AteloGene^® siRNA 活体转染试剂盒

AteloGene^® Quick Gelation

◆原理

　　AteloGene^® 的主要成分是 Atelocollagen（去端肽胶原），将合成的 siRNA/miRNA 通过适当混合，形成 siRNA/miRNA 的 Atelocollagen 复合体，该复合物可有效导入细胞，因此适用于活体内转染。

◆制备

　　siRNA/Atelogene 复合物的制备极其简单：取等体积的 AteloGene^® 与 siRNA/miRNA 溶液混合后，注射到小鼠即可。

　　*siRNA/miRNA 溶液体积：局部 5-10 μM，全身 20-40 μM siRNA

siRNA被高效导入组织

　　Atelocollagen 和 25 μg 的 siRNA 混合后，通过尾静脉注射，24小时后，可在不同组织中检测到 RNA 的存在。 

操作步骤

         AteloGene™ 和合成的小 RNA 即混即用：

         ●　专门用于 siRNA/miRNA 体内转染

         ●　保护 小RNA 不被RNase降解，延长作用时间

         ●  “AteloGene™”无毒性，其组成成分去端肽胶原具有高生物相容性

         ●　使用 “AteloGene™ Local Use”，局部给药，给药后，会在体内形成局部凝胶，保持 siRNA停留在给药部位。

         ●　使用“AteloGene™ Systemic Use”，通过尾静脉注射，全身给药。 给药后，不会在体内形成凝胶，尾静脉注射，通过血液循环，siRNA

               被有效的输送到全身。 

◆案例、应用

【转染人 RGM249 基因的３种小分子 RNA 后肿瘤明显减小】

　　从人 RGM249 基因的小分子 RNA 中，选择三种 siRNAs 和 AteloGene^® Local Use 试剂混合，注射到人恶性黑色素瘤皮下肿瘤模型鼠中。
　　４周后观察到，注射 siRNA 和 AteloGene^® 混合物的模型鼠其皮下肿瘤扩散明显减少。

　

【已报道的 AteloGene^® 系列转染案例】

◆产品列表

产品编号	产品名称	规格	应用
KOU-1392	AteloGene® Local Use	1 Kit	局部注射后，复合物变为凝胶状，保留在注射部位
KOU-1393	AteloGene® Systemic Use	1 Kit	静脉注射后，随着血液循环可将 siRNA/miRNA传递到全身

*标准操作中，每小鼠最大注射剂量为 200 μL；客户可根据实际注射部位调整使用量 10~200 μL。
*以最大剂量计，每 Kit 至少可注射12次

常见问题

                  

Q1：   Atelocollagen（去端肽胶原）与普通天然胶原的区别

A1：   Atelocollagen（去端肽胶原）是一种通过蛋白酶溶解的胶原蛋白，其物理性质与未经过蛋白酶作用的天然胶原蛋白几乎相同。

          同时，Atelocollagen 还具有更优越的特性：

          低抗原性

          Atelocollagen 是经过蛋白酶处理的小牛皮来源的高纯度I型胶原蛋白。胶原蛋白分子在Ｎ端和Ｃ端具有一段氨基酸序列，称为端肽，胶原

          蛋白的抗原性多来自于此。 Atelocollagen 通过蛋白酶的作用，去掉了端肽，故具有低免疫原性。

          高纯度

          Atelocollagen 的纯度极高。该特性得益于蛋白酶处理过程，该处理在提取去端肽胶原的过程中，因为蛋白酶的作用也分解了其他蛋白污

          染物。

          高度生物相容性

          Atelocollagen 可生物降解，因此可用于各种领域，如医药，医疗器械，作为化妆品原理，及细胞培养研究。

          高度可塑性

          去端肽胶原可被改造成许多不同的物理性状，如膜、海绵状结构、带状结构、粉末和凝胶。我们可利用去端肽胶原的这一特性，生产适用

          于任何领域的物理性状。例如，去端肽胶原不溶于中性水，但可以通过改变性状，使其溶于中性水中。同样，可以利用去端肽胶原的这一

          特性，将其作为凝固剂或抗凝剂，并可以控制其被人体吸收的速率。

          安全性

          我们精确管理每一只用于生产去端肽胶原的牛，以确保原料的安全性。

          A. 我们使用的牛真皮来自澳大利亚国家畜牧业溯源系统，牛龄为６月或更小的牛犊。

          B. 我们不使用动物饲料喂养牛羊，只用无疯牛病的安全饲料。

          C. 我们只使用牛皮的真皮层，其被归于“无传染性”类（WHO对传染性海绵状脑病组织感染性分布准则）。

          　 收集的过程中，我们非常小心防止真皮层与危害部位接触，如大脑和脊柱。

          D. 我们能够对胶原蛋白生产的原料进行溯源。

Q2：  转染试剂盒内的去端肽胶原溶液和医用级别的去端肽胶原溶液有何区别？

A2：  我们对试剂盒内的去端肽胶原浓度以及缓冲液成分进行了优化，以提高siRNA的转染效率；使用的去端肽胶原与医用级别的制造工艺相同，

          故该转染试剂盒对试验动物非常安全，且具有高度生物相容性。

 

Q3：  AteloGene^® 活体转染的优势

A3：  AteloGene^® 和合成的小RNA即混即用

          ●　专门用于 siRNA/miRNA 体内转染

          ●　保护小 RNA 不被 RNase 降解，延长作用时间

          ●　AteloGene^® 无毒性，其组成成分去端肽胶原具有高生物相容性

          ●　使用 AteloGene^® Local Use，局部给药，给药后，会在体内形成局部凝胶，保持 siRNA 停留在给药部位。

          ●　使用 AteloGene^® Systemic Use，通过尾静脉注射，全身给药。 给药后，不会在体内形成凝胶，尾静脉注射，通过血液循环，siRNA

            　被有效的输送到全身。

 

Q4：  AteloGene^® 与 siRNA 复合物在血液中稳定吗？

A4：  我们已经证明，AteloGene^® 与 siRNA 复合物能够抵御如RNA酶等物质的作用。

          Atelocollagen 和 25 μg 的 siRNA 混合后，通过尾静脉注射，24小时后，可在不同组织中检测到 RNA 的存在。

          参考文献 : Takeshita F, et al. Efficient delivery of small interfering RNA to bone-metastatic tumors 

                           by using atelocollagen in vivo. (2005) Proc Natl Acad Sci USA. 102(34):12177-12182.

Q5：  能否使用市面上，传统的胶原蛋白进行 siRNA 转染？

A5：  我们不建议这样做，因为您需要根据具体条件进行额外的实验。

 

Q6：  AteloGene^® QG 与 AteloGene^® 两款产品有何区别？

A6：

AteloGene® QG	AteloGene®
给药后，快速形成局部凝胶	给药后，释放速度受到控制
至少可给药15次。	至少可给药10次。

 

          AteloGene^® QG与AteloGene^® 凝胶形成时间对比：

Q7：   能否使用 AteloGene^® 转染体外培养细胞？

A7：   AteloGene^® 是专门为体内转染而研发的，因此我们不建议您用于体外实验。

          体外转染研究，推荐您使用 Cosmo Bio 的 GenomONE™ 仙台病毒包膜转染试剂盒，可转染 DNA、siRNA、ODN、蛋白抗体等分子；该

          产品使用安全，可替代传统的病毒转染及脂质体转染方法。GenomONE™ 的更多资料，请向我司索取。

 

Q8：  AteloGene^® 能否用于质粒 DNA 转染？

A8：  AteloGene^® 是专门用于siRNA转染的产品，因此我们不建议您用于质粒 DNA 转染。

          以下两篇是使用 AteloGene^® 转染质粒DNA的文献，供您参考：

          a.      内皮功能障碍研究，静脉注射

                   Shinozaki K, et al. (2005)Cardiovasc Pharmacol. 46(4):505-512.

          b.      脑胶质瘤研究，肿瘤内给药

                   El Sayed SM, et al. (2012) Cancer Gene Ther. 19(1):1-18.

Q9：  能否提供免费试用装，用于评估产品效果？

A9：  我们无法提供免费试用装。

        （AteloGene^® 已有大量文献和研究证明其有效性，如果您需要相关领域的运用情况，请查看文献列表）

 

Q10：AteloGene^® 与 siRNA 复合物在血液中稳定吗？

A10：我们已经证明，AteloGene^® 与 siRNA 复合物能够抵御如 RNA 酶等物质的作用。

          具体请参考“RNAi 效率”相关文献。

          Takeshita F, et al. Efficient delivery of small interfering RNA to bone-metastatic tumors by using atelocollagen in vivo. (2005) 

          Proc Natl Acad Sci USA. 102(34):12177-12182."

 

Q11： 试剂盒组成？

A11： 1 Kit 按照最大剂量计算，至少可用 10 次。

           – 预充式注射器 600 µL×２ （每只注射器内预填充的“AteloGene^®”至少可给药５次）

           – 10×siRNA 缓冲液: 3 mL×１瓶

           – 无菌水：3 mL×１瓶

           – 微型管：2.0 mL×2管

           – 一次性注射器: 1 mL×2只

           – 18G 注射、抽吸用针头：４只

           – 26G 注射针头: 2只

           – 说明书：１份

 

Q12： AteloGene^® 如何使用？

A12： 具体操作请参照产品说明书。

          1) 准备AteloGene^®

              将预充式注射器内的AteloGene^® 转移到微管中，并放置于冷却设备上保持低温。

          2) 准备siRNA溶液

              根据局部给药和全身给药的情况，分别准备 600 µL 5-10 µM 或 20-40 µM siRNA 溶液，并保持低温。

          3) 制备 AteloGene^® 与 siRNA 的混合溶液

              将 siRNA溶液（步骤2）缓慢加入 AteloGene^®（步骤１），通过上下旋转混合，得到 AteloGene^® 和 siRNA 混合物，以上操作均在

              冷却设备中进行。

          4) 消除气泡及准备给药

              将第３步得到的混合物离心，去除气泡后，吸入一次性注射器内。

          <局部给药>

              注射 AteloGene^® 和 siRNA 复合物使其包裹整个靶标部位。每只小鼠的标准剂量为 200 µL 复合物。

          ●　局部给药案例

              皮下肿瘤给药

              a. 如有必要，请麻醉动物。

              b. 在距肿瘤边缘 5 mm 的位置插入针头，针头截面向上。

              c. 将针头平行于皮肤插入距离肿瘤 2~3 mm 的位置，然后缓慢的注射 200 µL AteloGene^® 和 siRNA 复合物。使复合物包裹住整个

                 肿瘤。

          <全身给药>

              每只小鼠的标准剂量为 200 µL AteloGene^® 和 siRNA 复合物。

              每次注射的上限是 200 µL，请确保不会超过这个剂量。

              a. 如有必要，请麻醉动物。

              b. 固定小鼠。

              c. 用浸润乙醇的棉签擦拭消毒小鼠尾巴。

              d. 将针头插入尾部静脉1/4-1/3处，该部位应该是完全膨胀。

              e. 确认针头插入了正确的部位，然后缓慢的注入 200 µL AteloGene^® 和 siRNA 复合物。

              f.  确认小鼠恢复正常。

Q13：  储存注意事项

A13：  产品需储存于2-10℃（不可冷冻）。

           ★ 当温度高于20℃时，AteloGene^® 会发生凝胶化和热变性，如果产品已经发送凝胶化和热变性，请立即停止使用。

           ★ 冷冻 AteloGene^® 会导致混合物中产生分散性气泡，请勿使用冷冻后的 AteloGene^® 进行实验。

 

Q14：  产品有效期

A14：  产品生产后３年有效。

 

Q15：  使用注意事项

A15：1) 该试剂仅供科研使用，禁止用于人体实验。请勿用于科研以外的任何目的。

          2) 务必在使用前仔细阅读说明书，制造商不对超出说明书使用方法得到的结果承担任何责任。

          3) 转染效率取决于siRNA序列、靶基因的表达水平、不同组织和给药方式等多方面因素，可能并不总是得到预期的效果。

              实验前，请您调查好给药后的作用持续时间及分析方法。

 

Q16：  操作注意事项

A16：  在洁净的环境下进行所有步骤：

          ●　使用恰当的方法消除 RNA 酶，避免的 siRNA 的降解。

          ●　在储存过程中，10×siRNA 缓冲液可产生结晶。如出现这种情况，使用之前将其加热到约 37℃，使之完全溶解。

          ●　使用 AteloGene^® 和 siRNA 的混合物前，确保气泡已完全消除。

AteloGene® 参考文献_全身给药
◆全身给药/癌症研究
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
前列腺癌, 肺癌	siRNA	静脉注射,肿瘤内	Takahashi    M, et al. (2013)    PLoS One 8(8): e73214.	23951344
口腔鳞状细胞癌	miRNA	静脉注射	Tanaka    H, et al. (2013)    Oral Oncol. 49(6):551-559.	23481312
非小细胞肺癌, 乳腺癌	siRNA	静脉注射	Mochizuki    S, et al. (2012) J Natl Cancer Inst. 104(12):906-922.	22636800
骨肉瘤转移	miRNA	静脉注射	Osaki    M, et al. (2011) Mol Ther.19(6):1123-1130.	21427707
前列腺癌	siRNA	静脉注射	Azuma    K, et al. (2010) Biochem Biophys Res Commun. 391(1):1075-1079.	20004643
前列腺癌	siRNA	静脉注射	Sasaki    T, et al. Biochem Biophys Res Commun. (2010)    399(1):79-83.	20638364
转移性前列腺癌	miRNA	静脉注射	Takeshita    F, et al. (2010) Mol Ther.18(1):181-187.	19738602
前列腺癌	siRNA	静脉注射	Mu    P, et al. (2009) Int J Cancer.125(12):2978-2990.	19422046
前列腺癌	siRNA	静脉注射	Hokaiwado    N, et al. (2008)Carcinogenesis. 29(6):1134-1138.	18413363
转移性前列腺癌	siRNA	静脉注射	Takeshita    F, et al. (2005) Proc Natl Acad Sci USA. 102(34):12177-12182.	16091473
◆全身用药/ 多项研究
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
自身免疫性炎症	siRNA	静脉注射	Raveney    BJ, et al. (2013)    PLoS One. 8(2):e56595.	23437182
血管内皮细胞通透性	–	–	Hanai    K, et al. (2012) J Drug Delivery.Article ID 245835.	22506120
接触性超敏反应	siRNA	静脉注射	Inaba    S, et al. (2012) Mol Ther.20(2):356-366.	22031237
自身免疫性糖尿病	siRNA	腹腔	Lian    G, et al. (2012) J Immunol.188(5):2227-2234 .	22291182
血管炎性疾病	miRNA	静脉注射	Sun    X, et al. (2012) J Clin Invest.122(6):1973-1990.	22622040
毒品和化学诱导急性肝损伤	siRNA	静脉注射	Yoshikawa    Y, et al. (2012) Toxicol Appl Pharmacol. [Epub    ahead of print]	22841776
肢带型肌营养不良症	siRNA	静脉注射	Kawakami    E, et al. (2011) Dev Growth Differ. 53(1):48-54.	21261610
关节炎	miRNA	静脉注射	Nakasa    T, et al. (2011) 关节炎 Rheum.Jun;63(6):1582-1590.	21425254
肝毒性比较	–	静脉注射	Ogawa    S, et al. (2011) J Toxicol Sci.36(6):751-762.	22129739
自身免疫性糖尿病	siRNA	腹腔	Yamada    A, et al. (2010) PLoS One.5(9):e12894.	20877570
接触性超敏反应	siRNA	静脉注射	Ishimoto    T, et al. (2008) Mol Ther.16(2):387-395.	18059372
肌营养不良症	siRNA	静脉注射       （眼眶静脉）	Kinouchi    N, et al. (2008) Gene Ther.15(15):1126-1130.	18323791
接触性超敏反应	antisense    ODN	静脉注射	Hanai    K, et al. (2004) Hum Gene Ther.15(3):263-272.	15018735
AteloGene® 参考文献_局部给药
◆局部给药/癌症研究
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
肝细胞癌	siRNA	肿瘤内	Deng Q, et al.  (2013) Hepatology.    [Epub ahead of print]	23929653
口腔癌	siRNA	瘤周	Endo    H, et al. (2013)    Carcinogenesis. 34(3):560-569.	23233740
骨肉瘤.	siRNA	肿瘤内	Fujiwara-Okada    Y, et al. (2013) Br    J Cancer. 108(4):836-847.	23462806
乳腺癌	siRNA	肿瘤内	Kabuta    T, et al. (2013) J    Biol Chem. [Epub ahead of print]	23543736
前列腺癌	siRNA	瘤周	Nomura    T et al. (2013) Mol    Cancer. 12:27.	23566222
肾癌	siRNA	瘤周	Takeuchi    A, et al. (2013)    Cancer Immunol Immunother. 62(3):517-527.	23052245
脑胶质瘤	siRNA	肿瘤内	Yamaki    T, et al. (2013)    Sci Rep. 3:1160.	23362460
前列腺癌	siRNA	肿瘤内	Kawamura    M, et al. (2012)    Cell Death Differ. 19(1):170-179.	21681193
早衰	siRNA	瘤周	Kim    BC et al. (2012) EMBO J.31(22):4289-4303.	23085987
前列腺癌	shRNA	瘤周	Koike    K, et al. (2012) Curr Cancer Drug Targets. 12(7):847-856.	22515525
脑胶质瘤	siRNA	瘤周	Okazaki    T, et al. (2012) Cancer Lett.323(2):199-207.	22542810
脑胶质瘤	plasmid	肿瘤内	El    Sayed SM, et al. (2012) Cancer Gene Ther. 19(1):1-18.	21921941
尿路上皮癌	siRNA	经尿道前列腺	Shimada    K, et al. (2012) Clin Cancer Res. 18(19):5247-5255.	22850567
间皮瘤	siRNA	瘤周	Sudo    H, et al. (2012) Cancer Sci.103(2):203-209.	22017350
胚胎癌	siRNA	瘤周	Ushida    H, et al. (2012) J Urol.187(5):1876-1881.	22425046
肺腺癌	siRNA	肿瘤内	Yamaguchi    T, et al. (2012) Cancer Cell.21(3):348-361.	22439932
胰腺癌	siRNA	肿瘤内 （原位模型）	Yamato    I, et al. (2012) Cancer Res.72(18):4829-4839	22826605
脑胶质瘤	siRNA	瘤周	Andradas    C, et al. (2011) Oncogene.30(2):245-252.	20818416
头颈部鳞状细胞癌	siRNA	瘤周	Arai    A, et al. (2011) Cancer Res.71(13):4598-4607.	21571861
乳腺癌	siRNA	血管新生试验管（angioreacter）内	Hashimoto    A, et al. (2011) PLoS One.6(8):e23359.	21858086
胰腺癌	siRNA	肿瘤内	Kobayashi    T, et al. (2011) Clin Exp Metastasis. 28(4):367-376.	21331750
脑胶质瘤	siRNA	肿瘤内	Lorente    M, et al. (2011) Cell Death Differ. 18(6):959-973.	21233844
间变性大细胞淋巴瘤	miRNA       inhibitor	瘤周	Matsuyama    H, et al. (2011) Blood.118(26):6881-6892	22042699
结肠癌	siRNA	肿瘤内	Oh    BY, et al. (2011) World J Gastroenterol. 17(20):2563-2571.	21633662
肝细胞癌	siRNA	瘤周	Shigematsu    S, et al. (2011) Exp Cell Res. 317(13):1851-1859.	21624362
硬胃癌	miRNA expression    vector	肿瘤内      （原位模型）	Takei    Y, et al. (2011) Cancer Res.71(4):1442-1453.	21169410
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
尤因氏肉瘤	siRNA	肿瘤内	Takigami    I, et al. (2011) Int J Cancer.128(1):216-226.	20648560
非小细胞肺癌	siRNA	瘤周      （原位模型）	Tasaki    M, et al. (2011) Br J Cancer.104(4):700-706.	21285982
肾细胞癌	siRNA	瘤周	Tomita    S, et al. (2011) Cancer Sci.102(1):57-63.	21054677
子宫内膜癌	miRNA	瘤周	Tsuruta    T, et al. (2011) Cancer Res.71(20):6450-6462.	21868754
肝细胞癌	siRNA	瘤周	Vara    D, et al. (2011) Cell Death Differ.18(7):1099-1111.	21475304
前列腺癌	siRNA	肿瘤内	Zeng    Y, et al. (2011) J Biol Chem.286(16):13985-13994.	21357425
乳腺癌	siRNA	内部乳腺脂肪垫（原位模型）	Cheng    L, et al. (2010) Oncogene.29(42):5700-5711.	20676140
前列腺癌	siRNA	瘤周	Forootan    SS, et al. (2010) Int J Oncol.36(1):69-76.	19956834
宫颈癌	siRNA	瘤周	He    L, et al. (2010) J Clin Invest.120(6):2094-2108.	20458142
头颈癌	miRNA inhibitor	瘤周	Liu    CJ, et al. (2010) Cancer Res.70(4):1635-1644.	20145132
骨髓瘤	siRNA	瘤周	Marsaud    V, et al. (2010) Mol Cancer.9:103.	20459741
尤因氏肉瘤	siRNA	肿瘤内	Nagano    A, et al. (2010) Int J Cancer.126(12):2790-2798.	19642105
肝细胞癌	siRNA	肿瘤内	Satow    R, et al. (2010) Clin Cancer Res.16(9):2518-2528.	20388846
大肠癌	siRNA	肿瘤内	Shitashige    M, et al. (2010) Cancer Res.70(12):5024-5033.	20530691
间皮瘤	siRNA	瘤周	Sudo    H, et al. (2010) Genomics.95(4):210-216.	20153416
p53基因突变	siRNA	瘤周	Tanooka    H, et al. (2010) Cancer Gene Ther. 17(1):1-10.	19557034
骨髓瘤	siRNA	瘤周	Ashihara    E, et al. (2009    ) Clin Cancer Res. 15(8):2731-2738.	19351774
脑胶质瘤	siRNA	瘤周	Lorente    M, et al. (2009) Glia.57(13):1374-1385.	19229996
膀胱癌	siRNA	经尿道前列腺	Shimada    K, et al. (2009) Cancer Res.69(7):3157-3164.	19293182
前列腺癌	siRNA	瘤周	Shimada    K, et al. (2009) Cancer Sci.100(7):1248-1254.	19432893
骨肉瘤	siRNA	肿瘤内	Yamaguchi    U, et al. (2009) Cancer Sci.100(12):2268-2274.	19725836
乳腺癌	siRNA	肿瘤内	Bernard-Pierrot    I, et al. (2008) Cancer Res. 68(17):7165-7175.	18757432
乳腺癌	siRNA	肿瘤内      （原位模型）	Honma    K, et al. (2008) Nat Med.14(9):939-948.	18724378
胰腺癌	siRNA	肿瘤内	Iwaki    K, et al. (2008) Int J Cancer.122(3):658-663.	17935125
非小细胞肺癌	siRNA	瘤周	Migita    T, et al. (2008) Cancer Res.68(20):8547-8554.	18922930
涎腺腺样囊性癌	siRNA	肿瘤内	Shirasaki    T, et al. (2008) BMC Cancer.8:348.	19036131
黑色素瘤	siRNA	瘤周	Ueno    Y, et al. (2008) Int J Cancer.123(2):340-347.	18398842
宫颈癌	siRNA	肿瘤内	Yamato    K, et al. (2008) Cancer Gene Ther. 15(3):140-153.	18157144
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
宫颈癌	siRNA	肿瘤内	Yu    D, et al. (2008) Cancer Sci.99(4):810-815.	18377429
胆管癌	siRNA	肿瘤内	Kokuryo    T, et al. (2007) Cancer Res.67(20):9637-9642.	17942892
胃肠道肿瘤、横纹肌肉瘤	antisense ODN	肿瘤内, 腹腔,    肌内注射	Nakazawa    K, et al. (2007) Cancer.109(5):993-1002.	17318877
结肠癌	miRNA	瘤周	Tazawa    H, et al. (2007) Proc Natl Acad Sci U S A. 104(39):15472-15477.	17875987
卵巢癌	siRNA	瘤周	Yamashita    M, et al. (2007) Int J Cancer. 120(10):2243-2250.	17266036
宫颈癌	siRNA	肿瘤内	Fujii    T, et al. (2006) Int J Oncol.29(3):541-548.	16865269
头颈部鳞状细胞癌	siRNA	肿瘤内	Nozawa    H, et al. (2006) Cancer Sci.97(10):1115-1124.	16984384
前列腺癌	siRNA	肿瘤内	Takei    Y, et al. (2006) Cancer.107(4):864-873.	16832814
宫颈癌	siRNA	瘤周	Kuroda    M, et al. (2005) Br J Cancer.92(2):290-293.	15655544
前列腺癌	antisense    ODN	瘤周	Takei    Y, et al. (2005) Int J Cancer.114(3):490-497.	15578698
非精原细胞瘤	siRNA	肿瘤内      （原位模型）	Minakuchi    Y, et al. (2004) Nucleic Acids Res. 32(13):e109.	15272050
前列腺癌	siRNA	瘤周	Takei    Y, et al. (2004) Cancer Res.64(10):3365-3370.	15150085
生殖细胞瘤	antisense    ODN	瘤周	Hirai    K, et al. (2003) J Gene Med.5(11):951-957.	14601132
直肠癌	antisense    ODN	肿瘤内	Takei    Y, et al. (2002) J Biol Chem.277(26):23800-23806.	11959856
直肠癌	antisense    ODN	瘤周	Takei    Y, et al. (2001) Cancer Res.61(23):8486-8491.	11731432
◆局部给药/ 多项研究
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
肌肉萎缩	siRNA	肌内注射	Kawakami    E, et al. (2013)    PLoS One. 8(5):e64719.	23717655
骨折	siRNA	骨折部位	Kawakami    Y, et al. (2013)    Lab Invest. [Epub ahead of print]	23897412
硬皮病	siRNA	皮内注射	Makino    K, et al. (2013) J    Immunol. 190(8):3905-3915.	23509348
高血压	siRNA	显微注射到RVLM	Matsukawa    R, et al. (2013) Am    J Hypertens. 26 (1): 51-57.	23382327
脊髓损伤	siRNA	鞘内注射	Ando    T, et al. (2012)    PLoS One 7(12): e51744.	20181596
纤维化	siRNA	皮内注射	Distler    A, et al. (2012)    Ann Rheum Dis. 72(9):1575-1580.	23148305
纤维化	siRNA	皮内注射	Horn    A, et al. (2012)    Ann Rheum Dis. 71:785-789.	22402139
纤维化	siRNA	皮内注射	Khodzhigorova    A, et al. (2012) Ann Rheum Dis. [Epub ahead of    print]	22904261
哮喘	siRNA	气管导管	Liu    S, et al. (2012) Immunol Cell Biol. 90(3):337-345.	21625250
角膜损伤	shRNA	结膜	Bellner    L, et al. (2011) Mol Vis.17:1144-1152.	21552471
高血压	siRNA	显微注射到RVLM	Matsukawa    R, et al. (2011) J Hypertens. 29(9):1735-1742.	21738056
脊髓损伤	siRNA	脊髓挫伤表面	Toyooka    T, et al. (2011) J Neurotrauma. 28(4):607-618.	21250919
研究领域	核酸	给药途径	参考文献	PubMed ID
肌肉损伤	miRNA	肌肉缺损区	Nakasa    T, et al. (2010) J Cell Mol Med. 14(10):2495-2505.	19754672
关节炎	miRNA	ntraarticular	Nagata    Y, et al. (2009) 关节炎 Rheum. 60(9):2677-2683.	19714650
进行性多灶性白质脑病	siRNA	显微注射到纹状体	Matoba    T, et al. (2008)Neuropathology. 28(3):286-294.	18179406
内膜增生	siRNA	静脉移植物的表面	Banno    H, et al. (2006) J Vasc Surg. 44(3):633-641.	16950446
内皮功能障碍	plasmid	肌内注射	Shinozaki    K, et al. (2005)Cardiovasc Pharmacol. 46(4):505-512.	16160605
家族性淀粉样多发性神经病变	single-stranded    ODN	肝脏	Nakamura    M, et al. (2004) Gene Ther. 11(10):838-846.	14961068
腺病毒载体重复给药	adenovirusvector	腹腔	Ochiya    T, et al. (2001) Curr Gene Ther. 1(1):31-52.	12109137