Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于2023年10月16日由上海金畔生物科技有限公司

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英文名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产　　地：日本
商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）
wao Phos-tag™实验设计

◆ 研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆ Phos-tag^TM的简介
Phos-tag^TM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tag^TM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tag^TM分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。
◆ Phos-tag^TM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tag^TM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tag^TM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品	产品描述	用途	具体运用实验
Phos-tagTM Acrylamide	Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合	分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。	SDS-PAGE（单一蛋白）免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin	Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合	可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。	免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM Agarose	Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合	利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。	亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit	Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合	检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。	质谱实验

备注：除Phos-tag^TM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tag^TM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化（Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。
◆Phos-tag™ 的基本结构
◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥水稻棉花等）、动物（斑马鱼灵长类等）、微生物(酵母细菌真菌等）昆虫（果蝇蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
◆相关产品

产品名称	用　　途
Phos-tag™ Acrylamide	分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
SuperSep Phos-tag™	分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
Phos-tag™ Biotin	检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
Phos-tag™ Agarose	纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
Phos-tag™ Mass Analytical Kit	分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格	Phos-tag在配制胶中的浓度
产品编号	生产商编号	产品名称	规格	20μM	50μM	100μM
304-93526	AAL-107S1	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution	0.3mL	约10块	约4块	约2块
300-93523	AAL-107M	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	2mg	约20块	约8块	约4块
304-93521	AAL-107	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	10mg	约100块	约40块	约20块

SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号	产品名称	产品规格
193-16711	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag 13孔10%预制胶	5块
190-16721	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag 17孔10%预制胶	5块
195-16391	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag 13孔12.5%预制胶	5块
193-16571	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag 17孔12.5%预制胶	5块
193-16691	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag 13孔15%预制胶	5块
196-16701	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag 17孔15%预制胶	5块
197-16851	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well Phos-tag 13孔17.5%预制胶	5块
194-16861	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well Phos-tag 17孔17.5%预制胶	5块
198-17981	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag™ 预制胶，BioRad型	5块
195-17991	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag™ 预制胶，BioRad型	5块
192-18001	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型	5块
199-18011	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型	5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
301-93531	BTL-104	Phos-tag™ Biotin BTL-104	10mg
308-97201	BTL-111S1	Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution	0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
302-93561	AG-501	Phos-tag™ Agarose	0.5ml
308-93563	AG-503	Phos-tag™ Agarose	3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
305-93551	MS-101KIT	Phos-tag™ Mass Analytical Kit	1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

板大小	100 x 100 x 3 (mm)
凝胶大小	90 x 85 x 1 (mm)
孔数	13	17
孔容积	30 μL	25 μL
Phos-tag™浓度	50 μmol/L
丙烯酰胺浓度	10%、12.5%、15% 和17%
ZnCl₂浓度	100 μmol/L

◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）
◆相关产品

产品编号	产品名称	规　　格
058-07681	EasySeparator <配套电泳槽>	1 套
230-02461	Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)	500 μL (200 次)
038-23221	α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated	1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？
如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tag^TM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tag^TM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tag^TM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tag^TM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。
备注：
1） Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-
       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？
收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tag^TM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tag^TM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？
Phos-tag^TM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tag^TM产品检测磷酸化？
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tag^TMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tag^TM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tag^TM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tag^TM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tag^TM 结合。

wako胶体滴定试剂(聚乙烯硫酸钾-PVSK)

发表于2023年10月15日由上海金畔生物科技有限公司

wako胶体滴定试剂(聚乙烯硫酸钾-PVSK)

胶体滴定(colloid titration) 是一种简单、快速、准确的测定高分子聚合物电荷的方法。Potassium Polyvinyl Sulfate(聚乙烯硫酸钾,PVSK)于水中可形成带负电的胶体颗粒，Glycol Chitosan(GC)或Methyl Glycol Chitosan(MGC)在酸性水溶液中带正电，利用电性中和的原理，负电胶体颗粒的会与正电胶体颗粒反应达到电性中和。在适当的pH条件下，此两种胶体可完全反应形成不溶性沉淀物。使用甲苯胺蓝(Toluidine Blue,TB)为指示剂，与正电性胶体混合时，两者之间没有反应，TB维持蓝色；当悬浮液中胶体带负电时，TB会吸附于胶体表面而现紫色。
滴定时，正电胶体可直接以PVSK溶液为滴定液，TB为指示剂进行滴定；对于负电荷胶体，可以直接以Glycol Chitosan 或MGC滴定，或加入已知的过量的正电胶体，再以PVSK溶液对剩余的正电胶体进行反滴定。

货号	品名	包装
164-21655	Potassium Polyvinyl Sulfate Titration Solution (N/400) 聚乙烯硫酸钾(PVSK)滴定液	500ml	现货供应
162-03071	Potassium Polyvinyl Sulfate聚乙烯硫酸钾(PVSK)	10g

阳离子试剂：

货号	品名	包装
072-05045	Glycol Chitosan Titration Solution (N/200) 乙二醇壳聚糖滴定液	500ml
072-01581	Glycol Chitosan 乙二醇壳聚糖	10g
137-14655	Methyl Glycol Chitosan Titration Solution(N/200) 甲基乙二醇壳聚糖滴定液	500ml
134-04731	Methyl Glycol Chitosan 甲基乙二醇壳聚糖	10g
161-14695	0.0025N Poly(diallyldimethylammonium Chloride) Solution 聚二甲基二烯丙基氯化铵滴定液	500ml

指示液：

货号	品名	包装
205-05811	Toluidine Blue Indicator Solution甲苯胺蓝指示液	50ml

PVSK标定试剂：

货号

品名

包装

080-06681

Cetylpridinium chloride monohydrate氯化十六烷基吡啶

10g

086-06683

Cetylpridinium chloride monohydrate氯化十六烷基吡啶

100g

wako 聚乙二醇 PEG

发表于2023年10月14日由上海金畔生物科技有限公司

wako 聚乙二醇 PEG

品牌	产品编号	产品名称	等级	规格	CAS No.
	(生产商编号)
Wako	167-24945	Polyethylene Glycol 4,000,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 4,000,000
Wako	167-22941	Polyethylene Glycol 6,000	for Molecular Biology	1kg	25322-68-3
		聚乙二醇 6,000
Wako	162-18525	Polyethylene Glycol 500,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 500,000
Wako	639-09971	Poly(ethylene glycol) 1000	–	1g	–
		聚乙二醇1000
Wako	169-09125	Polyethylene Glycol 6,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 6000
Wako	160-18521	Polyethylene Glycol 500,000	Wako 1st Grade	100g	25322-68-3
		聚乙二醇 500,000
Wako	164-13801	Polyethylene Glycol 2,000,000	Wako 1st Grade	100g	25322-68-3
		聚乙二醇 2,000,000
Wako	168-09075	Polyethylene Glycol 600	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 600
Wako	167-09045	Polyethylene Glycol 200	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 200
Wako	165-09105	Polyethylene Glycol 2,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 2000
Wako	165-09085	Polyethylene Glycol 1,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 1000
Wako	164-19881	Polyoxyethylene(8) Octylphenyl Ether	for Biochemistry	100mL	9036-19-5
		聚乙二醇叔辛基苯基醚
Wako	164-09055	Polyethylene Glycol 300	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 300
Wako	162-09115	Polyethylene Glycol 4,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 4000
Wako	162-09095	Polyethylene Glycol 1,540	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 1540
Wako	161-09065	Polyethylene Glycol 400	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 400
Wako	636-09981	Poly(ethylene glycol) 1500	–	1g	–
		聚乙二醇1500
Wako	632-09961	Poly(ethylene glycol) 400	–	1g	–
		聚乙二醇400
Wako	169-22945	Polyethylene Glycol 6,000	for Molecular Biology	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 6,000
Wako	168-11285	Polyethylene Glycol 20,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 20,000
Wako	166-13805	Polyethylene Glycol 2,000,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 2,000,000
Wako	165-24941	Polyethylene Glycol 500,000	Wako 1st Grade	500g	25322-68-3
		聚乙二醇 500,000

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

发表于2023年10月13日由上海金畔生物科技有限公司

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

表面湿润张力试验用混合液（Wetting Tension Test Mixture）ぬれ張力試験用混合液（ぬれ張力試験用）
表面湿润张力试验用混合液,用于“塑料薄膜及薄板表面湿润张力试验法”的试剂。
试验方法
用含有试剂的棉棒在试验材料（薄膜）上横向涂抹一次，必需注意涂上的混合液的量会极大影响试验的正确度。涂上试剂后2秒，判定液膜中央部分的状态。当液膜没有产生破裂时，判定为“可润湿”；产生破裂时，判定为“不可润湿”。
ぬれ張力試験用混合液 Wetting Tension Test Mixture 详细产品信息如下：
（ぬれ張力試験用）
（和光纯药Wako中国）另还常年供应以下表面张力的型号：
235-01791 No.22.6 50ml
238-01801 No.25.4 50ml
235-01811 No.27.3 50ml
232-01821 No.30.0 50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0 物体表面湿润张力测试液体No.34.0 230-01861 50ml
239-01831 No.31.0 50ml
236-01841 No.32.0 50ml
233-01851 No.33.0 50ml
237-01871 No.35.0 50ml
234-01881 No.36.0 50ml
231-01891 No.37.0 50ml
234-01901 No.38.0 50ml
231-01911 No.39.0 50ml
238-01921 No.40.0 50ml
235-01931 No.41.0 50ml
232-01941 No.42.0 50ml
239-01951 No.43.0 50ml
236-01961 No.44.0 50ml
239-01971 No.45.0 50ml
230-01981 No.46.0 50ml
237-01991 No.48.0 50ml
234-02001 No.50.0 50ml
231-02011 No.52.0 50ml
238-02021 No.54.0 50ml
235-02031 No.56.0 50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0 物体表面湿润张力测试液体No.34.0 230-01861 50ml
232-02041 No.58.0 50ml
239-02051 No.59.0 50ml
236-02061 No.60.0 50ml
233-02071 No.61.0 50ml
230-02081 No.62.0 50ml
237-02091 No.63.0 50ml
230-02101 No.64.0 50ml
237-02111 No.65.0 50ml
234-02121 No.67.0 50ml
231-02131 No.70.0 50ml
238-02141 No.73.0 50ml

wako胡萝卜素标准品

发表于2023年10月13日由上海金畔生物科技有限公司

wako胡萝卜素标准品

品牌	产品编号	产品名称	等级	规格	零售价(RMB)	CAS No.
	(生产商编号)
Wako	209-17281	Thapsigargin	for Cellbiology	1 mg	1350	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Wako	205-17283	Thapsigargin	for Cellbiology	5 mg	5390	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Wako	035-05531	β-Carotene	Wako Special Grade	1g	400	7235-40-7
		β-胡萝卜素
Wako	031-05533	β-Carotene	Wako Special Grade	10g	860	7235-40-7
		β-胡萝卜素
Biomol	BML-PE180-0005	Thapsigargin	–	5mg	3840	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Alexis	ALX-460-004-G005	β-Carotene	–	5g	810	7235-40-7
		β-胡萝卜素
AdipoGen	AG-CN2-0003-M010	Thapsigargin (high purity)	–	10 mg	5530	67526-95-8
		毒胡萝卜素
AdipoGen	AG-CN2-0003-M005	Thapsigargin (high purity)	–	5 mg	3220	67526-95-8
		毒胡萝卜素
AdipoGen	AG-CN2-0003-M001	Thapsigargin (high purity)	–	1 mg	810	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Wako	035-17981	α-Carotene Standard	for High Performance Liquid Chromatography	10mg	2860	7488-99-5
		α-胡萝卜素标准品
Wako	032-17991	β-Carotene Standard	for High Performance Liquid Chromatography	10mg	920	7235-40-7
		β-胡萝卜素标准品

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于2023年10月13日由上海金畔生物科技有限公司

Phos-tagTM 系列产品	产品描述	用途	具体运用实验
Phos-tagTM Acrylamide	Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合	分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。	SDS-PAGE（单一蛋白）免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin	Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合	可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。	免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM Agarose	Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合	利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。	亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit	Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合	检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。	质谱实验

备注：除Phos-tag^TM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tag^TM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

产品名称	用　　途
Phos-tag™ Acrylamide	分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
SuperSep Phos-tag™	分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
Phos-tag™ Biotin	检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
Phos-tag™ Agarose	纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
Phos-tag™ Mass Analytical Kit	分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格	Phos-tag在配制胶中的浓度
产品编号	生产商编号	产品名称	规格	20μM	50μM	100μM
304-93526	AAL-107S1	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution	0.3mL	约10块	约4块	约2块
300-93523	AAL-107M	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	2mg	约20块	约8块	约4块
304-93521	AAL-107	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	10mg	约100块	约40块	约20块

SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号	产品名称	产品规格
193-16711	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag 13孔10%预制胶	5块
190-16721	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag 17孔10%预制胶	5块
195-16391	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag 13孔12.5%预制胶	5块
193-16571	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag 17孔12.5%预制胶	5块
193-16691	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag 13孔15%预制胶	5块
196-16701	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag 17孔15%预制胶	5块
197-16851	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well Phos-tag 13孔17.5%预制胶	5块
194-16861	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well Phos-tag 17孔17.5%预制胶	5块
198-17981	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag™ 预制胶，BioRad型	5块
195-17991	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag™ 预制胶，BioRad型	5块
192-18001	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型	5块
199-18011	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型	5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
301-93531	BTL-104	Phos-tag™ Biotin BTL-104	10mg
308-97201	BTL-111S1	Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution	0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
302-93561	AG-501	Phos-tag™ Agarose	0.5ml
308-93563	AG-503	Phos-tag™ Agarose	3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
305-93551	MS-101KIT	Phos-tag™ Mass Analytical Kit	1 set

板大小	100 x 100 x 3 (mm)
凝胶大小	90 x 85 x 1 (mm)
孔数	13	17
孔容积	30 μL	25 μL
Phos-tag™浓度	50 μmol/L
丙烯酰胺浓度	10%、12.5%、15% 和17%
ZnCl₂浓度	100 μmol/L

产品编号	产品名称	规　　格
058-07681	EasySeparator <配套电泳槽>	1 套
230-02461	Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)	500 μL (200 次)
038-23221	α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated	1 mg

◆具体实例

wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

发表于2023年10月11日由上海金畔生物科技有限公司

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide
什么是Phos-tag™
Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子，结合特异性与氨基酸的种类和序列无关，无放射性，无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag ™ Biotin）、蛋白纯化（Phos-tag ™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ™ Mass Analytical Kit）。
Phos-tag的基本结构：

1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag™ Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™ Acrylamide和MnCl₂即可进行实验（制胶过程中添加，如需详细说明请联系我们）。

特点
# 非放射性元素，非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便，与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定，溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用

1、黄色粘性油状物质；
2、在4度可保存至少一年；
3、Phos-tagTM与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。
SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。
在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。
Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。
操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。
适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。
Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。
可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

产品编号	产品名称	规格	原价
304-93526	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution	0.3ml	2670
300-93523	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	2mg	4450
304-93521	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	10mg	10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107) Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

Phos-tag Acrylamide (AAL-107) Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

References 参考文献：

“Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

“Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
Proteomics, 5, 749-757 (2006).

“A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

“Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

“Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

“A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

“Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

“FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

“Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike, Electrophoresis, 30, 550-559 (2009).

“Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

“Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

“Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).

美国APSC分子量标准品产品清单

发表于2023年10月11日由上海金畔生物科技有限公司

wako农药残留标准品

发表于2023年10月3日由上海金畔生物科技有限公司

Wako维生素E标准品套装

发表于2023年9月30日由上海金畔生物科技有限公司

Wako维生素E标准品套装

产品编号	产品名	产品中文名	包装
302-07111	Vitamin E Reference Standard	维生素E标准品套装	1set

试剂盒包含以下几种物质：:

1. d-α-生育酚 250mg x1瓶

2. d-β-生育酚 250mg x1瓶

3. d-γ-生育酚 250mg x1瓶

4. d-δ-生育酚 250mg x1瓶

5. 3,4-二氢-2,2,5,7,8-五甲基-2H-1-苯并吡喃-6-酚(PMC) 250mg x1瓶

注意: PMC 是用作HPLC分析维生素E的内标物质，不适用于GC分析。

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分子式，分子量及产品纯度

物质名称	分子式	分子量	最大吸收波长	吸收系数 E1% 1cm	纯度	外观
d-α-生育酚	C29H50O2	430.71	292 nm	78.1	98.5+%	淡黄色、粘稠液体
d-β-生育酚	C28H48O2	416.69	296 nm	89.2	98.5+%
d-γ-生育酚	C28H48O2	416.69	297 nm	94.4	98.5+%
d-δ-生育酚	C27H46O2	402.66	297 nm	92.9	98.5+%
PMC	C14H20O2	220.31	292 nm	–	99.0+%	白色晶体

保存和稳定条件

每小瓶试剂都是用附有氧吸附剂的铝盖包装的。一旦打开了瓶子，请将此试剂于惰性气体环境中的冰箱中（2~10℃）保存。在此条件下，试剂可保持6个月的稳定性。

使用指南(溶液的制备)

1. 用天平称取每种试剂各50~100mg，质量确定到0.1mg。

2. 将这些试剂分别溶解在乙醇或己烷溶剂中，直至各维生素同系物的浓度为1mg/mL。再将这些溶液密封保存于5℃，可保存一个月。

3. 在使用前将原液稀释，即可得到每个同系物的标准溶液。

WAKO真菌毒素标准品

发表于2022年12月24日由上海金畔生物科技有限公司

日本和光WAKO真菌毒素标准品

现在食品的安全、稳定是一大问题。日本有6成的食材是依靠国外进口，因而进口食品的真菌毒素（霉毒）污染是一个深刻的问题。

这里介绍以系真菌毒素为中心的标准品。

■3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品（014-22621）

■呕吐霉素（脱氧雪腐镰刀菌烯醇）标准品（047-31041）

■西地霉素（瓜萎镰菌醇n-水合物）标准品（149-08741）

■镰刀菌酮- X标准品（065-05431）

■蛇形菌素（二醋酸麃草镰刀菌烯醇）标准品（044-31051）

■T-2霉素标准品（204-17731）

■赭曲霉毒素A标准品（153-02961）

产品编号	品名	规格	包装
014-22621	3-Acetyldeoxynivalenol Standard	真菌毒素实验	5mg
047-31041	Deoxynivalenol Standard	真菌毒素实验	5mg
044-31051	Diacetoxyscirpenol Standard	真菌毒素实验	5mg
065-05431	Fusarenon X Standard	真菌毒素实验	5mg
149-08741	Nivalenol n-Hydrate Standrd	真菌毒素实验	5mg
204-17731	T-2 Toxin Standard	真菌毒素实验	5mg
153-02961	Ochratoxin A Standard	真菌毒素实验	5mg

请注意13C标记体和预处理柱等。

粉末

产品编号	品名	规格	包装
016-17671	Aflatoxin B2	生物化学	10mg
010-17691	Aflatoxin G2	生物化学	10mg
030-17171	Cyclopiazonic Acid	生物化学	5mg
150-02111	Ochratoxin A	生物化学	5mg
168-21631	Patulin	真菌毒素实验	10mg
033-08011	Citrinin Standard	–	10mg

混合液

产品编号	品名	浓度	规格	包装
014-21141	Aflatoxins Mixture Solution 1 (B1, B2, G1, G2 in Acetonitrile)	B1,G1各2μg/ml B2,G2各0.5μg/ml	真菌毒素实验	5ml
011-21151	Aflatoxins Mixture Solution 2 (Acetonitrile Solution)	各0.25μg/ml	真菌毒素实验	6ml
065-04951	Fumonisins Mixture Solution [FB1, FB2 in Acetonitrile: Water(1:1) Solution]	各50μg/ml	真菌毒素实验	5ml
202-16811	B-Trichothecenes Mixture Solution (DON, NIV, 3-AcDON, 15-AcDON in Acetonitrile)	各100μg/ml	真菌毒素实验	5ml
209-16821	A,B-Trichothecenes,Zearalenone Mixture Solution (NIV, DON, 3-AcDON, Fus-X, T-2, HT-2, DAS, ZON in Acetonitrile)	各10μg/ml	真菌毒素实验	5ml

单品溶液

产品编号	品名/浓度（μg/ml）	规格	包装
019-21071	3-Acetyl-deoxynivalenol Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
016-21081	15-Acetyl-deoxynivalenol Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
013-21091	Aflatoxin B1 Solution (2ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
016-21101	Aflatoxin B2 Solution (0.5ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
013-21111	Aflatoxin G1 Solution (2ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
010-21121	Aflatoxin G2 Solution (0.5ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
017-21131	Aflatoxin M1 Solution (0.5ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
046-30151	Deepoxy-deoxynivalenol Solution (50ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
043-30161	Deoxynivalenol Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
040-30171	Diacetoxyscirpenol Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
060-04901	Fumonisin B1 Solution [ 50ug/ml Acetonitrile:Water(1:1) Solution]	真菌毒素实验	5ml
067-04911	Fumonisin B2 Solution [50ug/ml Acetonitrile:Water(1:1) Solution]	真菌毒素实验	5ml
068-04941	Fusarenon X Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
083-08491	HT-2 Toxin Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
144-08431	Neosolaniol Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
147-08421	Nivalenol Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
159-02701	Ochratoxin A Solution (10ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
166-22771	Patulin Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
205-16801	T-2 Toxin Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml
267-01911	Zearalenone Solution (100ug/ml Acetonitrile Solution)	真菌毒素实验	5ml

2024年 5月
一	二	三	四	五	六	日
		1	2	3	4	5
6	7	8	9	10	11	12
13	14	15	16	17	18	19
20	21	22	23	24	25	26
27	28	29	30	31

2024年 5月
一	二	三	四	五	六	日
		1	2	3	4	5
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13	14	15	16	17	18	19
20	21	22	23	24	25	26
27	28	29	30	31

◆具体实例

wako胶体滴定试剂(聚乙烯硫酸钾-PVSK)

货号

品名

包装

164-21655

Potassium Polyvinyl Sulfate Titration Solution (N/400) 聚乙烯硫酸钾(PVSK)滴定液

500ml

现货供应

162-03071

Potassium Polyvinyl Sulfate聚乙烯硫酸钾(PVSK)

10g

阳离子试剂：

货号

品名

包装

072-05045

Glycol Chitosan Titration Solution (N/200)

乙二醇壳聚糖滴定液

500ml

072-01581

Glycol Chitosan

乙二醇壳聚糖

10g

137-14655

Methyl Glycol Chitosan Titration Solution(N/200)

甲基乙二醇壳聚糖滴定液

500ml

134-04731

Methyl Glycol Chitosan

甲基乙二醇壳聚糖

10g

161-14695

0.0025N Poly(diallyldimethylammonium Chloride) Solution

聚二甲基二烯丙基氯化铵滴定液

500ml

指示液：

货号

品名

包装

205-05811

Toluidine Blue Indicator Solution甲苯胺蓝指示液

50ml

PVSK标定试剂：

货号

品名

包装

080-06681

Cetylpridinium chloride monohydrate氯化十六烷基吡啶

10g

086-06683

Cetylpridinium chloride monohydrate氯化十六烷基吡啶

100g

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

◆具体实例

Wako维生素E标准品套装

试剂盒包含以下几种物质：:

1. d-α-生育酚 250mg x1瓶

2. d-β-生育酚 250mg x1瓶

3. d-γ-生育酚 250mg x1瓶

4. d-δ-生育酚 250mg x1瓶

5. 3,4-二氢-2,2,5,7,8-五甲基-2H-1-苯并吡喃-6-酚(PMC) 250mg x1瓶

注意: PMC 是用作HPLC分析维生素E的内标物质，不适用于GC分析。

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分子式，分子量及产品纯度

物质名称

分子式

分子量

最大吸收波长

吸收系数

E1% 1cm

纯度

外观

d-α-生育酚

C29H50O2

430.71

292 nm

78.1

98.5+%

淡黄色、粘稠液体