二氢乙锭 CAS 104821-25-2

	货号	15200	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 mg	价格	1236
	Ex (nm)	500	Em (nm)	582
	分子量	315.41	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

二氢乙锭是美国AAT Bioquest生产的试剂，二氢乙锭可有效地作为测量活性氧物质的探针。染料自由进入细胞并脱氢成溴化乙锭。该探针已被广泛用于NK细胞，并作为鉴定肿瘤中增殖和缺氧细胞的重要染料。已经使用嗜中性粒细胞和内皮细胞以及HL60细胞和巨噬细胞进行了研究。该探针的主要优点是能够区分超氧化物和H₂O_2,荧光发射发生在约600nm处。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的二氢乙锭。 

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产品说明书

用于染色细胞的样品方案

以下过程提供了一般准则，实际情况应根据您的特定实验进行修改。

1.制备5-10 mM DMSO储备溶液。应将未使用的DMSO储备溶液等分到单次使用的小瓶中并储存在-20℃，避光。

2.在生理缓冲液（如PBS，HBSS，HEPES）中使染料的工作浓度为5-20μM。最佳工作浓度必须根据经验确定。

3.将染料工作溶液（来自步骤2）等体积（例如100μL细胞在生长培养基中）加入细胞中，并在室温或37℃下孵育细胞5至60分钟。

4.在将细胞暴露于实验诱导物之前，确定负载细胞样品的基线荧光强度。

5.阴性对照应评估如下：

5.1检查有没有诱导物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物的荧光。 在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，荧光随时间的逐渐增加可能会自发水解，导致水解的原因可能与大气氧化或光诱导氧化有关。

5.2检查已经保持在生长培养基或缓冲液中的未处理（对照）负载细胞的荧光。在健康细胞中，氧自由基被细胞酶和天然抗氧化剂消除。 在染料加载结束后，健康细胞应表现出低水平的荧光，在实验期间相对稳定; 可以观察到荧光的逐渐增加（由于自动氧化）或减少（由于细胞中的染料损失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。

6.可以用叔丁基过氧化氢（TBHP）刺激阳性对照至终浓度~100μM（基于细胞的敏感性和反应增加或减少剂量而定）。

参考文献

Anthocyanin-rich bilberry extract induces apoptosis in acute lymphoblastic leukemia cells via redox-sensitive epigenetic modifications
Authors: Antonio J León-González, Tanveer Sharif, Cyril Auger, Malak Abbas, Guy Fuhrmann, Valérie B Schini-Kerth
Journal: Journal of Functional Foods (2018): 227–234

Role of epigenetic regulation on the induction of apoptosis in Jurkat leukemia cells by white grape pomace rich in phenolic compounds
Authors: Antonio J León-González, M José Jara-Palacios, Malak Abbas, FJ Heredia, Valérie Schini-Kerth
Journal: Food & Function (2017)

Astragaloside IV improves the isoproterenol-induced vascular dysfunction via attenuating eNOS uncoupling-mediated oxidative stress and inhibiting ROS-NF-$kappa$B pathways
Authors: Chonghua Xu, Futian Tang, Meili Lu, Jing Yang, Ronghui Han, Meng Mei, Jin Hu, Mingsheng Zhou, Hongxin Wang
Journal: International immunopharmacology (2016): 119–127

Inhibitory effect of Sophora subprosrate polysaccharide on mitochondria oxidative stress induced by PCV-2 infection in RAW264. 7 cells
Authors: Zi-Jie Su, Jian Yang, Wen-Juan Luo, Ying-Yi Wei, Xue-Hong Shuai, Ting-Jun Hu
Journal: International Journal of Biological Macromolecules (2016)

Evaluation of the Medicinal Herb Graptopetalum paraguayense as a Treatment for Liver Cancer
Authors: Wei-Hsiang Hsu, Chia-Chuan Chang, Kai-Wen Huang, Yi-Chen Chen, Shih-Lan Hsu, Li-Chen Wu, Ann-Ping Tsou, Jin-Mei Lai, Chi-Ying F Huang
Journal: PloS one (2015): e0121298

Salvaging brain ischemia by increasing neuroprotectant uptake via nanoagonist mediated blood brain barrier permeability enhancement
Authors: Shuyan Zheng, Ying-Ying Bai, Yikang Liu, Xihui Gao, Yan Li, Yinzhi Changyi, Yuancheng Wang, Di Chang, Shenghong Ju, Cong Li
Journal: Biomaterials (2015): 9–20

Pretreatment with Astragaloside IV protects human umbilical vein endothelial cells from hydrogen peroxide induced oxidative stress and cell dysfunction via inhibiting eNOS uncoupling and NADPH oxidase-ROS-NF-$kappa$B pathway
Authors: Chonghua Xu, Futian Tang, Meili Lu, Jing Yang, Ronghui Han, Meng Mei, Jin Hu, Hongxin Wang
Journal: Canadian Journal of Physiology and Pharmacology

活性氧 DCFH-DA [2’，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯] CAS 4091-99-0

	货号	15204	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 mg	价格	984
	Ex (nm)	505	Em (nm)	526
	分子量	487.29	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

DCFH-DA [2’，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯]广泛用于监测细胞氧化还原的过程。2’，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯（也称为2’，7’二氯荧光素二乙酸酯）被细胞酯酶水解成2’，7′-二氯二氢荧光素（也称为2’，7′-二氯荧光素），然后被氧化成2′ ，7′-二氯荧光素主要由H₂O₂。 2’，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯可能在细胞内氧化剂应激期间对广泛的氧化反应具有反应性。 金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的活性氧（ROS）荧光探针。

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

用于染色细胞的样品方案

以下过程提供了一般准则，实际情况应根据您的特定应用进行修改。

1.制备1-10mM DMSO储备溶液。 应将未使用的DMSO储备溶液等分到单次使用的小瓶中并储存在-20℃，避光。

2.在生理缓冲液（如PBS，HBSS，HEPES）中使染料的工作浓度为1-10μM。必须根据经验确定最佳工作浓度。

3.从生长培养基中取出细胞，将染料工作溶液（来自步骤2）加入细胞中，并在室温或37℃下孵育细胞5至60分钟。

4.去除染料工作溶液; 用预热的HBSS洗涤，加入预热的HBSS或生长培养基，在最佳温度下孵育。 最佳孵育时间可能相差较大，因为一些细胞类型通常表现出低水平的酯酶活性。

5.在将细胞暴露于实验诱导物之前，确定加载细胞样品的基线荧光强度。

6.阴性对照应评估如下：

6.1检查未染色的细胞在绿色发射范围内的自发荧光。

6.2对于流式细胞术，确定染料加载和处理后细胞的正向和侧向散射不变。细胞尺寸的变化可能与处理或毒性反应引起的起泡或收缩有关。

6.3检测有没有诱导物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物的荧光。在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，荧光随时间的逐渐增加可能与自发水解，大气氧化或光诱导有关。

6.4检查已经保存在生长培养基或简单缓冲液中的未处理（对照）负载细胞的荧光。在染料加载孵育后，健康细胞应表现出低水平的荧光，在实验期间相对稳定; 然而，可以观察到荧光逐渐增加（由于自动氧化）或减少（由于细胞中的染料损失或光漂白）。 在没有任何刺激或诱导的情况下，健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。

7.可以用H₂O₂或叔丁基过氧化氢（TBHP）刺激阳性对照至终浓度~100μM（基于细胞的敏感性和反应增加或减少剂量）。

参考文献

Kinetic analysis of fluorescein and dihydrofluorescein effluxes in tumour cells expressing the multidrug resistance protein, MRP1
Authors: Saengkhae C, Loetchutinat C, Garnier-Suillerot A.
Journal: Biochem Pharmacol (2003): 969

Mitochondrial localization of reactive oxygen species by dihydrofluorescein probes
Authors: Diaz G, Liu S, Isola R, Diana A, Falchi AM.
Journal: Histochem Cell Biol (2003): 319

Dihydrofluorescein diacetate is superior for detecting intracellular oxidants: comparison with 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate, 5(and 6)-carboxy-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate, and dihydrorhodamine 123
Authors: Hempel SL, Buettner GR, O’Malley YQ, Wessels DA, Flaherty DM.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 146

A rapid diagnostic test for the viability of early cattle and rabbit embryos using diacetyl-fluorescin
Authors: Schilling E, Dopke HH.
Journal: Naturwissenschaften (1978): 658

Determination of fluorescin sodium in ophthalmic solutions
Authors: Robertson EJ, Patel JA.
Journal: Am J Hosp Pharm (1968): 598

[Experimental research on insulin antibodies. II. Immunochemical characterization of guinea pig anti-ox insulin serum conjugated with fluorescin isothiocyanate.]
Authors: Mancini AM, Zampa GA, Costanzi G.
Journal: Boll Soc Ital Biol Sper (1961): 1230

[Experimental research on insulin antibodies. III. Immunohistology of the endocrine pancreas with guinea pig anti-bovine insulin serum, conjugated with fluorescin isothiocyanate.]
Authors: Costanzi G, Mancini UM, Zampa GA.
Journal: Boll Soc Ital Biol Sper (1961): 1233

Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescin
Authors: King EO, Ward MK, Raney DE.
Journal: J Lab Clin Med (1954): 301

Influence of the concentration of iron on the production of fluorescin by Pseudomonas aeruginosa
Authors: Totter JR, Moseley FT.
Journal: J Bacteriol (1953): 45

Transfer of fluorescin from Ps. pyocyanea to colonies of other bacteria
Authors: Hurst L, Lowbury EJ.
Journal: J Clin Pathol (1952): 359

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

简要概述

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒（荧光法）红色荧光是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 这些方法具有低灵敏度和高干扰，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的UV范围内进行的。 基于吸收的NADP / NADPH测定的低灵敏度使得测定难以自动化以进行通常使用小样品量的高通量筛选。

这种Amplite 荧光NADP / NADPH比率检测试剂盒为敏感检测NADP，NADPH及其比例提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶再循环反应中的NADP / NADPH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了样品干扰。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（最大Ex / Em = 540 / 590nm）或吸光度酶标仪在~576nm处容易地读取。 这也提供NADP，NADPH提取缓冲液和细胞裂解缓冲液。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADP/NADPH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADPH标准品或测试样品（25μL）

在室温下加入25μLNADPH或NADP提取液孵育15分钟

加入25μLNADP或NADPH提取液（25μL）

加入NADP / NADPH反应混合物（75μL）孵育于 室温保持15分钟 –  2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作步骤

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.制备NADP / NADPH反应混合物：

将10mL NADPH传感器缓冲液（组分B）加入NADP / NADPH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以用于两个96孔板。未使用的NADP / NADPH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL1mMNADPH储备溶液（来自步骤1）加入990μLPBS缓冲液（pH7.4）中，得到10μM（10pmol / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10M NADPH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：3连续稀释，得到NADPH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0 M系列稀释液。

3.3如表1和2中所述，将含有NADPH标准品和含NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，NADP / NADPH裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞。

表1.实心黑色96孔微孔板中NADPH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADP / NADPH标准; BL =空白对照; TS =测试样品; TS（NADPH）=用NADPH提取液处理10至15分钟的测试样品，然后用NADP提取溶液中和; TS（NADP）=用NADP提取溶液处理10至15分钟的测试样品，然后用NADPH提取溶液中和。

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的NADPH标准品（0.01μM至3μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADPH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADPH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

3.4对于NADPH提取（NADPH）：将25μLNADPH提取溶液（组分D）加入含有NADP / NADPH的测试样品的孔中。在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μL的NADP提取溶液（组分E）以中和NADPH提取物，如表1和2中所述。

对于NADP提取（NADP）：将25μLNAP提取溶液（组分E）加入含有NADP / NADPH的测试样品的孔中。在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μLNADPH提取溶液（组分D）以中和NADP提取物，如表1和2中所述。

对于总NAPD和NADPH：将25μLNADP/ NADPH对照溶液（组分F）加入NADPH标准品的孔和含有NADP / NADPH的测试样品中。在室温下孵育10至15分钟，然后如表1和2中所述添加25μL对照溶液（组分F）。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。 NADP / NADPH裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞。

4.在上清液反应中运行NADP / NADPH测定：

4.1将75μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.4）的每个孔中，以使总NADPH测定体积为150μL/孔。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去。 典型数据如图1所示（总NADP和NADPH对比NADP或NADPH提取物）。

图1.使用Gemini酶标仪（Molecular Devices），在96孔黑色板中用Amplite 荧光NADP / NADPH比率测定试剂盒测量总NADPH和NADP及其提取物剂量响应。 用或不用NADPH或NADP提取溶液处理25μL等量的NADP和NADPH 15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在加入75μLNADPH反应混合物后30分钟，在Ex / Em = 540 / 590nm（在570nm处截止）获得信号。 从具有NADPH反应的那些孔的值中减去空白信号（注意：荧光背景随时间增加，因此重要的是减去每个数据点的空白孔的荧光强度值）。

试剂应用文献

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation

Authors: Yang, Fei and Heit, Caitlin and Inglis, Debra L
Journal: Fermentation (2017): 61

参考文献

A metabolomic study of the effect of Candida albicans glutamate dehydrogenase deletion on growth and morphogenesis
Authors: Ting-Li Han, Richard D Cannon, Sandra M Gallo, Silas G Villas-Boas
Journal: NPJ biofilms and microbiomes (2019): 13

Growth suppression by altered (p) ppGpp levels results from non-optimal resource allocation in Escherichia coli
Authors: Manlu Zhu, Xiongfeng Dai
Journal: Nucleic acids research (2019)

FOXO transcription factors both suppress and support breast cancer progression.
Authors: Marten Hornsveld, Lydia M Smits, Maaike Meerlo, Miranda van Amersfoort, Marian J Groot Koerkamp, Dik van Leenen, David E Kloet, Frank C Holstege, Patrick WB Derksen, Boudewijn MT Burgering
Journal: Cancer Research (2018): canres–2511

Piperlongumine activates Sirtuin1 and improves cognitive function in a murine model of Alzheimer’s disease
Authors: Jun Go, Ji Yeon Seo, Tae-Shin Park, Young-Kyoung Ryu, Hye-Yeon Park, Jung-Ran Noh, Yong-Hoon Kim, Jung Hwan Hwang, Dong-Hee Choi, Dae Youn Hwang
Journal: Journal of Functional Foods (2018): 103–111

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

相关产品

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法)

	货号	15274	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	250 Tests	价格	4488
	Ex (nm)	460	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒 （比色法）是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）是细胞中发现的两种重要的辅酶。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADH（NADPH）是NAD（NADP）的还原形式，NAD（NADP）是NADH（NADPH）的氧化形式。 NAD或NADP在氧化还原反应中起辅助因子的作用，在细胞反应中转移电子。 氧化形式和还原形式之间的平衡是NAD / NADH（NADP / NADPH）比率。 该比率是指示细胞氧化还原状态的重要组分，并且它是反映代谢活性和细胞健康的测量。 在健康的哺乳动物组织中，游离NAD和NADH之间的比率的估计可以高达700。相反，NADP / NADPH比率通常为约0.005，因此NADPH是该辅酶的主要形式。

该Amplite 比色NADP / NADPH比率分析试剂盒提供了一种比色法，用于测量培养细胞中细胞内总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。 在该测定中，裂解物中的NADPH可以用NADPH提取溶液提取，然后通过NADPH探针识别，在反应后得到黄色染料，其在460nm处具有吸光度。 产生的染料量与细胞裂解物中NADP或NADPH的浓度成正比，可用作细胞NADP / NADPH浓度的指示剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADP/NADPH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备25μLNADPH标准品和/或测试样品

加入25μLNADPH提取液

在室温下孵育15分钟

加入25μL中和溶液

加入75μLNADPP/ NADPH反应混合物在室温下孵育15分钟至2小时监测 在460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作步骤

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.制备NADP / NADPH反应混合物：

2.1将8mL NADPH探针缓冲液（组分B-II）加入到NADP / NADPH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

2.2将2 mL NADPH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以进行125~200次分析。 未使用的NADP / NADPH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备连续稀释的NADPH标准品（0至2μM）：

3.1将2L 1mM NADPH储备溶液（来自步骤1）加入998L PBS缓冲液（pH7.4）中，产生2M（2 pmols / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL2MNADPH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到1，0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313和0M系列稀释的NADPH标准品。

4.运行总NADP / NADPH分析（总共400个分析/试剂盒）：

4.1如说明书中的表1和2中所述，将NADPH标准品和含有NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞。 （详见附录）。

4.2将50μL的NADP / NADPH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤4.1）的每个孔中，以使总NADP / NADPH测定体积为100μL/孔。

4.3在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.4使用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

5.运行NADP / NADPH比率分析（总共250个分析/试剂盒）：

5.1如说明书中的表3和4中所述，将连续稀释的NADPH标准品和/或含NADP / NADPH的测试样品加入白色/透明96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞。

5.2对于NADPH提取（NADPH量）：将25μLNADPH提取溶液（组分D）加入含有NADP / NADPH的测试样品的孔中。在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μL中和溶液（组分E）以中和NADPH提取物，如说明书中的表3和4中所述。

对于总NADP和NADPH（总量）：将25μLNADPP/ NADPH对照溶液（组分F）加入NADPH标准品的孔和含有NADP / NADPH的测试样品中。在室温下孵育10至15分钟，然后如说明书中的表3和4中所述添加25μL提取对照溶液（组分F）。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。为方便起见，裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞（详见附录）。

5.3将75μL的NADP / NADPH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品（NADP / NADPH）的每个孔中，并测试样品（NADPH提取物）（来自步骤5.1）以使总量达到测定体积为150μL/孔。

5.4在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

5.5使用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去。

图1. Amplite™比色NADP / NADPH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微量培养板中的总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。

A-总NADPH和NADP剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.03μM的总NADPH。

B-NADP / NADPH比例：用或不用NADP提取溶液处理等量的NADP和NADPH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在460nm读取信号。 NADP / NADPH摩尔比基于图1B中所示的吸光度计算。

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

试剂应用文献

Impact of Genetic Reduction of NMNAT2 on Chemotherapy-Induced Losses in Cell Viability In Vitro and Peripheral Neuropathy In Vivo
Authors: Slivicki, Richard A and Ali, Yousuf O and Lu, Hui-Chen and Hohmann, Andrea G
Journal: PloS one (2016): e0147620

NMNAT2: HSP90 Complex Mediates Proteostasis in Proteinopathies
Authors: Ali, Yousuf O and Allen, Hunter M and Yu, Lei and Li-Kroeger, David and Bakhshizadehmahmoudi, Dena and Hatcher, Asante and McCabe, Cristin and Xu, Jishu and Bjorklund, Nicole and Taglialatela, Giulio and others
Journal: PLoS Biol (2016): e1002472

ACLY and ACC1 Regulate Hypoxia-Induced Apoptosis by Modulating ETV4 via α-ketoglutarate
Authors: Keenan, Melissa M and Liu, Beiyu and Tang, Xiaohu and Wu, Jianli and Cyr, Derek and Stevens, Robert D and Ilkayeva, Olga and Huang, Zhiqing and Tollini, Laura A and Murphy, Susan K and others
Journal: PLoS Genet (2015): e1005599

Analysis of the nicotinamide phosphoribosyltransferase family provides insight into vertebrate adaptation to different oxygen levels during the water-to-land transition
Authors: Fang, Chengchi and Guan, Lihong and Zhong, Zaixuan and Gan, Xiaoni and He, Shunping
Journal: FEBS journal (2015): 2858–2878

Metformin-induced energy deficiency leads to the inhibition of lipogenesis in prostate cancer cells
Authors: Loubière, Camille and Goiran, Thomas and Laurent, Kathiane and Djabari, Zied and Tanti, Jean-Frančois and Bost, Frédéric
Journal: Oncotarget (2015): 15652

Prediction of intracellular metabolic states from extracellular metabolomic data
Authors: Aurich, Maike K and Paglia, Giuseppe and Rolfsson, Ottar and Hrafnsdóttir, Sigrún and Magnúsdóttir, Manuela and Stefaniak, Magdalena M and Palsson, Bernhard O and Fleming, Ronan MT and Thiele, Ines
Journal: Metabolomics (2015): 603–619

参考文献

Enhanced metabolic activities for ATP production and elevated metabolic flux via pentose phosphate pathway contribute for better CIK cells expansion
Authors: Weiwei Zhang, Huimin Huang, Haibo Cai, Wen-Song Tan
Journal: Cell proliferation (2019)

Soluble α-Klotho treatment protects adenine-induced uremia rats from sciatic nerve damage
Authors: Yingdan Zhao, Jun Ma, Bo Gu, Yang Yi, Hanqing Wang, Zhiyong Guo
Journal: Biomedical Research (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

相关产品

活性氧 ROS Brite 700 体内成像优化

	货号	16004	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	2544
	Ex (nm)	682	Em (nm)	701
	分子量	1295.14	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

ROS Brite 活性氧荧光探针700 体内成像优化 是美国AAT Bioquest生产的用于检测ROS的试剂，活性氧(ROS)是以化学方法反应的包含活性氧原子的化合物。例如：超氧化物、含有羟基自由基、单线态氧和过氧化物的衍生物。 ROS具有很高的活性，因为存在未配对的价电子层单电子。 ROS是生物氧代谢自然形成的副产物，它在细胞信号传递和体内平衡方面扮演着重要角色。然而在一些环境情况下（如紫外线照射或者高温环境下），ROS水平将大幅度增加。这可能导致细胞结构的重大伤害，日积月累,这被称为氧化应激。外部来源也生成ROS ，如电磁辐射。在氧化应激条件下，活性氧产量大幅度增加， 导致细胞膜脂、蛋白质和核酸的逐渐破坏。这些生物分子的氧化性损伤是与衰老和各种疾病紧密相关，例如动脉粥样硬化、致癌性肿瘤、缺血性贫血、神经衰退性疾病。 ROS Brite 700试剂是用以测量小动物氧化应激水平的新型荧光分子探针。 Th cell-impermeant ROS Brite 700试剂是水溶性的没有荧光，当其和活性氧反应产生明亮的近红外荧光 。因此该试剂可以用常用的荧光显微镜高分辨率、微型板块荧光测量 或者流式细胞仪成像通过测量荧光信号来测量细胞内氧化应激水平。对于细胞活性氧应激水平检测，我们推荐您使用我们的 cell-permemeant ROS Brite 570, 670 and 780 试剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ROS Brite 活性氧荧光探针700 体内成像优化 。 

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

样品操作及实验分析

1）在DMSO中准备10至20 mM ROS Brite 储备溶液。 通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）将DMSO储备溶液稀释到Hanks溶液中，制成5至10 µM的工作溶液。

2）根据需要处理细胞（例如，使用50-100 nM血管紧张素II处理RASM细胞3-5小时）。

3）将细胞与ROS Brite （5-10 µM，来自步骤＃1）在37ºC下孵育15 -30分钟。

注意：所使用的ROS Brite 的浓度随细胞系的不同而不同，需要测试不同的浓度才能获得最佳剂量。 对于cat＃16053，可能使用的浓度较低，例如0.5-5 uM。

4）用HHBS缓冲液代替染料加载溶液。

5）用适当的荧光仪器（例如荧光显微镜，流式细胞仪或体内成像仪器）分析细胞。

参考文献

Thiol-Mediated Synthesis of Hyaluronic Acid-Epigallocatechin-3-O-Gallate Conjugates for the Formation of Injectable Hydrogels with Free Radical Scavenging Property and Degradation Resistance
Authors: Chixuan Liu, Ki Hyun Bae, Atsushi Yamashita, Joo Eun Chung, Motoichi Kurisawa
Journal: Biomacromolecules (2017)

Transient receptor potential melastatin 8 ion channel in macrophages modulates colitis through a balance-shift in TNF-alpha and interleukin-10 production
Authors: M Khalil, A Babes, R Lakra, S Försch, PW Reeh, S Wirtz, C Becker, MF Neurath, MA Engel
Journal: Mucosal immunology (2016)

VEGFR2 signaling prevents colorectal cancer cell senescence to promote tumorigenesis in mice with colitis
Authors: Sebastian Foersch, Tobias Sperka, Christina Lindner, Astrid Taut, Karl L Rudolph, Georg Breier, Frank Boxberger, Tilman T Rau, Arndt Hartmann, Michael Stürzl
Journal: Gastroenterology (2015): 177–189

相关产品

AF594-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

简要概述

产品基本信息

货号：16404

产品名称：AF594-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：590

发射波长(nm)：617

产品介绍

AF594-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)是美国AAT Bioquest生产的荧光标记二抗，我们的山羊抗兔IgG全抗体在缀合前已经与人IgG和人血清交叉吸附，以最小化交叉反应性。 这种AF488标记的山羊抗兔IgG结合物是通过交叉吸附的山羊抗兔IgG全抗体与AF594 NHS酯的反应制备的，该分子与AlexaFluor®488NHS酯相同（Alexa Fluor是ThermoFisher的商标）。 每种缀合物通常每个IgG分子具有4-6个荧光团。 荧光二抗缀合物可用于其特定靶标的检测，分选或纯化，是荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜，流式细胞仪和荧光西方检测的理想选择。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的AF594-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)。 

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参考文献

Overexpression of CXCR2 predicts poor prognosis in patients with colorectal cancer.
Authors: Jingkun Zhao, Baochi Ou, Hao Feng, Puxiongzhi Wang, Shuai Yin, Congcong Zhu, Shenjie Wang, Chun Chen, Minhua Zheng, Yaping Zong
Journal: Oncotarget (2017)

Cadherin-12 enhances proliferation in colorectal cancer cells and increases progression by promoting EMT
Authors: Junjun Ma, Jingkun Zhao, Jun Lu, Puxiongzhi Wang, Hao Feng, Yaping Zong, Baochi Ou, Minhua Zheng, Aiguo Lu
Journal: Tumor Biology (2016): 1–12

The migration and differentiation of hUC-MSCsCXCR4/GFP encapsulated in BDNF/chitosan scaffolds for brain tissue engineering
Authors: Chuanjun Huang, Longxiang Zhao, Jun Gu, Dekang Nie, Yinan Chen, Hao Zuo, Wei Huan, Jinlong Shi, Jian Chen, Wei Shi
Journal: Biomedical Materials (2016): 035004

Transplantation of RADA16-BDNF peptide scaffold with human umbilical cord mesenchymal stem cells forced with CXCR4 and activated astrocytes for repair of traumatic brain injury
Authors: W Shi, CJ Huang, XD Xu, GH Jin, RQ Huang, JF Huang, YN Chen, SQ Ju, Y Wang, YW Shi
Journal: Acta Biomaterialia (2016): 247–261

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iFluor 405羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

	货号	16444	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 ug	价格	984
	Ex (nm)	403	Em (nm)	427
	分子量	~150000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

iFluor 488羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

	货号	16448	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 ug	价格	984
	Ex (nm)	491	Em (nm)	516
	分子量	~150000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

iFluor 514羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

	货号	16452	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 ug	价格	984
	Ex (nm)	528	Em (nm)	555
	分子量	~150000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

iFluor 546羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

	货号	16457	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 ug	价格	984
	Ex (nm)	541	Em (nm)	557
	分子量	~150000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

iFluor 555羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

	货号	16460	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 ug	价格	984
	Ex (nm)	557	Em (nm)	570
	分子量	~150000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：16460

产品名称：iFluor 555羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

规格：200 ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：552

发射波长(nm)：567

 

产品介绍

iFluor 555羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)是美国AAT Bioquest生产的荧光标记二抗，AAT 生物科技公司的 iFluor 染料在标记蛋白尤其是标记抗体是最佳的。这些染料是非常明亮且耐光性很好，在标记蛋白质时具有最小的荧光淬灭。推荐的可用荧光激发光线(如350、405、488、555和633nm)激发。 iFluor 555山羊抗-老鼠免疫球蛋白（ (H+L)轭合物的荧光激发波长和发射波长分别是 559nm 和 ~569 nm。这些卓越的性能使这一类最新探针家族成为 Alexa Fluor® 555山羊抗-老鼠免疫球蛋白（ (H+L)轭合物（Alexa Fluor®是Invitrogee的产品)探针的替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 555羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)。

 

图示

图1.将HeLa细胞与小鼠抗微管蛋白分别与AAT的iFluor™ 555山羊抗小鼠IgG偶联物（红色，右侧）和山羊抗小鼠IgG与AlexaFluor®555偶联（红色，左侧）一起孵育。 细胞核用Hoechst 33342（Blue，Cat＃17530）染色。

图2.用（Tubulin +）和（Tubulin-）小鼠抗微管蛋白对HeLa细胞进行染色，然后用iFluor™594山羊抗小鼠IgG（右）或AlexaFluor®594山羊抗小鼠IgG（左）进行可视化。

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• AAT Bioquest iFluor 染料干货锦集 你想了解的都在这里
• 锦囊：iFluor 系列染料大集合

 

参考文献

Overexpression of CXCR2 predicts poor prognosis in patients with colorectal cancer.
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iFluor 568羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)

	货号	16462	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 ug	价格	984
	Ex (nm)	568	Em (nm)	587
	分子量	~150000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述