 μg总RNA或富集的小RNA样品起始,与SMART-Seq V4 Kit相同,采用了SMART技术和LNA技术,不需要接头连接即可构建测序文库,可以确保多种类小RNA的代表性,并且偏差很小。
 
SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
图1. SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina技术流程
 
SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
图2. SMART法smRNA-seq的准确性
 
SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
表1. 不同类型,不同起始量的总RNA主要测序数据
 
Technote:
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SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina SMARTer smRNA-Seq:
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SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
 
产品详情请点击:SMARTer smRNA-Seq Kit for Illumina
 
 

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Poly(A)+全 RNA 提取试剂盒 Poly(A)+ Isolation Kit from Total RNA

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

Poly(A)+全 RNA 提取试剂盒Poly(A)+全 RNA 提取试剂盒                              Poly(A)+ Isolation Kit from Total RNA

Poly(A)+ Isolation Kit from Total RNA

◆原理


  本产品能够将 RNA 中提纯 Poly A+ RNA 的试剂盒,能够在短时间内得到高纯度的 Poly A+ RNA 。而且,本产品还附有 Ethachinmate,能够简单地对得到的 Poly A+ RNA 进行浓缩

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
317-05641 Poly(A)+ Isolation Kit from Total RNA
 Poly(A)+全RNA提取试剂盒
20次用

磁珠型microRNA分离试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

磁珠型microRNA分离试剂盒磁珠型microRNA分离试剂盒

FUJIFILM Wako提供能使从Ago 免疫沉淀到RNA 提取等一系列实验操作简化的“microRNA Isolation Kit”系列。使用本系列试剂盒能简便地从人和小鼠的细胞或组织中提取Ago蛋白结合的microRNA以及靶mRNA,还能从培养上清、血清、血浆中提取游离Ago蛋白结合的microRNA。所提取到的RNA可以应用于qPCR、微阵列检测、NGS等下游实验。本系列包括采用磁珠的MagCapture™ microRNA Isolation Kit,以及采用了硅胶珠法的microRNA Isolation Kit。


磁珠型microRNA分离试剂盒

MagCapture™ microRNA Isolation Kit(磁珠法)系列产品包括含抗人Ago2抗体(4G8)、抗小鼠Ago2抗体(2D4)、抗Ago1-4抗体(1G3)固相化磁珠这三种试剂盒,以及第四种——能结合任意抗体的Protein G磁珠。上述试剂盒全部采用磁珠法,可进行简易的免疫沉淀操作并获得良好的重复性。免疫沉淀后提取的RNA可进一步使用离心柱纯化,获得高纯度的RNA;若使用含有抗Ago抗体固定化磁珠的3种试剂盒,也可使用一步法更加简便地提取RNA(备注:RNA与磁珠不分离)。

◆试剂盒组成(例:Human Ago2, 10次用)


  1. Anti-Human Ago2 Magnetic Beads Solution:600 μL×1瓶

  2. Cell Lysis Solution:20 mL×1瓶

  3. Washing Solution for IP:40 mL×1瓶

  4. Elution Solution I for IP:500 μL×1瓶

  5. Elution Solution II for IP:500 μL×1瓶

  6. Binding Solution for Spin Column:2 mL×1瓶

  7. Binding Enhancer for Spin Column:100 μL×1瓶

  8. Washing Solution I for Spin Column:3 mL×1瓶

  9. Washing Solution II for Spin Column:4 mL×1瓶

10. Elution Solution for Spin Column:1 mL×1瓶

11. Spin Column/Collection Tube:10瓶

◆操作示意图


磁珠型microRNA分离试剂盒

◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Human Ago2 使用例子(人)


提取人细胞株中的microRNA


通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(银染),检测使用本品(MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Human Ago2)从人K562细胞(1×107 cells)中提取的microRNA(图1)。结果显示,本系列试剂盒可提取得到高纯度的microRNA。通过qPCR对miR-92a进行定量,比较使用本品和硅胶珠型产品(microRNA Isolation Kit,Human Ago2)提取的microRNA量(图2)。本系列试剂盒的离心柱法具有几乎与硅胶珠法相同的microRNA提取能力,而且一步法的microRNA提取能力比硅胶珠法更好。


磁珠型microRNA分离试剂盒


图1. 对从人K562细胞中提取的microRNA的进行银染检测


磁珠型microRNA分离试剂盒


图2. 比较从人K562细胞中提取的microRNA量

提取人血浆中的游离Ago2蛋白结合microRNA


以qPCR对miR-92a进行定量,比较使用磁珠型MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Human Ago2和硅胶珠型产品从200 μL健康人混合血浆中提取的microRNA量。结果发现,本试剂盒中的离心柱法具有几乎与硅胶珠型产品相同的microRNA提取能力,而且一步法的microRNA提取量比硅胶珠型高(图3)。


磁珠型microRNA分离试剂盒


图3. 比较从人血浆中提取的microRNA量

提取microRNA的靶标mRNA

向miR-122低表达的肝癌细胞株HepG2细胞(5×105 cells)导入人工合成的miR-122或调控的荧光素酶siRNA(Luc siRNA),提取了分别用磁珠型MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Human Ago2和硅胶珠型产品制备的Ago2 IP RNA,以及用ISOGEN® 制备的total RNA。运用qPCR法比较各种RNA中含有的miR-122量(图4)与其靶标mRNA(Aldo A mRNA是miR-122靶标之一,以GAPDH内参作校正)量(图5)。与硅胶珠型产品一样,本品提取的RNA中富集了miR-122和Aldo A mRNA,因此,可以利用本品提取microRNA的靶标mRNA。另一方面,用ISOGEN® 制备的total RNA中的Aldo A mRNA会随着miR-122的增加而分解并减少。


磁珠型microRNA分离试剂盒


图4. miR-122提取量的比较

磁珠型microRNA分离试剂盒


图5. 靶标mRNA提取量的比较




◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 使用例子(小鼠)


从小鼠细胞株中提取microRNA

通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(银染),检测用本试剂盒(MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Mouse Ago2)从小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中提取的microRNA(图1)。结果显示,本品能提取出高纯度的microRNA。另外,以qPCR法对miR-92a进行定量,比较使用硅胶珠型产品(microRNA Isolation Kit,Mouse Ago2)提取到的microRNA量(图2)。结果发现,本品的离心柱法具有与硅胶珠型产品几乎同样的microRNA提取能力,而一步法的microRNA提取能力比硅胶珠型产品更好。


磁珠型microRNA分离试剂盒


图1. 对从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA的进行银染检测

磁珠型microRNA分离试剂盒


图2. 比较从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量




从大鼠血浆中提取游离Ago2蛋白结合microRNA

通过qPCR对miR-92a进行定量,比较使用本品以及硅胶珠型产品从200μL大鼠血浆中提取到的microRNA量。本品的离心柱法具有与硅胶珠型产品几乎同样的microRNA提取能力,而一步法的microRNA提取能力比硅胶珠型产品更好(图3)。


磁珠型microRNA分离试剂盒

图3. 比较从大鼠血浆中提取的microRNA量

◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago 1–4 使用例子(人)


提取Ago1–4结合microRNA


用各种Ago1、Ago2、Ago3、Ago4特异性抗体进行微阵列检测分析免疫沉淀后HeLa中的各个RNA组分,结果显示,Ago2中捕获了大量miR-22和miR-16,而Ago1、Ago3、Ago4中则捕获了大量的miR-1260b和miR-4286(表1)。


信号强度

信号比

名称

Ago1 IP

Ago2 IP

Ago3 IP

Ago4 IP

Ago2/Ago1

Ago2/Ago3

Ago2/Ago4

hsa-miR-22

3521.4

21696.5

3771.2

292.4

6.16

5.75

74.2

hsa-miR-16

6886.3

28527.2

5013.4

582.5

4.14

5.69

48.97

hsa-miR-1260b

2060.3

540.9

1270.6

1977.9

0.26

0.43

0.27

hsa-miR-4286

678.8

202.4

2019.2

471.2

0.3

0.1

0.43


表1. 微阵列检测分析结果


上述分析结果验证了我们可以利用MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago1-4,从Ago1、Ago3、Ago4中提取硅胶珠型产品难以提取的大量microRNA。

使用本品和硅胶珠型产品,提取HeLa细胞(1×107 cells)中的microRNA,以miR-92a作为内部标准,通过qPCR检测miR-22、miR-1、miR-1260b、miR-4286的提取量。结果发现,Ago1、Ago3、Ago4中miR-1260b、miR-4286的提取量比硅胶珠型产品更高(图1)。因此,本品不仅能提取Ago2中的microRNA,还能从Ago1、Ago3、Ago4中提取硅胶珠型产品难以提取的大量microRNA。


磁珠型microRNA分离试剂盒

图1. 比较从HeLa细胞中提取的各种microRNA量




提取人和小鼠细胞株中的microRNA

以qPCR对miR-92a进行定量,比较用本品和硅胶珠型产品(microRNA Isolation Kit, Human Ago2或Mouse Ago2)从人K562细胞(1×107 cells)及小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中提取的microRNA量。结果显示,本品可提取和硅胶珠型产品相同甚至更多的microRNA(图2,3)。


磁珠型microRNA分离试剂盒

图2. 比较从人K562细胞中提取的microRNA量



磁珠型microRNA分离试剂盒

图3. 比较从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量




提取人和大鼠血浆中的游离Ago结合microRNA


以qPCR对miR-92a进行定量,比较用本品和第一代产品(microRNA Isolation Kit, Human Ago2或Mouse Ago2)从200 μL人以及大鼠血浆中提取的microRNA量。结果显示,本品可提取和硅胶珠型产品相同甚至更多的microRNA(图4,5)。


磁珠型microRNA分离试剂盒

图4. 比较从人血浆中提取的microRNA量



磁珠型microRNA分离试剂盒

图5. 比较从大鼠血浆中提取的microRNA量




提取各种动物细胞株中的microRNA


以qPCR对miR-92a进行定量,检测用MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2、Mouse Ago2、Ago1-4从2×106 cells的K562细胞(人)、COS-7细胞(猴)、MDCK细胞(狗)、P388D1细胞(小鼠)、SCC-131细胞(大鼠)中提取的免疫沉淀组分中的microRNA量,和用ISOGEN® 从各种细胞中提取的total RNA组分中的microRNA量。通过比较各种免疫沉淀所得到的RNA组分中的miR-92a量和total RNA组分中的miR-92a量的相对值,表明本品适合提取上述全部细胞中的microRNA(图6)。


磁珠型microRNA分离试剂盒

图6. 比较从各种动物细胞中提取的microRNA量

◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Protein G使用例子

提取人和小鼠细胞株中的microRNA(与硅胶珠型产品的比较)

以qPCR法对miR-92a进行定量,比较用本品(MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Protein G)和抗Ago1抗体(2A7)、抗人Ago2抗体(4G8)、抗人Ago3抗体(1C12)从人K562细胞(1×107 cells)提取的microRNA量,和用硅胶珠型产品(microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1、Human Ago2、Human Ago3)提取的micro RNA量(图1,2,3,)。另外,以qPCR对miR-92a进行定量,比较用本品和抗小鼠Ago2抗体(2D4)从小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中提取的microRNA量,和用硅胶珠型产品(microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2)提取的microRNA量(图4)。结果发现,本品与任意抗Ago抗体结合使用,能比硅胶珠型产品提取到更多的microRNA。


磁珠型microRNA分离试剂盒


图1. 比较结合了抗Ago1抗体时的microRNA提取量

磁珠型microRNA分离试剂盒

图2. 比较固定抗人Ago2抗体时的microRNA提取量



磁珠型microRNA分离试剂盒

图3. 比较固定抗人Ago3抗体时的microRNA提取量



磁珠型microRNA分离试剂盒

图4. 比较固定抗小鼠Ago2抗体时microRNA的提取量




提取人与小鼠细胞株中各种Ago蛋白结合microRNA


通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和qPCR,对用本品和抗Ago1抗体(2A7)、抗人Ago2抗体(4G8)、抗人Ago3抗体(1C12)、抗Ago4抗体(2G7)从人K562细胞(1×107 cells)中提取的miR-92a表达量进行检测(图5)。另外,通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和qPCR(miR-92a量),检测用本品和抗Ago1抗体(2A7)、抗小鼠Ago2抗体(2D4)、抗小鼠Ago3抗体(S09)、抗Ago4抗体(2G7)从小鼠P388D1细胞(2×107 cells)中提取的microRNA量(图6)。结果表明,本品与任意的抗Ago抗体组合使用,能提取与各种Ago结合的microRNA


磁珠型microRNA分离试剂盒

图5. 从人K562细胞中提取的microRNA量的比较与银染检测

磁珠型microRNA分离试剂盒

图6. 从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量的比较与银染检测

◆产品列表


产品编号

产品名称

使用

抗体

克隆号

对应

物种

对应样本

提取RNA

IP   B/F
分离法

RNA
提取法

295-74001

MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2
MagCapture™ microRNA

分离试剂盒,人Ago2

4G8

人、猴、狗

细胞/

组织
血清/

血浆

microRNA
靶标mRNA

磁力

分离

离心

柱法

一步法

297-74201

MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Mouse Ago2
MagCapture™ microRNA

分离试剂盒,小鼠Ago2

2D4

小鼠、大鼠、狗

293-74801

MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Ago 1-4
MagCapture™ microRNA

分离试剂盒,Ago1-4

1G3

人、猴、狗、小鼠、大鼠

microRNA

299-74401

MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Protein G
MagCapture™ microRNA

分离试剂盒,蛋白G

随意

选择

根据使用的抗体而定

细胞/

组织

根据使用的抗体而定

一步法

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。



产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
295-74001 MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2
MagCapture™microRNA分离试剂盒,人Ago2
10 tests for Genetic Research
297-74201 MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Mouse Ago2
MagCapture™microRNA分离试剂盒,小鼠Ago2
10 tests for Genetic Research
293-74801 MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Ago 1-4
MagCapture™ microRNA分离试剂盒,Ago1-4
10 tests for Genetic Research
299-74401 MagCapture™ microRNA Isolation Kit,Protein G
MagCapture™microRNA分离试剂盒,蛋白G
20 tests for Genetic Research

低起始量DNA ChIP-Seq酶试剂盒Takara

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。

低起始量DNA ChIP-Seq
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634865 DNA SMART ChIP-Seq Kit – 12 12 Rxns ¥7,908 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq
Clontech 634866 DNA SMART ChIP-Seq Kit – 48 A 48 Rxns ¥23,872 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq
Clontech 634867 DNA SMART ChIP-Seq Kit – 48 B 48 Rxns ¥23,872 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq
Clontech 634887 ChIP Elute Kit 50 Rxns ¥5,186 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq 低起始量DNA ChIP-Seq
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ChIP Elute Kit 和DNA SMART ChIP-Seq Kit—
以微量DNA模板构建Illumina测序文库
· 快速的(1h)DNA洗脱和ChIP解交联
· 无需接头连接即可构建ChIP-seq 文库
· DNA起始样品灵活:100 pg–10 ng ssDNA或dsDNA
· 4 h左右即可构建Illumina-ready测序文库
 
有3种规格可以选择:
· DNA SMART ChIP-Seq Kit-12 包含1条正向引物和12条反向indexing引物,
   最多可以构建12个indexed文库
· DNA SMART ChIP-Seq Kit-48 A 包含第一组4条正向引物和12条反向indexing引物,
   最多可构建48个indexed文库
· DNA SMART ChIP-Seq Kit-48 B 包含第二组4条正向引物和12条反向indexing引物,
   最多可以构建48个indexed文库
ChIP Elute Kit采用快速、简便的方法将染色质免疫沉淀实验(ChIP)获得的DNA进行解交联,洗脱和纯化,替代了长时间、繁琐的ChIP实验后期操作。单链DNA(ssDNA)回收只需1 h左右(传统方法通常需要过夜)并可直接用于DNA SMART ChIP-Seq Kit实验。
DNA SMART ChIP-Seq Kit无需接头连接即可在DNA片段末端添加Illumina®专用测序接头。由于ChIP实验获得DNA量比较少,构建ChIP测序(ChIP-seq)文库通常比较困难,尤其是抗体是针对低丰度转录因子时。DNA SMART ChIP-Seq Kit可以从100 pg–10 ng DNA起始构建测序文库用于Illumina平台测序。无论是ChIP实验获得的ssDNA还是双链DNA(dsDNA)都可直接用于DNA SMART ChIP-Seq Kit,从而兼容ChIP Elute Kit或其他方法。本试剂灵敏度高,操作时间少,只需4 h即可从微量DNA起始构建高质量测序文库。
DNA SMART ChIP-Seq Kit采用Takara全新的适用于DNA模板的专利SMART技术(日本专利第 6336080号),构建下一代测序(NGS)文库用于Illumina平台测序。DNA SMART ChIP-Seq Kit的核心模板转换技术,可以微量样品起始,无需接头连接即可添加Illumina测序接头。
 
低起始量DNA ChIP-Seq
图1. DNA SMART ChIP-Seq Kit技术流程
 
低起始量DNA ChIP-Seq
表1. 采用ChIP Elute和传统解交联方法获得DNA构建文库测序数据比较
 
低起始量DNA ChIP-Seq
表2. 不同DNA起始量主要测序数据
 
Technote:
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低起始量DNA ChIP-Seq
 
产品详情请点击:低起始量DNA ChIP-Seq

页面更新:2022-01-26 09:34:22

甲基化DNA-Seq酶试剂盒Takara

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甲基化DNA-Seq
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635023 EpiXplore Meth-Seq DNA Enrichment Kit 12 Rxns ¥14,256 甲基化DNA-Seq 甲基化DNA-Seq 甲基化DNA-Seq
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EpiXplore Meth-Seq DNA Enrichment Kit—甲基化DNA下一代测序
· 快速,用户友好的分离甲基化和非甲基化DNA片段操作流程
· 无需接头连接即可构建测序文库
· 25 ng-1 μg的剪切基因组DNA起始
· 约4 h即可以富集的DNA构建Illumina-ready测序文库
 
EpiXplore Meth-Seq DNA Enrichment Kit 是可以从剪切的基因组DNA中分离甲基化和非甲基化片段,并以富集的DNA片段构建Illumina测序文库的完整系统。富集过程采用目前EpiXplore Methylated DNA Enrichment Kit采用的his-tagged MBD2蛋白质和Capturem Nanoprep Columns进行,约2 h即可分离甲基化、非甲基化片段。接下来,采DNA SMART技术,可以甲基化(或非甲基化,若需要)DNA片段构建Illumina测序文库。
文库构建过程中,DNA SMART技术可以不通过接头连接的方法在DNA片段末端添加Illumina测序接头。这种高灵敏度的技术可以微量DNA样品构建高效测序文库,并且操作时间短,只需4 h。
 
甲基化DNA-Seq
图1. DNA SMART技术流程
 
甲基化DNA-Seq
图2. 甲基化、非甲基化DNA片段分离流程
 
Technote:
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甲基化DNA-Seq
 
产品详情请点击:甲基化DNA-Seq
 
 

页面更新:2019-11-06 10:36:41

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2酶试剂盒Takara

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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634478 SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit v2 12 Rxns ¥23,613 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
Clontech 634479 SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit v2 48 Rxns ¥51,657 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
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· 适合不同起始量样本:支持total RNA(10 ng-1 μg外周血淋巴细胞来源或 1 ng-100 ng T细胞来源 total RNA),或者纯化后完整的T细胞(1,000-10,000个)起始;
· 无需多对引物:每次反应仅需一对引物扩增相应的TCR亚基;
· 更灵敏特异的克隆型分析:优化的cDNA文库构建技术,确保克隆型的可靠分析;
· 添加UMI校正:引入UMI建库,校正PCR偏差及测序错误产生的reads;
· 更可靠的样本-数据拆析结果:整合UDI建库,在高通量型Illumina测序仪上有更好的样本拆析与测序可靠性;
· 更灵活的测序平台选择可自由选择Miseq平台(分析V(D)J 全长信息),或是其它Illumina平台(分析CDR3区),支持最多192个样本同时测序;
· 完整的流程:搭配特别开发的Cogent NGS Immune Profiler Software*完成测序数据分析;
*科研及盈利机构在用TCRv2建库、测序后,均可免费使用Cogent NGS Immune Profiler Software分析测序数据
 
■ 产品说明
T细胞是获得性免疫反应的重要组成部分,其表面受体蛋白(T cell receptors, TCRs)发挥着识别抗原分子的作用。NGS是解析TCR多样性的主流技术,对揭示个体获得性免疫反应的奥秘提供了宝贵的技术支撑。
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2 (TCRv2)是一款具有更高重复性和特异性的TCR NGS文库构建试剂盒。该试剂盒整合SMART(Switching Mechanism at 5′ end of RNA Template)全长cDNA合成技术与5’RACE技术,可捕获TRATRB基因完整的V(D)J可变区,用于后续NGS分析。
TCRv2试剂盒支持不同input量的RNA(RIN≥8,取决于样本类型)或细胞起始,均可获得高品质的测序文库,如外周血淋巴细胞total RNA(10 ng-1 μg)、T细胞total RNA(1 ng-100 ng),或纯化后完整的T细胞(1,000-10,000)。文库中可同时包含α链和β链的多样性信息。
同时,TCRv2试剂盒包含UMI(Unique Molecular Identifier),用以去除PCR偏差及测序错误所产生的reads,提供更正确和可靠的结果。
相较于前代产品,TCRv2所建文库支持更多样的测序平台。既支持Miseq平台(分析V(D)J全长信息),也支持其它Illumina平台(分析CDR3区)。 此外,TCRv2试剂盒还整合了UDI(Unique Dual Index),能更正确拆析采用图案化流动槽技术(Patterned flow cell)测序平台(如NovaSeq system)的下机数据,同时也支持更多样本同时测序。
特别开发的Cogent NGS Immune Profiler Software,能直接对Illumina测序仪的下机数据进行高品质的TCR profiling分析,包括克隆型的鉴定与计数、V(D)J区域的序列分析。
 
■ 建库原理
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
 
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
 
■ 不同起始量克隆型检测数据
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
图1 不同的RNA或者T细胞起始量,均能获得高灵敏性和重复性的克隆型检测数据
 
Takara科学家以1、10、100 ng 人CD3+ T细胞total RNA和1,000、10,000个CD3+T细胞制备TRATRB文库,测序reads用Cogent NGS Immune Profiler软件分析。结果显示,无论采用RNA还是以复杂度较高的T细胞直接起始,TCRv2试剂盒所建文库均能获得良好的克隆型检测数据。
 
■ 灵敏度测试数据
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
图2 Takara科学家向100 ng PBMC RNA样本中掺入不同浓度(10%,1%,0.1%,0.01%,0.001%和0.0001%)的Jurkat T细胞RNA(包含TRBV12-3-TRBJ1-2克隆型)。采用TCRv2试剂盒扩增TRB CDR3区域并制备文库、NextSeq系统测序。测序reads downsample至 2.5M reads。灰色标记的是所混入的Jurkat RNA检出下限,结果显示,在未通过UMI数据校正时,TRBV12-3的检测极限为0.01%,但是在UMI数据校正的情况下,检测极限下探至0.001%!
 
■ 同类产品比较实验
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
图3 为了比较不同TCR分析方法(DNA based VS RNA based)的性能差异,Takara科学家分别以TCRv2(RNA based, 5’RACE)、Company X(RNA based,接头连接法)、Company Y(DNA based, 多重PCR)作为文库构建方案。接着分离了500万个PBMC细胞作为gDNA和RNA的提取材料,并以1.6 μg gDNA和100 ng RNA制备文库,分析TCR a/b文库的克隆型数量。从结果中可以看出,TCRv2文库获得TRATRB基因平均4.87万和16.3万个克隆型检测数据,远高于Company X RNA方法及Company Y DNA方法所获得克隆型数量!
*NT Not Tested
数据来源于Takara Bio USA, Inc.
 
SMART Human TCR-Seq v2:
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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
 
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ISHR启动试剂盒 ISHR Starting Kit

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

ISHR启动试剂盒                              ISHR Starting Kit

ISHR Starting Kit

in situ Hybridization用试剂



  本产品为首次使用in situ Hybridization(ISH)法的研究者提供石蜡包埋组织切片专用的练习试剂盒。包含RNA探针制备用试剂,ISH用试剂以及对照探针用的模板DNA,组织切片等。研究者也可以同时制备准备的ISH的样本。

 


◆使用次数


  载玻片~20个×2次

 


◆试剂盒内容


RNA探针制备用试剂


制备对照探针用模板DNA

● 小鼠神经生长因子(NGF)基因(1 μg/μL)

● 反义链用··2 μL

● 正义链用······2 μL

强碱分解缓冲液 室温保存

● 0.1 mol/L 碳酸钠(pH10.2)··800 μL

Ethachinmate

● Ethachinmate················10 μL

● 3 mol/L 醋酸钠(pH5.2)·····100 μL

RNA Synthesis Set

● 5×RNA Polymerase Buffer・・20 μL

● 250 mmol/L    NaCl・・・・・・・10 μL

● 10 mmol/L      rATP・・・・・・・・5 μL

● 10 mmol/L      rGTP・・・・・・・・5 μL

● 10 mmol/L      rCTP・・・・・・・・5 μL

● 10 mmol/L      rUTP・・・・・・・・5 μL

● RNaselnhibitor・・・・・・・・5 μL

● SP6 RNA Polymerase・・・・・ 5 μL

● T7 RNA Polymerase・・・・・・5 μL

● T3 RNA Polymerase・・・・・・5 μL

● DNase(RT Grade)・・・・・・5 μL

● H2O・・・・・・・・・・・・500 μL



对照用组织切片


● 小鼠(雄性)成年 颌下腺 4个

In situ Hybridization用试剂(载玻片~20个×2次)

 

试剂名

组成

ISHR 1

PBS Buffer・・800 mL×2个

0.1 mol/L NaCl, 10 mmol/L 磷酸钠(pH 7.4)

ISHR 2

PBS(Glycine)Buffer・・・400 mL×1个

0.1 mol/L NaCl, 10 mmol/L 磷酸钠(pH 7.4),2 mg/mL Glycine

ISHR 3

Acetylation Buffer・・・・800 mL×1个

0.1 mol/L Triethanolamine(pH 8.0)

ISHR 4

Acetic Anhydride・・・・ 1 mL×2个

Acetic Anhydride

ISHR 5

4×SSC・・・・・・・・・・・1 L×2个

0.6 mol/L NaCl, 0.06 mol/L Sodium citrate

ISHR 6

Proteinase K Solution・・ 200 μL×1个

10 mg/mL Proteinase K

ISHR 7

Hybridization Buffer・・・93 μL×8个

50% Formamide, 2×SSC, 1 μg/μL tRNA, 1 μg/μL Salmon

  sperm DNA, 1 μg/μL BSA, 10% Dextran sulfate

ISHR 8

1.2mol/L DTT Solution・・100 μL×1个

1.2 mol/L DTT

ISHR 9

NTE Buffer・・・・・・・・800 mL×1个

0.5 mol/L NaCl, 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0), 1 mmol/L   EDTA

ISHR 10

RNase A Solution・・・・0.40 mL×2个

10 mg/mL RNase A

ISHR 11

0.1×SSC・・・・・・・・・・600 mL×2个

15 mmol/L NaCl, 1.5 mmol/L Sodium citrate


本产品不含有以下试剂

固定剂,组织包埋试剂,载玻片涂层试剂,乙醇,二甲苯,甲酰胺,地高辛(DIG)标记和检测试剂,染色试剂,放射自显影试剂。

※「ISHR 4」是特定麻药的原料和精神药物的原料)


<使用时注意>

根据切片的大小和数量,所需试剂量会变化。请购买单买短缺的单品。


参考文献


[1] Noji, S. et al. : Nature, 350, 83 (1991).
[2] Pardue, M. L. : “In situ hybridization in Nucleic acid hybridization”, IRL Press (1985).
[3] Noji, S., Yamaai, T., Koyama, E. and Taniguchi, S. : Radioisotopes, 38, 366 (1989).
[4] Noji, S., Takahashi, N., Nohno, T., Koyama, E., Yamaai, T., Muramatsu, M. and Taniguchi, S. :Acta. 
Histochem.Cytochem., 

        23, 353 (1990).

[5] Kiyama, H., Emson, P. C. and Tohyama, M. :Neurosci. Res., 9, 1 (1990).
[6] 中根一穂 : 「In situ ハイブリダイゼーション手法」(学際企画)(1989).
[7] 野村慎太郎 : 実験医学, 7(13)(増刊)(1989).
[8] 野地澄晴編 : 実験医学別冊 「免疫染色・in situ ハイブリダイゼーション」 (1997).

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
314-02611  ISHR启动试剂盒
ISHR Starting Kit
1 kit

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit酶试剂盒Takara

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635016 SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit 96 Rxns ¥61,300 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit—
获得TCR-α和TCR-β链V(D)J可变区全长序列
· 完整的 V(D)J序列信息—获得TCR mRNA转录本可变区全长序列
· TCR-alpha 和 TCR-beta—分析TCR2个亚基的多样性,无论是同一实验还是单独实验
· 起始样品灵活—可以10 ng-3 μg 外周血RNA或50-10,000个纯化T细胞起始
· 无需多重PCR—每次反应利用一对引物扩增相应的TCR亚基
· Illumina-ready 测序文库—无需接头连接即可添加Illumina接头和index序列
· 灵敏度高—即使是测序深度很低的情况下也可检测低丰度TCR序列
· 出色的重复性—在不同起始量情况下可以获得一致性很好的结果
 
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit给需要开展T细胞受体(TCR)NGS分析的研究者提供了一种新的强大的解决方案。试剂盒采用类似于5’RACE的方法,可以人血液RNA(10 ng-3 μg)或完整淋巴细胞(50-10,000 个纯化T细胞)起始,捕获TCR V(D)J完整可变区域。顾名思义,本试剂可以在同一实验或单独实验中获得TCR-alpha和TCR-beta链多样性数据。与采用多重PCR方法研究TCR多样性不同,每轮文库扩增只使用针对不同TCR亚基的一个引物对扩增。构建的文库添加了index序列可用于Illumina®测序平台测序。
试剂采用了SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template)技术和LNA技术,可以无偏扩增TCR mRNA序列,并具有很高的灵敏度。
 
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
图1. SMARTer 法文库构建流程及TCR多样性分析PCR策略
 
 
Technote:
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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMART human TCR-Seq:
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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
 
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SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit酶试剂盒Takara

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SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634402 SMARTer® Mouse TCR a/b Profiling Kit 12 Rxns ¥12,665 SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit
Clontech 634403 SMARTer® Mouse TCR a/b Profiling Kit 48 Rxns ¥39,921 SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit
Clontech 634404 SMARTer® Mouse TCR a/b Profiling Kit 96 Rxns ¥63,453 SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit
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SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit—
获得TCR-α和β链 V(D)J可变区全长序列
· 完整的V(D)J序列信息—获得TCR mRNA转录本可变区的全长序列
· TCR-α和β链—同时或单独分析TCR两个亚基的多样性
· 无需多重PCR—每次反应利用一对引物扩增相应的TCR亚基
· Illumina-ready测序文库—无需接头连接即可添加Illumina接头和index序列
 
SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit 为那些寻求对T细胞受体(TCR)库进行NGS分析的研究者提供了一种强大的新的解决方案。试剂基于5’-RACE 方法可以捕获TCR转录本完整V(D)J 可变区,可以低至10 ng 至500 ng的来源于小鼠脾脏、胸腺或PBMCs的总RNA起始,也可以1,000 至 10,000个纯化的T细胞起始。顾名思义,本试剂可以在同一实验或单独实验中获得α和β链链多样性数据。
与采用多重PCR方法研究TCR多样性不同,每轮文库扩增只使用针对不同TCR亚基的一对引物扩增,提高了效率,减少了引物二聚体形成的可能性。基于多重PCR的分析方法,众所周知容易形成与引物相关的序列特异性偏差;这些偏差在我们基于RACE的方法中不会存在,因为所有的可变区都由相同的恒定区序列引发。采用本试剂~4 h即可构建indexed文库用于Illumina平台测序。
试剂采用了SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template) 技术和LNA技术,可以无偏扩增TCR mRNA序列,并具有很高的灵敏度。
 
SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit
图1. SMARTer 法文库构建流程及TCR多样性分析PCR策略
 
 
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SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit酶试剂盒Takara

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SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634466 SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit 12 Rxns ¥14,567 SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
Clontech 634467 SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit 48 Rxns ¥42,305 SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
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无标题文档

 
SMARTer® Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
捕获人的BCR转录本完整V(D)J 可变区
· 起始样品量: 从外周血单核细胞(PBMC)纯化的10 ng-1μg的总RNA或从B细胞纯化的1-100 ng的总RNA
· 通过添加UMI,校正来自PCR错误、重复序列以及序列错误的读取
· cDNA文库构建经过优化,可以灵敏、特异地检测克隆型
· 可准确扩增并通过测序鉴别人IgG亚类
· 经过优化的PCR pooling策略,可以高灵敏度地从同一样品中检测不同链
· 灵活的pooling策略适用于不同的实验需求,以比对、识别原始链序列
· 可以使用Cogent NGS Immune Profiler Software进行序列数据分析的完整工作流程
 
新推出的SMARTer Human BCR IgG H/K/L Profiling Kit基于5’RACE和NGS技术,提供了一种灵敏,准确,优化的BCR库分析方法。通过5’RACE方法减少了变异性并且可以从BCR重链或轻链的恒定区引发扩增。该试剂盒将这些优点与基因特异性扩增相结合可以捕获BCR完整V(D)J可变区,提供了一种高灵敏度、可重复的B细胞库分析方法。
该试剂盒设计的可以从外周血单核细胞(PBMC)纯化的10 ng-1μg的总RNA或从B细胞纯化的1-100 ng的总RNA,生成Illumina文库。可以为人免疫球蛋白IgG和IgM的重链和轻链(κ和λ)生成数据。该试剂盒还包括特别的分子条形码(UMI),从而可以消除PCR错误或duplication以及测序偏向,从而确保获得更准确和可靠的结果。
测序结束后,可以使用Takara Bio Immune Profiler Software分析数据,该软件使用基于UMI的纠错功能,并可以使用MIGEC(Shugay,2014年)和MiXCR软件(Bolotin,2015年)。该软件支持高质量的BCR分析,包括克隆型计数和鉴别以及V(D)J区域的序列信息。
 
SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
图1. SMARTer Human BCR IgG H/K/L Profiling Kit技术流程
 
Panel A 第一链cDNA合成由dT引物(RT引物)起始,MMLV衍生的SMARTScribe反转录酶会在mRNA模板5’末端添加几个非模板核苷酸。SMART UMI Oligos与这几个非模板核苷酸互补结合作为模板,通过RT在第一链cDNA末端添加额外核苷酸序列(也就是模板转换步骤)。然后第一链cDNA经过两轮基因特异性的PCR扩增(详见Panel B)。第二轮的巢式PCR扩增可以确保绝大多数的reads比对到B细胞受体的转录本上。
 
Panel B 第一轮PCR以第一链cDNA为模板,引物包括与Illumina Read Primer 2序列互补的正向引物(PCR1 Universal Forward primer),以及与BCR重链或轻链恒定区互补的反向引物(PCR1 IgG/IgM/IgK/IgL Reverse primers)。以Read Primer 2序列和恒定区起始,第一轮PCR特异性扩增了BCR重链或轻链cDNA的完整可变区及部分恒定区。第二轮PCR以第一轮PCR的产物为模板,采用半巢式引物(PCR2 IgG/IgM/IgK/IgL Reverse primers)扩增BCR重链或轻链的cDNA的完整可变区及部分恒定区。
 
SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
图2. 从1-100 ng B细胞RNA中鉴定出的克隆型信号
 
从1 ng,10 ng和100 ng人CD19 + B细胞总RNA中,利用本试剂盒制备BCR分析IgG,IgM,IgK和IgL文库。为了进行分析,对于1 ng,10 ng和100 ng的RNA起始,分别将文库down-sampling至100,000个,400,000个和5,000,000个reads,然后利用Takara Bio Immune Profiler Software处理。
 
SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
图3. 散点图展示了用1μg PBMC RNA生成的文库之间的一致性
 
以来自健康供体的1μg PBMC RNA起始,一式两份制备IgG,IgM,IgK和IgL文库。通过down-sampling至1300万次读取来分析该文库。该图包括来自技术重复的所有四个文库(IgG,IgM,IgK和IgL)。
 
SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
图4. 来自不同供体的PBMC RNA的克隆型计数
 
对来自8个供体的10 ng PBMC RNA(不同颜色代表不同供体),分别使用SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit来鉴别IgG,IgM,IgK和IgL的克隆型。文库归一化为100,000 reads以进行分析。
 
SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
图5. 10 ng PBMC RNA文库的测序饱和度评估
 
以来自单个供体的10 ng PBMC RNA起始,使用SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Kit制备BCR分析文库。
 
Panel A 显示了不同测序深度的IgG克隆型计数,其中蓝线和紫线分别是指经过UMI修正误差和没有经过UMI修正误差的数据。IgG和其他链(IgM,IgK和IgL未在图中展示)按每个文库150万个读数进行测序,然后通过down-sampling至1,000K,500K,200K,100K,50K,10K和5K reads。使用Takara Bio Immune Profiler Software分析不同测序深度的结果。
 
Panel B 维恩图显示了低测序深度(100K)和高测序深度(1,500K)的文库之间重叠的克隆型。
 
 
 
 
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SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit
SMARTer Human BCR:
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