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PrimeScript^™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6110A	PrimeScript^™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit	50 Rxns	￥1,261 ￥757
Takara	6110B (A × 4)	PrimeScript^™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit	50 Rxns x 4	￥4,546 ￥2,728

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 制品内容 (50 次量)

PrimeScript RTase (200 U/ μl)	50 μl
5X PrimeScript Buffer	200 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl)	25 μl
dNTP Mixture (10 mM each)	50 μl
Oligo dT Primer (50 μM)	50 μl
Random 6 mers (50 μM)	100 μl
RNase free dH2O	1 ml

■ 制品说明

本制品是使用PrimeScript RTase从Total RNA或PolyA⁺RNA合成1st Strand cDNA的试剂盒，含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。 PrimeScript Reverse Transcriptase是一种MMLV (Moloney Murine Leukemia virus) 由来的新型反转录酶。本酶能够有效合成长达12 kb的1st Strand cDNA，即使对富含GC的片段或者具有复杂二级结构的RNA，在常规的反转录温度42℃条件下也能得到良好的反转录效果，无需进行高温反转录反应 (高温反转录反应会导致RNA的降解)。合成的1st Strand cDNA 可广泛应用于2nd Strand合成、杂交、PCR扩增、Real Time PCR反应等。

■ 各种引物的序列

引物名称	引物序列
Random 6 mers	pd(N)6
Oligo dT Primer	Takara特别开发的dT区域的序列^*

* 该序列和TaKaRa RNA PCR^™ Kit (AMV) Ver.3.0 (Code No. RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有M13 Primer M4的序列。

■ 保存

-20℃。

页面更新：2019-10-12 11:49:14

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

PrimeScript^™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6111A	PrimeScript^™ Double Strand cDNA Synthesis Kit	10 Rxns	￥1,582

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■ 制品内容 (10 次量)

PrimeScript RTase (200 U/μl)	10 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl)	10 μl
Oligo(dT)18 Primer (1 μg/μl)	20 μl
Random Primer (9mer) (0.3 μg/μl)	20 μl
5 × 1st Strand Synthesis Buffer	40 μl
dNTP Mixture (10 mM each)	40 μl
E. coli RNase H/E. coli DNA Ligase Mixture	20 μl
E. coli DNA Polymerase I (20 U/μl)	20 μl
5 × 2nd Strand Synthesis Buffer	300 μl
T4 DNA Polymerase (1 U/μl)	40 μl
RNase free dH2O	600 μl × 2
Control RNA (1 μg/μl)^*	5 μl

*【Control RNA】本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有poly (A)⁺尾的RNA。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中，如果确实为全长的cDNA，那这种质粒便可获得四环素抗性。

■ 制品说明

以原核细胞或者真核细胞的mRNA为模板合成cDNA后再进行cDNA的克隆，是分子生物学研究中的一种重要手段。利用这一技术可以容易地进行基因的构造解析和目的蛋白质的表达研究等。
一般来说，cDNA的合成以及cDNA文库的利用方法是：在合成与目的mRNA互补的双链cDNA后，将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组，再将重组体导入细菌或真核细胞内进行复制、扩增cDNA，然后再对cDNA进行解析，或者再进一步进行体外转录或体外翻译等。
本试剂盒主要以来自植物和动物的poly (A)⁺RNA合成双链DNA 。
本试剂盒主要是以Gubler-Hoffman法为基础构建的，其原理见图1、图2，简要说明如下：
1. 在PrimeScript RTase的作用下，利用Oligo(dT)18 Primer或者Random Primer合成cDNA的第一条链。
2. 使用E. coli RNase H使DNA-RNA杂合体中的RNA链形成单链切口 (Nick) 。在E. coli DNA Polymerase I 与E. coli DNA Ligase的作用下，RNA链被DNA链置换，合成cDNA的第二条链。
3. 使用T4 DNA Polymerase使双链cDNA片段末端平滑。

■ cDNA合成原理图

PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit

图1 使用Oligo(dT)18 Primer时的cDNA合成

图2 使用Random Primer时的cDNA合成

■ 保存

-20℃。

■ Troubleshooting

如果实验不能正常进行，请按照说明书内容确认实验操作，检验以下几点：
1. Control RNA的使用
本试剂盒中的Control RNA (pSP Tet3 Poly(A)⁺ mRNA) 可以用于对照实验，并确认1st Strand cDNA或2nd Strand cDNA的合成反应是否顺利进行。
2. mRNA的纯度检测
为了能够获得更高的cDNA合成效率，尽可能使用完整的mRNA是非常重要的。在进行cDNA合成反应前，可以通过测定260 nm和280 nm的吸光度 (A260/A280在1.8～2.1是理想值) ，或使用琼脂糖凝胶电泳法对RNA的纯度进行检测。
3. RNase的污染
实验时要注意一定不能在mRNA的样品中混入RNase。实验用的器具、试剂等应尽可能进行高温灭菌处理。操作过程要佩戴手套。

页面更新：2019-03-08 10:35:16

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PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara

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