无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液

ThelioKeep^®

ThelioKeep是一种不含DMSO和血清蛋白，适用于上皮、内皮组织以及神经组织的冷藏保存液。

※ 本产品仅供研究使用。研究以外不可使用。

◆特点•优势

●　维持物理性质上较为脆弱的组织膜形态，保持增殖功能的同时可冷藏（4~10°C）保存1~2周。

●　在绿茶茶多酚（表没食子儿茶素没食子酸酯：EGCG）的保护作用下，可保存薄且脆弱的组织。

●　除上皮、内皮组织之外，也可用于神经组织使用。末梢神经可维持电生理功能。

●　适用于包含人、小鼠、大鼠在内的大多数哺乳动物组织。

●　保存后的组织经过清洗，可用于使用了适当培养基的各种实验。

●　不含血清以及蛋白成分，DMSO、甘油等防腐剂。

●　已通过无菌测试确认本产品不含细菌、真菌、支原体。

●　本产品由液体、固体防腐剂各一支组成套装，未开封（制备前）的状态下可在4°C下保存约1年。

●　成分：无机离子，D-葡萄糖，氨基酸，pH调节剂（液体防腐剂），表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG），

●　酚红（固体防腐剂）

◆应用实例1

比较人角膜内皮组织的形态以及增殖速度

用本产品（右）和其他公司产品（左）保存人角膜内皮组织2周（4°C）后比较其形态（左图）。使用本产品保存的组织可维持六角形的细胞膜形态。相反，使用其他公司产品保存的组织的细胞膜形态已完全消失。另外，已确认使用本产品保存的组织以约2倍的速度增殖（右图）。

比较神经组织的形态以及电导率

用本产品（右）或其他公司产品（左）保存大鼠末梢神经组织2周（4°C）后，移植到另一只大鼠，再经过24周后取出，使用透射电子显微镜观察形态（左图）与运动神经传导速度（MCV：右图）。新鲜组织表示未经保存的神经移植后的数值。

假设移植前神经的MCV值为100%。可确认使用本产品保存的组织在移植24周后仍然保持形态不萎缩并保持完好的功能。

图像中柱状长度为20 μm。

参考文献

Ikeguchi, R., et al., Experimental Neurology, 184, 688～696 (2003).

Ikeguchi, R., et al., Transplantation, 79, 688～695 (2005).

◆应用实例2

使用本产品保存的人培养骨膜片进行二次培养时的增殖情况

将培养了21天的人培养骨膜片在4°C下保存2天后，再次进行培养。

川濑老师（右）与研究室的成员

数据提供：新泻大学牙科系 牙科基础移植、再生医学领域 川濑知之老师

参考文献：Kamiya, M., et al., Biopreservation and Biobanking, 10 (3), 245～252 (2012)

◆应用实例3

人来源培养口腔黏膜上皮细胞片保存前后的评估

（1）培养上皮细胞片的回收试验（2）总细胞数

（3）培养上皮细胞切片中的细胞活率

（4）HE染色图

保存前

保存后

保存后

●　细胞：人来源培养口腔黏膜细胞片

●　培养皿： 35 mm UpCell^（R）（CellSeed株式会社）

●　培养条件：37°C ，5％CO_2， 14天

●　保存条件：4°C，7天

将人来源口腔粘膜上皮细胞放在35 mm UpCell^（R）中与NIH-3T3共培养14天，制备培养上皮细胞片。

然后，将培养上皮细胞片浸于各种保存液（PBS、ThelioKeep^（R））中，在4°C下静置7天。

保存后的第7天，进行（1）回收细胞片；（2）总细胞数；（3）细胞活率检测（使用流式细胞仪分析7-AAD染色）以及（4）HE染色，比较保存前后的状态。

香取老师（第一列右）、林老师（中间）与研究室的成员

数据提供：大阪大学 研究生院 医学研究科 脑神经感应外科 眼科 香取良祐老师、林龙平老师

◆操作方法概要

1. 在无菌条件下向附带的含有防腐剂（EGCG）的微管中加入约0.5 mL本产品并溶解，溶解后将所有溶液倒回

1. ThelioKeep的瓶中并搅拌。

2. 确认防腐剂完全溶解后，向离心管等容器加入数mL溶液，在4~10°C下冷却。

3. 将从实验动物中切除的上皮、内皮组织浸没于上一步的溶液中，盖好盖子在4°C下保存。

4. 使用预冷PBS轻轻清洗上一步保存的组织后，转移至实验用培养基中，在组织存活状态下用于实验。

※ 所制备溶液请尽快使用。分装时可在-20°C下保存1~2周。

※ 培养时，请提前将保存液恢复到正常生理活性温度（如37°C）。

※ 在制备切片等组织标本时，请快速将其固定。

※ 提取组织内的物质时，请提前在预冷的PBS中仔细清洗。