PhosphoWorks 荧光法ADP检测试剂盒 *红色荧光*

	货号	21655	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4488
	Ex (nm)	571	Em (nm)	585
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

PhosphoWorks 荧光法ADP检测试剂盒 *红色荧光*是美国AAT Bioquest生产的用于检测ADP的试剂盒，ADP参与许多生物反应，例如蛋白激酶。 我们的ADP分析试剂盒可通过监测ADP的形成来普遍用于分析蛋白激酶反应，而ADP的形成与酶磷酸转移酶的活性成正比，并通过荧光法进行测量。 该试剂盒提供了一种快速，简单且均一的测定ADP形成或消耗的测定方法。 该测定是连续的，并且可以容易地适于自动化。 该套件很方便，需要最少的动手时间。 由于蛋白激酶与诸如癌症和其他增生性疾病，炎性疾病，代谢紊乱和神经系统疾病等疾病的广泛相关性，因此参与药物开发的研究人员对蛋白激酶很感兴趣。 大多数商业化的蛋白激酶检测试剂盒都是基于对磷酸肽形成或ATP缺失的监测。 我们的ADP检测试剂盒比大多数商业激酶检测试剂盒对蛋白质激酶的检测更稳定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PhosphoWorks 荧光法ADP检测试剂盒 *红色荧光*。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.运行激酶反应（20 µL）
2.添加ADP传感器缓冲液（20 µL）
3.添加ADP传感器（10 µL）
4.在室温下孵育15分钟-1小时
5.监控荧光强度

溶液制备

1.储备溶液制备

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1ADP Sensor I库存解决方案（50X）：
将20 µL DMSO（组分B3）添加到ADP传感器I（组分B1）的小瓶中。

1.2ADP传感器库存解决方案（1X）：
将20 µL 50X ADP Sensor I储备溶液添加到ADP Sensor II（组件B2）的小瓶中。

1.3ADP标准溶液（300 mM）：
将100 µL H2O加入ADP标准液（组分C）中，制成300 mM ADP储备液。

2.标准溶液

ADP标准
通过包括不含ADP的样品来测量背景荧光，在激酶反应缓冲液中进行ADP标准品的系列稀释。 注意：通常，ADP浓度范围为0.05至30 µM是合适的。

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ADP标准品和测试样品的布局。 SD = ADP标准（SD1-SD7，0.05至30 uM）; BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1.运行激酶反应（此步骤未提供试剂）：

1.1根据需要准备20 µL激酶反应溶液。激酶反应的成分应根据需要进行优化（例如，特定的激酶反应可能需要优化的缓冲液系统）。在大多数情况下，如果您没有优化的激酶缓冲液，也可以使用ADP分析缓冲液（组分D）进行激酶反应。

1.2Amplite 荧光ADP测定试剂盒用于确定ADP的形成。在DTT和β-巯基乙醇等硫醇存在下，ADP传感器不稳定。最终硫醇浓度高于10 µM会大大降低测定的动态范围。

2.运行Amplite ADP分析：

2.1向装有20 µL激酶反应溶液的每个孔中加入20 µL ADP传感器缓冲液（组分A）和10 µL ADP Sensor储备溶液，使ADP测定总体积为50 µL /孔。注意：在DTT和β-巯基乙醇等硫醇存在下，ADP传感器不稳定。最终硫醇浓度高于10 µM会大大降低测定的动态范围。注意：ADP分析应在6.5至7.4的pH值下进行。

2.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。

2.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm处监控荧光强度。

参考文献

Discovery of Non-ATP-Competitive Inhibitors of Polo-like Kinase 1
Authors: Taikangxiang Yun, Tan Qin, Ying Liu, Luhua Lai
Journal: ChemMedChem (2016): 713–717

Cell polarity kinase MST4 cooperates with cAMP-dependent kinase to orchestrate histamine-stimulated acid secretion in gastric parietal cells
Authors: Hao Jiang, Wenwen Wang, Yin Zhang, William W Yao, Jiying Jiang, Bo Qin, Wendy Y Yao, Fusheng Liu, Huihui Wu, Tarsha L Ward
Journal: Journal of Biological Chemistry (2015): 28272–28285

Regulation of NDR1 activity by PLK1 ensures proper spindle orientation in mitosis
Authors: Maomao Yan, Lingluo Chu, Bo Qin, Zhikai Wang, Xing Liu, Changjiang Jin, Guanglan Zhang, Marta Gomez, Alexander Hergovich, Zhengjun Chen
Journal: Scientific reports (2015): 10449

Trypanosoma brucei vacuolar transporter chaperone 4 (TbVtc4) is an acidocalcisome polyphosphate kinase required for in vivo infection
Authors: Noelia Lander, Paul N Ulrich, Roberto Docampo
Journal: Journal of Biological Chemistry (2013): 34205–34216

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.运行激酶反应（20 µL）
2.添加ADP传感器缓冲液（20 µL）
3.添加ADP传感器（10 µL）
4.在室温下孵育15分钟-1小时
5.监控荧光强度

溶液制备 

1.标准溶液

磷酸盐标准
向950μL去离子水或酶反应缓冲液中添加50μL1 mM KH2PO4（组分D），得到50μM磷酸盐标准溶液（PS7）。 取50μM磷酸盐标准溶液，并进行1：2连续稀释，以用去离子水或酶反应缓冲液连续稀释磷酸盐标准液（PS6-PS1）。

2.工作溶液

2.1将500 µL ddH2O加入小瓶MESG底物（组分B）。 涡旋混合均匀，得到MESG底物溶液。 注意：250 µl足够一块板。

2.2向小瓶嘌呤核苷磷酸化酶（PNP；组分C）中加入100 µL ddH2O。 涡旋混合均匀，得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液。

2.3将全部体积的MESG底物溶液和嘌呤核苷磷酸化酶溶液添加到分析缓冲液（组分A）的瓶子中，并充分混合以得到工作溶液。 将工作溶液放在冰上。 注意：此工作溶液在冰上至少可稳定4小时。 不建议将工作溶液冷冻进行其他测定。 为了获得理想的结果，需要紫外线透明的板或比色皿。 由于该测定法对Pi的敏感性很高，因此使用无Pi的实验室器具极为重要。

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ADP标准品和测试样品的布局。 SD = ADP标准（SD1-SD7，0.05至30 uM）; BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1.根据表1和表2提供的布局，准备磷酸盐标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL工作溶液添加到磷酸盐标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总测定体积为100 µL /孔。 彻底混合试剂。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在室温下孵育30分钟。

4.用酶标仪或分光光度计在360 nm处监测吸光度。 注意：对于需要总体积大于100 µL的比色杯分析，在测量吸收之前，应按比例将样品和分析试剂的体积相乘。

参考文献

Sacrificial crystal templating of hyaluronic acid-based hydrogels
Authors: Richelle C Thomas, Paul E Chung, Shan P Modi, John G Hardy, Christine E Schmidt
Journal: European Polymer Journal (2016)

Osteogenic cell cultures cannot utilize exogenous sources of synthetic polyphosphate for mineralization
Authors: Marianne B Ariganello, Sidney Omelon, Fabio Variola, Rima M Wazen, Pierre Moffatt, Antonio Nanci
Journal: Journal of cellular biochemistry (2014): 2089–2102