ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

08 ラベル化剤

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

• ラベル化剤

エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Deep Red

• 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
• 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能

• 製品コード
  EX06　 ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

※ 精製済エクソソーム（超遠心法）として、タンパク質：1-10 µg/sample、粒子数：10-100×10⁸個/sample

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マニュアル

技術情報

このキットだけで蛍光標識から精製まで

ExoSparkler シリーズは、エクソソームの標識に最適化したプロトコルに加え、蛍光標識後の未反応色素を除去できるフィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。

 

精製手法(未反応色素の除去)の比較

ExoSparklarシリーズで未反応色素の除去に使用しているフィルトレーションチューブは、同用途で従来から用いられているゲルろ過法と比較して、高い回収率でエクソソームを精製することが可能です。

	回収率※
フィルトレーションチューブ(本キット)	50% 程度
ゲルろ過法	10% 程度
※ 小社での実施例：精製前後のエクソソーム粒子数をNTA(ナノ粒子トラッキング解析)で比較

フィルトレーションチューブを用いた精製の有効性確認の蛍光画像をよくある質問：標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？に掲載しています。

技術や使用製品に関する補足

• 

  細胞外小胞、エクソソームの特性と機能 小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。

Q

推奨されるエクソソームの精製法はありますか？

A

超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。

なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。

1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。

2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。

Q

標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？

A

未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。

 

＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10 µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×10⁴ cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。

結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。

①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

②バッファーのみをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

■　検出条件
　Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
　Red    ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
　Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

Q

染色後のエクソソームは保存できますか。

A

染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。

Q

エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。

A

小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。

なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。

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ExoIsolator Exosome Isolation Kit

08 ラベル化剤

ExoIsolator Exosome Isolation Kit

• ラベル化剤
• 細胞機能解析

エクソソーム精製キット

• テクニック不要の操作性
• 超遠心法と同等の回収実績
• フィルターホルダーは再使用可能

• 製品コード
  EX10　 ExoIsolator Exosome Isolation Kit

本製品は現在、特別価格(30% off)にてキャンペーン中です！
ご要望の方はこちらよりお申込みください。
ご購入に際してはページ下部の本製品のキット内容についての項をご確認ください。

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マニュアル

Q

エクソソームがうまく回収できません。どのような原因が考えられますか。

A

以下の3つが原因として考えられますので、ご確認ください。

１．ろ過の際、減圧度が強すぎるとエクソソームの回収量が著しく減少いたします。推奨減圧度である-25 kPa またはそれよりも弱い減圧度でろ過を行ってください。
２．Isolation Filter には表裏があり、間違って表裏を逆転させてフィルターを使用するとエクソソームの回収率が低下します。Isolation Filer の表(光沢のある面)を上にしてご使用ください。詳細は取扱説明書および使用方法の動画をご覧ください。
３．Isolation Filter にトラップされたエクソソームを全て回収するためには、フィルター全体にPBSを万遍なくかけて回収する必要があります。こちらも、取扱説明書および使用方法の動画をご覧ください。

Q

回収したエクソソームは保存できますか。

A

4℃にて1ヶ月から半年間保存できます。長期間保存する場合は、-80℃で保管してください。ただし、凍結融解を極力避けるため、小分けし保存して下さい。

引用：吉岡　祐亮、落谷　孝広(2020)、エクソソーム実験ガイド　ISBN: 978-4-7581-2246-7

Q

血清含有培地で培養した細胞の培養上清からエクソソームを回収できますか。

A

血清含有培地の使用は推奨いたしません。細胞培養で使用される血清(FBS 等)にもエクソソームが含まれているため、血清を含む細胞培養上清から回収したエクソソームには血清由来のエクソソームも含有されてしまい、実験結果に影響を及ぼす可能性が考えられます。

Q

ExoIsolator でのエクソソームの回収率を教えてください。

A

サンプルによって回収率が変動する可能性がございます。
一例として、市販のウシ生乳由来エクソソームをExoIsolator で再精製して回収率を測定した実績を下記に示します。

タンパク質回収率 (%)	粒子回収率 (%)
34.6 (SD±3.9)	38.3 (SD±8.3)

※タンパク質量はBCA法、粒子数はナノ粒子トラッキング解析にて測定しています。

Q

培養上清からどのぐらいの量のエクソソームがとれますか。

A

細胞種により分泌されるエクソソーム量が異なりますので、回収できるエクソソーム量も細胞種や培養方法により異なります。一例として、HEK293S細胞(振盪培養にて培養)の培養上清 25 ml からのエクソソームを回収した実績をご紹介します。

回収タンパク質量 (μg)	回収粒子数 (particles)
11.2 (SD±2.09)	6.0E+09 (SD±1.0E+9)

※タンパク質量はBCA法、粒子数はナノ粒子トラッキング解析にて測定しました。

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