Capturem™ Trypsin （质谱级）酶试剂盒Takara

发表于2023年9月26日由上海金畔生物科技有限公司

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Capturem^™ Trypsin （质谱级）
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635737	Capturem^™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)	1 × 96-Well Plate	￥6,030
Clontech	635736	Capturem^™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)	4 × 96-Well Plates	￥21,610
Clontech	635739	Capturem^™ Trypsin Activation Buffer	50 ml	￥629
Clontech	635740	Capturem^™ Trypsin Miniprep Kit (Mass Spectrometry Grade)	20 Rxns	￥3,213

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■ 产品简介

Capturem^™ Trypsin能在室温下快速、高效并且完整的酶解消化蛋白质用于质谱分析，与需要4小时甚至过夜的传统蛋白质酶解消化操作流程相比，可以使蛋白质组学分析流程更加连贯、流畅。本制品基于新型Capturem^™ 膜技术，膜上固定trypsin（猪胰腺来源，且经过还原甲基化修饰，稳定性和抗自溶能力都显著增强），有小型离心柱以及96孔板的形式可供选择，能在短短几分钟内完成独立或高通量样品的蛋白质酶解消化，不需要溶液法的长时间孵育（长时间孵育易造成蛋白质的氧化或非特异性修饰，最终导致鉴定困难并且重复性低），并且自溶片段很少，效率更高。此外，使用小离心柱或plate的方法操作速度快，更能避免溶液法易出现的过度酶解消化的情况。每个小离心柱或96 well plate的单孔最大上样量为80 μg的蛋白质或25 μg的抗体。

■ 产品特点

·操作快速，步骤简单，Miniprep产品4 min内即可在室温下酶解蛋白质样品，无需过夜处理
·比溶液法效率更高，酶解更彻底，且不易出现过度酶解
·Trypsin经过修饰稳定性更高，样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低
·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定
·有独立的小型离心柱和高通量的96 well plate形式可供选择，满足不同的实验需求

* 4 × 96-Well Plates包装的产品不包含Activation Buffer，需要搭配购买635739或自行配制，每个plate需要搭配使用25 ml Activation Buffer

■ 操作流程

Capturem^™ Trypsin消化流程。 在用活化buffer激活Capturem^™ Trypsin后，将天然状态或经变性处理的样品溶液（50-800 μl）加入孔中，通过2 min的离心使样品过柱。在柱上进行胰蛋白酶消化，随后肽片段再次进行2 min的离心洗脱。与传统溶液法需要过夜消化的时长相比，Capturem^™ Trypsin进行完全的抗体消化仅需3-6 min。*本流程不包括变性/还原/烷基化的时间。

■ 产品应用

·蛋白质鉴定
·蛋白质组学分析
·质谱样品制备
·抗体鉴定

■ 实验例

在天然条件下用Capturem^™ Trypsin消化80 μg的肌红蛋白（Apo）的HPLC图谱。由图可见，Capturem^™ Trypsin酶解消化的产物具有很高的重复性。

对使用Capturem^™ Trypsin消化的SILuLite进行定量。Trypsin离心法消化SILuLite可产生ng级别（1, 10, 50 ng）的可检测替代肽段。特异性肽段的AUCs具有线性相关性。

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镍离子快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara

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镍离子快速纯化柱—Capturem^™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635710	Capturem^™ His-Tagged Purification Miniprep Kit	20 Purifications	￥2,545 ￥2,036
Clontech	635713	Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit	6 Purifications	￥3,316 ￥2,653
Clontech	635715	Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns	25 Columns	￥7,311
Clontech	635719	Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns	50 Columns	￥13,160
Clontech	635714	Capturem^™ His-Tagged Purification 96	96 well	￥4,691 ￥3,753
Clontech	635724	Capturem^™ His-Tag Large Volume	4 Purifications	￥5,462 ￥4,370
Clontech	635730	Capturem^™ His-Tagged Purification 24-Well Plate	24 well	￥4,888 ￥3,910

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 产品简介

Capturem^™ His-Tagged Purification Kit是以镍离子为配基，结合Capturem^™ 新型膜技术开发的用于His标签蛋白质快速分离纯化的产品。与传统的固定化金属离子树脂相比，Capturem^™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对His标签蛋白质的结合能力≥75 mg/cm³。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，比传统树脂的应用范围更加灵活广泛。有小量（miniprep）、中量（maxiprep）、大量（large volume）以及高通量（24 well和96 well）五种规格可供选择。

■ 产品特点

· 室温下操作，可应用于哺乳动物细胞和细菌样品
· 操作简单快速，蛋白质小量纯化5 min即可完成，大量纯化也仅需15-30 min
· 操作时间短，有利于蛋白质样品保持活性
· 柱床体积小、带入污染少，与传统的镍离子树脂相比，产物纯度更高
· 一次性使用纯化柱，避免样品之间交叉污染
· 除了部分产品中提供的xTractor Buffer以外，还兼容其他的裂解buffer，通用性强
· 兼容多种添加剂（如β-ME、EDTA、DTT、甘油、TCEP等），可在变性或非变性条件下进行纯化

■ Capturem^™ 膜原理

■ 产品主要参数

*收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。

上图A图红色方框部分为Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units（白底的瓶顶装置），B图红色方框部分为滤瓶螺纹接头 (可用于33-45 mm直径的瓶口)。图A为纯化装置直接与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图C为纯化装置通过螺纹接头连接了45 mm的滤瓶。图D为纯化装置与50 ml的tube直接连接。

上图为使用Capturem^™ His-Tagged Purification Large Volume Unit从细菌裂解液中纯化过表达的6×His-GFPuv的演示示例。图A.将纯化装置与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图B.将含有目的蛋白质的澄清裂解液上样。图C.膜在上样和洗涤操作后结合了目的蛋白质，因此呈现出绿色荧光蛋白（GFP）特征性的黄绿色，在洗脱操作之后恢复为初始的白色。图D.目的蛋白质6×His-GFPuv被洗脱进50 ml的收集tube中。

■ 操作流程

■ 实验例

实验例1

Capturem纯化柱对不同浓度的多种类添加试剂有良好的兼容性。上图为使用miniprep kit对不同种类不同浓度添加剂的检测结果，操作按照产品说明书进行。每项实验的样品、平衡液、洗涤液及洗脱液中均有所要检测的添加试剂，样品最终进行两次300 μl的洗脱操作。

兼容试剂一览表

Reagent	Compatibility*
MOPS	200 mM
HEPES	200 mM
Tris	200 mM
EDTA	10 mM
Beta-mercaptoethanol	30 mM
DTT	10 mM
TCEP	5 mM
Guanidine-HCl	6 M
Urea	8 M
Nonionic detergent (Triton X-100)	2%
Nonionic detergent (Tween 20)	2%
Anionic detergent (SDS)	1%
Arginine	500 mM
Glycine	100 mM
Histidine	20 mM
Sodium chloride	2 M
Imidazole	40 mM
Glycerol	10%

* 表中数据为本产品经测试能够兼容的试剂的最高浓度。

实验例2

Capturem纯化柱在变性条件下纯化效果良好。使用miniprep kit按照产品说明书进行操作。根据变性和非变性条件添加适当的buffer，每个纯化柱上样均为800 μl表达6×his-GFPuv的细胞裂解上清液，样品中按需要添加8 M尿素或6 M盐酸胍。

实验例3

Capturem纯化柱纯化哺乳动物细胞表达的6×His标签蛋白质。图A和B，将编码6×his-tagged MAPK1或 6×his-tagged ADRB2的质粒转染293T细胞进行培养。细胞裂解后取澄清的上清液上样，然后用400 μl wash buffer洗涤，再使用300 μl elution buffer洗脱。将各步骤组分通过4-20%的聚丙烯凝胶电泳检测，并做硝酸纤维素膜印记检测。图A左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图A右图，用MAPK1特异性抗体做免疫印迹实验可检测到对应条带。图B左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图B右图，用ADRB2特异性抗体做免疫印迹实验可检测到产物中富集的ADRB2。图C，使用编码DsRed-Express2和6×his-tagged Metridia luciferase的双顺反子质粒转染293T细胞，在10 cm的培养皿中培养。取细胞培养上清液用maxiprep柱纯化，6 ml wash buffer洗涤，1 ml elution buffer洗脱。所有离心操作的参数为2,000×g离心5 min，最后通过Ready-to-Glow^™ 对各组分中的荧光素酶的活性进行分析。

■ 各种试剂盒组成

· Capturem^™ His-Tagged Purification Miniprep Kit （635710）

Capturem His-Tagged Purification Miniprep Column	20 个
xTractor Buffer	15 ml × 2
Wash Buffer	10 ml
Elution Buffer	10 ml

· Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit （635713）

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column	6 个
Capturem Maxiprep Filters	6 个
xTractor Buffer	200 ml
Wash Buffer	40 ml
Elution Buffer	15 ml

· Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635715）*

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column

25 个

· Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635719）*

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column

50 个

· Capturem^™ His-Tagged Purification 96（635714）*

Capturem His-Tagged Purification 96-Well Plate

1 块

· Capturem^™ His-Tagged Purification Large Volume（635724）*

Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit	4 个（每个盒子中2个）
Bottle Thread Adaptor	1 个

· Capturem^™ His-Tagged Purification 24-Well Plate（635730）*

Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate

1 块

*注：Capturem^™ His-Tagged Purification 24-well、96-well、Maxiprep Columns以及Large Volume中不含buffer，请使用以下组分的buffer：

缓冲液	组成
Lysis Buffer	推荐使用xTractor Buffer（Code No. 635625），也可使用其他标准的裂解buffer
Wash Buffer	150 mM NaCl,20 mM Na3PO4,pH7.6
Elution Buffer	500 mM NaCl,20 mM Na3PO4,500 mM imidazole, pH7.6

参考文献

[1] Stephanie S. Pavlovich, Sean P. Lovett,Galina Koroleva, et al. The Egyptian Rousette Genome Reveals Unexpected Features of Bat Antiviral Immunity[J]. Cell, 2018, 173(5):1098–1100.
[2] Sandra Luz Martínez-Hernández, Daniel Cervantes-García, Martín Munoz-Ortega, et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEDIII) via the Pichia pastoris system[J]. Biotechnology Letters, 2017, 39 (8):1149-1157.
[3] Min Kong, Fengjuan Wang, Liuying Tian, et al. Functional identification of glutamate cysteine ligase and glutathione synthetase in the marine yeast Rhodosporidium diobovatum[J]. Science of Nature, 2018, 105 (1-2):4.
[4] Ariana Kariminejada, Mohammadreza Barzgarb, Bita Bozorgmehra, et al. Novel mutations and a severe neurological phenotype in Sjogren-Larsson syndrome patients from Iran[J]. European Journal of Medical Genetics, 2018, 61 (3):139.
[5] Naho Mugita, Takayuki Nambu, Kazuya Takahashi, et al. Proteases, actinidin, papain and trypsin reduce oral biofilm on the tongue in elderly subjects and in vitro[J]. Archives of Oral Biology, 2017, 82:233-240.
[6] Xiao-Xiao Cheng, Li-Hong Zhao, Steven J.Klosterman, et al. The endochitinase VDECH from Verticillium dahliae inhibits spore germination and activates plant defense responses[J]. Plant Science, 2017, 259:12.

实验操作视频：

https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep

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Capturem™ Trypsin酶试剂盒Takara

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Capturem^™ Trypsin
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635722	Capturem Trypsin	20 rxns	￥3,060

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■ 产品简介

蛋白质质谱分析前的样品消化步骤，通常需要4个小时甚至过夜，如果使用Capturem^™ Trypsin 或 Capturem^™ Pepsin，可在室温下快速，高效和完全的消化蛋白质，从而使蛋白质组学分析流程更加连贯。这两款产品是一次性小型离心柱的形式，应用新型膜技术，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短几分钟内即可高效、完全地酶解蛋白质样品，与传统的溶液法过夜处理相比，时间更短、效率更高、重复性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免发生过度消化。

■ 快速、简单的操作流程

Capturem^™ Trypsin 和 Capturem^™ Pepsin包含小型离心柱和活化buffer，操作流程简单、快速，只需要加入200 μl活化buffer离心1 min，然后加入蛋白质样品再离心1 min，即可洗脱获得可用于下游分析的肽段。

■ 产品特点

·操作快速，2 min-3 min内即可酶解蛋白质样品，无需过夜处理
·比溶液法效率更高，酶解更彻底
·样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低
·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定

■ 应用

·蛋白质鉴定
·蛋白质组学分析
·质谱样品制备
·抗体鉴定

■ 实验例

使用Capturem^™ Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分（图A），然后再使用CapturemTrypsin对每个组分单独酶解，并使用LC/MS-MS分析，每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出，如B图所示。

使用Capturem^™ Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上图为使用RP-HPLC分析CapturemTrypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用CapturemTrypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用CapturemTrypsin酶解的非常彻底。

使用Capturem^™ Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用CapturemTrypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用CapturemTrypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。

Capturem^™ Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗体样品被变性和还原。使用附带的活化buffer初次活化柱子后，将还原处理后的抗体样品溶液（50-800 μl）加入离心柱中，离心1分钟。在这个过程中，柱上发生胃蛋白酶消化，随后再一次离心洗脱即可获得肽片段，加入NaOH中和洗脱的肽片段，即可用于下游分析。

使用Capturem^™ Pepsin消化不同的小鼠抗体同种型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取
100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃处理15 min进行变性操作，然后用5%甲酸buffer稀释。使用Capturem^™ Pepsin对稀释的样品进行消化，通过SDS-PAGE对消化和未消化的样品（各取4 μg）进行检测，如上图所示。

不同批次的Capturem^™ Pepsin消化产物HPLC图谱比较。使用5%的甲酸稀释50 μg的Apo，选择3个不同批次的Capturem^™ Pepsin对其进行消化，HPLC结果显示三组消化产物具有相同的片段，说明Capturem^™ Pepsin具有良好的重复性。

Capturem^™ Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行消化，分别是Capturem^™ Pepsin，pepsin溶液法孵育4小时，pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出，使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多，说明产生了过度消化，而使用Capturem^™ Pepsin则没有这个问题。

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Capturem™ Pepsin酶试剂盒Takara

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Capturem^™ Pepsin
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635728	Capturem^™ Pepsin	20 Rxns	3,213（暂不销售）

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■ 产品简介

■ 快速、简单的操作流程

■ 产品特点

■ 应用

·蛋白质鉴定
·蛋白质组学分析
·质谱样品制备
·抗体鉴定

■ 实验例

使用Capturem^™ Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分（图A），然后再使用Capturem^™ Trypsin对每个组分单独酶解，并使用LC/MS-MS分析，每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出，如B图所示。

使用Capturem^™ Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上图为使用RP-HPLC分析Capturem^™ Trypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem^™ Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem^™ Trypsin酶解的非常彻底。

使用Capturem^™ Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem^™ Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem^™ Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem^™ Trypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。

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Streptavidin标记物快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara

发表于2023年9月25日由上海金畔生物科技有限公司

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Streptavidin标记物快速纯化柱—Capturem^™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635733	Capturem^™ Streptavidin Miniprep Columns	20 Columns	￥4,638
Clontech	635734	Capturem^™ Streptavidin 96-Well Plate	1 × 96 well plate	￥8,935

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■ 产品简介

Capturem^™ Streptavidin——利用链霉亲和素快速富集和纯化生物素化物质。
链霉亲和素是一种来源于链霉菌Streptomyces avidinii的细胞壁蛋白质，与生物素有非常强的亲和力，这一互作特性在生命科学领域被广泛应用于富集等相关研究。Capturem^™ Streptavidin mini 纯化柱和96-well 纯化板是将链霉亲和素固定在高容量的Capturem膜上，从而在室温条件下就可以对生物素化的靶标实现快速、高质量的纯化和富集，整个操作从上样到洗脱仅需5～15分钟。此外，还可以利用Capturem^™ Streptavidin来捕获或pull down靶标分子或复合物。

■ 产品特点

· 简单、快速的操作流程：室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，96-well板仅需15 min
· 产物浓度高：少量的洗脱液即可实现高浓度洗脱
· 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了样品聚集、失活，或者样品中复合物解离
· 高重复性：每个纯化柱的纯化结果有高度的一致性
· 一次性使用：新型膜技术搭配一次性离心柱有效降低了污染和残留的风险

■ 应用

· 生物素化蛋白质的纯化或富集
· Pull down与生物素化的配体相结合的蛋白质或oligo

Capturem Streptavidin对不同样品的载量和操作时间

	生物素标记的抗体	生物素标记的BSA	生物素标记的ssDNA	游离的生物素	纯化时间
Capturem Streptavidin mini纯化柱和96-well 纯化板	20-40 μg	>15 μg	1,000-1,500 ng	>4,000 pmol	15 分钟

实验例

例1

使用Capturem Streptavidin连续三次捕获抗体。图A–C.首先将含48 μg生物素化兔IgG的Binding Buffer上样至平衡好的Capturem Streptavidin spin column中，这时32.0 ± 1.4 μg (图B)的抗体被成功固定在膜上。然后洗涤一次，再将使用Binding Buffer稀释的含20%小鼠血清且同时加入spiked-in靶抗体（约100 μg山羊抗兔抗体）的杂交瘤培养基加入到Capturem Streptavidin spin column中，分别使用Binding Buffer和PBS先后洗涤两次，最后使用1.0 M甘氨酸洗脱3次，从生物素化的捕捉抗体上洗脱获得高纯度的靶抗体，收量约为42 ± 5 μg (图C)。

例2

Capturem Streptavidin 96-well纯化板具有高度重复性。分别对生物素化oligo（图A）和生物素化BSA（图B）进行8次技术重复上样，并使用离心的方法进行靶标捕获。通过测定样品上样前后的OD值来对结合的分子进行定量。捕获操作按照标准的流程进行，15 min之内完成。

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protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara

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protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem^™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635717	Capturem^™ Protein A Miniprep	12 Columns	￥2,545 2,036(终卖)
Clontech	635720	Capturem^™ Protein A Maxiprep	6 Columns	￥3,803 ￥3,042
Clontech	635731	Capturem^™ Protein A 24-Well Plate	1 × 24-well plate	￥5,777 ￥4,622
Clontech	635743	Capturem^™ Protein A 24-Well Plate – HC	1 × 24-well plate	￥7,788
Clontech	635746	Capturem^™ Protein A Buffer	100 ml	￥934 ￥747

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日 *635717从即日起停止销售，推荐使用中等规格纯化柱635720进行替代。

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■ 产品简介

Capturem^™ Protein A 系列产品是基于Protein A^* 原理，结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱，特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem^™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对抗体的结合能力≥75 mg/cm³。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。产品有小量（miniprep）、中量（maxiprep）以及高通量（24 well和96 well）四种规格可供选择。

*Protein A是金黄色葡萄球菌的表面蛋白质，对许多物种（如人、大小鼠）的IgG型抗体的Fc片段有很强的亲和力。ProteinA与抗体的结合能力根据抗体同种型（isotype）的不同而不同。

■ 产品特点

· 快速方便：从上样到洗脱，室温下操作小量纯化仅需5 min，无需孵育
· 一次性使用：有效减少样品间的交叉污染，受protein A性质影响，纯化抗体的产量因物种
和抗体同种型的不同而有所差别
· 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了抗体降解及失活，保障了下游应用的成功率
· 高纯度、高浓度：柱床体积小，带入污染少，可实现大体积洗涤，小体积洗脱
· 高灵活性：可从广泛来源的样品中纯化抗体，如动物血清、腹水、细胞培养基等

注：Capturem^™ Protein A 24-Well Plate-HC（Code No. 635743）经过优化，与旧版本产品（Code No. 635731）相比，收量更高。

■ Capturem^™ 膜原理

■ 产品主要参数

* 注：Maxiprep需要50 ml tube使用的离心机，24 well、96 well 需要24孔板、96孔板使用的离心机或真空过滤装置

Capturem Protein A Miniprep与不同物种来源的抗体的结合能力

物种	亲和力 (μg/column)*
Goat	100-150
Horse	>150
Human	>150
Mouse	100-150
Rabbit	50-100
Rat	>150
Sheep	>150

*使用磷酸盐结合缓冲液(pH8.0)对不同物种来源的总血清进行稀释然后经Capturem Protein A Miniprep 纯化，产物的量通过测定其在280 nm处的吸光度进行计算。

■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性

Species	Antibody subtype	Protein A	Protein G	Protein A/G
Human	Total lgG	+++	+++	+++
	lgG1	+++	+++	+++
	lgG2	+++	+++	+++
	lgG3	+	+++	+++
	lgG4	+++	+++	+++
	lgM	+	–	+
	lgD	–	–	–
	lgA1	+	–	+
	lgA2	+	–	+
	Fab	+	+	+
	scFv	+	–	+
Mouse	Total lgG	+++	+++	+++
	lgM	–	–	–
	lgG1	+	++	++
	lgG2a	+++	+++	+++
	lgG2b	+++	+++	+++
	lgG3	+++	+++	+++
Rat	Total lgG	+	++	++
	lgG1	+	++	++
	lgG2a	–	+++	+++
	lgG2b	–	+	+
	lgG2c	+++	+++	+++
Rabbit	Total lgG	+++	+++	+++

+++ strong binding
++ medium binding
+ weak binding
– no binding

■ 操作流程

■ 产品性能

■ 实验例

从杂交瘤培养上清液中筛选Cas9的单克隆抗体。所有克隆均是小鼠IgG1同种型，所以使用高盐法进行纯化。选择Capturem^™ Protein A Maxiprep，使用6 ml buffer (配方10 mM sodium borate, pH 8.9, 3 M NaCl)进行平衡，2,000 x g 离心3 min。向抗体上清原液中加入1/10体积的1 M sodium borate（pH8.9）将NaCl浓度调节至3.3 M。取20 ml上清液上样，2,000 x g 离心3 min，流出液重复上样一次，尽可能多的结合抗体。然后使用10 ml wash buffer（配方3 M NaCl, 10 mM sodium borate, pH8.9）洗涤，最后用0.5 ml的elution buffer(配方100 mM glycine, pH3.0)洗脱，收集管中需预先添加有50 μl 的中性buffer（配方1 M tris, pH8.5），使用少量elution buffer洗脱以便获得高浓度抗体产物。图A，SDS-PAGE 凝胶电泳检测纯化产物。图B，将Cas9表达量低(lane #1)和高(lane #2)的细胞裂解液分别进行凝胶电泳并转膜，再使用Capturem^™ Protein A Maxiprep纯化得到的抗体对其进行免疫印迹反应。图C，使用筛选到的抗体，对不同比例稀释(从左至右: 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng, 1.25 ng, 0.625 ng)的Cas9 蛋白质进行免疫印迹反应

实验操作视频：

https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep

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页面更新：2021-07-06 13:42:46

protein G原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara

发表于2023年9月24日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

protein G原理的抗体快速纯化柱—Capturem^™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635725	Capturem^™ Protein G Miniprep	10 Columns	￥2,545 ￥2,036
Clontech	635726	Capturem^™ Protein G 96-Well Plate	1 × 96-well plate	￥5,499
Clontech	635727	Capturem^™ Protein G Maxiprep	6 Columns	￥3,803
Clontech	635732	Capturem^™ Protein G 24-Well Plate	1 × 24-well plate	￥5,777 ￥4,622
Clontech	635745	Capturem^™ Protein G 24-Well Plate – HC	1 × 24-well plate	￥7,788
Clontech	635744	Capturem^™ Protein G 24-Well Plate – HC	4 × 24-well plate	￥26,358

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 产品简介

Capturem^™ Protein G 系列产品是基于Protein G^* 原理，结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱，特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem^™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对抗体的结合能力≥75 mg/cm³。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。产品有小量（miniprep）、中量（maxiprep）以及高通量（24 well、96 well）四种规格可供选择。

*Protein G是来源于Staphylococcus aureus的细胞壁蛋白质，与许多物种（人、大小鼠等）的单克隆或多克隆IgG型抗体分子的Fc段有高亲和性。本制品使用的是重组protein G，去掉了白蛋白结合结构域、细胞壁和细胞膜结合结构域，从而提高了与抗体Fc片段的结合特异性。

■ 产品特点

· 快速方便：从上样到洗脱，室温下操作小量纯化仅需5 min，无需上样后孵育
· 结合力强：膜与抗体的结合能力≥75 mg/cm³
· 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了抗体降解及失活，保障了下游应用的成功率
· 高纯度、高浓度：柱床体积小，带入污染少，可实现大体积洗涤，小体积洗脱
· 高灵活性：可从广泛来源的样品中纯化多种类型的抗体，如动物血清、腹水、细胞培养基等
· 一次性使用：有效减少样品间的交叉污染，单孔的纯化产量因样品类型、物种以及抗体同种型的不同而有所差别。

注：Capturem^™ Protein G 24-Well Plate-HC（Code No. 635745/635744）经过优化，与旧版本产品（Code No. 635732）相比，收量更高

■ Capturem^™ 膜原理

■ 操作流程

■ 产品主要参数

	Capturem^™ Protein G Miniprep	Capturem^™ Protein G Maxiprep	Capturem^™Protein G 24-Well Plate-HC	Capturem^™Protein G 96-Well Plate
包装量	10次	6次	24 well	96 well
样品上样量^*1	100～800 μl	2～20 ml	0.5～4.3 ml/well	200～1,000 μl/well
操作时长	5 min	15 min	15 min	15 min
收量^*2	60 μg protein/column	1.2 mg protein/column	600 μg^*3 protein/well	60 μg protein/well
洗脱液使用量	100-300 μl	0.5-1.5 ml	1.8 ml	100-300 μl

*1. 样品与binding buffer的稀释比例为1:2～1:15。建议杂交瘤样品1:2～1:4稀释，血清样品1:15稀释。

*2. 收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。

*3. 这是在HEK293细胞上清液中添加1 mg小鼠IgG1时获得的收量。

■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性

Species	Antibody subtype	Protein A	Protein G	Protein A/G
Human	Total lgG	+++	+++	+++
	lgG1	+++	+++	+++
	lgG2	+++	+++	+++
	lgG3	+	+++	+++
	lgG4	+++	+++	+++
	lgM	+	–	+
	lgD	–	–	–
	lgA1	+	–	+
	lgA2	+	–	+
	Fab	+	+	+
	scFv	+	–	+
Mouse	Total lgG	+++	+++	+++
	lgM	–	–	–
	lgG1	+	++	++
	lgG2a	+++	+++	+++
	lgG2b	+++	+++	+++
	lgG3	+++	+++	+++
Rat	Total lgG	+	++	++
	lgG1	+	++	++
	lgG2a	–	+++	+++
	lgG2b	–	+	+
	lgG2c	+++	+++	+++
Rabbit	Total lgG	+++	+++	+++

+++ strong binding
++ medium binding
+ weak binding
– no binding

■ 各试剂盒组成

Capturem^™ Protein G Miniprep（635725）

Miniprep Column 10个

Capturem^™ Protein G Maxiprep（635727）

Maxiprep Column 6个

Capturem^™ Protein G 96-Well Plate（635726）

96 well plate 1块

Capturem^™ Protein G 24-Well Plate（635732）

24 well plate 1块

Capturem^™ Protein G 24-Well Plate-HC（635745）

24 well plate 1块

Capturem^™ Protein G 24-Well Plate-HC（635744）

24 well plate 4块

【注】由于Capturem Protein G系列产品不包含buffer和收集管，请按以下建议配制buffer和准备材料。

1. 纯化buffer

本制品可搭配使用磷酸盐、柠檬酸盐缓冲液等抗体纯化常用试剂。标准的buffer配方请参考说明书中内容，需要注意的是，buffer的盐浓度和pH值对纯化抗体的收量和纯度的影响会因抗体的同种型不同而不同。

2. 收集tube/plate

使用Miniprep产品进行1次纯化，需要额外准备4个2 ml tube

使用Maxiprep产品进行1次纯化，需要额外准备4个50 ml tube

使用96 well产品进行1次纯化，需要额外准备4个96 well collection plate

使用24 well产品进行1次纯化，需要额外准备4个24 well collection plate

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页面更新：2020-05-29 08:59:04

Capturem™ IP & Co-IP Kit酶试剂盒Takara

发表于2023年9月24日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

Capturem^™ IP & Co-IP Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635721	Capturem^™ IP & Co-IP Kit	12 Rxns	￥2,545 ￥2,036

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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基于Protein A原理的快速免疫沉淀产品
Capturem IP & Co-IP Kit

IP和Co-IP是研究蛋白质与大分子（例如其他蛋白质）之间相互作用的很有意义的实验手段。Capturem IP & Co-IP Kit应用于IP和Co-IP实验，为快速提取独立蛋白质或提取蛋白质-蛋白质复合物提供了完整、易用性的解决方案。它是一款基于新型膜技术的高性能“抗体-蛋白质”复合物纯化试剂盒，其中包含实验必备试剂，同时也提供结合、洗涤和洗脱buffer。实验从样品上样至洗脱完成仅需5min。

■ 产品特点

· 简单和快速的实验流程：抗体与样品孵育，之后在室温下进行的纯化仅需5 min
· 完整的解决方案：kit中包含用于IP和Co-IP实验的Capturem Protein A纯化柱和buffer，
且均经过优化
· 高浓度：洗脱液体积小，产物浓度高
· 高质量：样品在膜上停留时间短，避免复合物的凝集、解体或失活
· 通用性强：兼容宽泛的IP buffer和实验条件
· 一次性使用：基于新型膜技术的一次性离心柱，能避免污染

■ 实验原理

Capturem Protein A 技术. 每个Capturem Protein A 纯化柱都含有高性能的改造过的Protein A 膜，表面积更大，与普通树脂相比，单位ml介质对抗体的结合能力更强。

■ 快速纯化流程

每个柱子最多可加入800 μl包含抗原抗体复合物的样品，然后用100 μl wash buffer洗涤， 30-50 μl elution buffer洗脱。每个步骤之间仅需1,000×g离心1 min，整个操作可在15min内完成。

■ 与主流竞争产品提取流程对比

与主流竞争产品相比，使用Capturem IP & Co-IP Kit能够显著缩短操作时间。

■ 实验例

实验例1

与在本实验中，将NIH3T3细胞裂解液与1 μg蛋白磷酸酶2A (PP2A) B亚基抗体进行孵育，然后上样至Capturem Protein A纯化柱。用300 μl洗涤buffer洗涤后用100 μl洗脱buffer洗脱，通过凝胶电泳分离各组分，再转移到PVDF膜上，用抗PP2A B抗体探测。结果显示在洗脱液中获得了很强的PP2A B蛋白质检测信号 (52 kDa)。
注：本实验例所使用的buffer与Capturem IP & Co-IP Kit中提供的buffer不同 (参见“实验方法：使用Capturem Protein A 纯化柱进行免疫沉淀实验”)。

实验方法：使用Capturem Protein A 纯化柱进行免疫沉淀实验

将1 μg的PP2A B亚基兔多抗与NIH3T3细胞裂解液在室温下孵育10 min，同时不断颠倒混合。使用400 μl的平衡/上样 buffer（1.0 M glycine, 2 M NaCl, pH9.0）对Capturem Protein A纯化柱进行平衡，1,000×g离心1 min。将抗体-裂解复合物用裂解buffer稀释至400 μl然后上样，30×g离心4 min，再用100 μl的wash buffer (PBS) 洗涤，1,000×g 离心1 min。最后使用100 μl的elution buffer (0.1 M glycine, pH2.5)进行洗脱，收集管中预先装有10 μl的中和buffer (1 M tris，pH8.5)，1,000×g离心1 min。对各组分进行凝胶电泳分离，转移到PVDF膜上，使用anti-PP2A B兔源多克隆抗体 (Cell Signaling) 进行检测。
注：实验中使用的buffer是Capturem IP & Co-IP kit中优化buffer的早期配方。

实验例2

Capturem Protein A 产品具有出色的灵活性，能兼容广泛的实验条件，可以与其他试剂盒中的IP buffer搭配使用。为了测试该性能，将NIH3T3细胞裂解液（100 μl，含有130 μg总蛋白）与0.6 μg蛋白磷酸酶2A (PP2A) B亚基抗体分别在IP kit A，IP kit B或独立的裂解Buffer C中于4℃孵育1小时，总体积为400 μl。然后分别上样至使用对应IP buffer平衡过的Capturem Protein A纯化柱，最终使用30 μl of elution buffer洗脱一次（上图. Capturem Protein A columns A1，B1，C1），为了确保充分回收抗体复合物，重复洗脱一次（上图. Capturem Protein A columns A2，B2，C2）。同时进行的还有完全使用IP kit A和IP kit B的平行实验，按照各自的实验说明进行操作（上图. IP Kit A，IP Kit B），上样量及抗体用量与Capturem组相同。
结果显示，在原始样品（OS）中存在的组分，通过免疫沉淀操作被显著的富集了。Capturem Protein A纯化柱的结果显示，在第一次洗脱时，无论使用何种IP缓冲液，PP2A B蛋白信号都很强，用低pH甘氨酸洗脱缓冲液（A1，C1）的洗脱水平最高。
注：本实验例所使用的buffer与Capturem IP & Co-IP Kit中提供的buffer不同（参见“实验方法：使用Capturem Protein A 纯化柱进行免疫沉淀实验”）。

实验方法：测定Capturem Protein A纯化柱与不同buffer的兼容性

将NIH3T3细胞裂解液（100 μl，含有130 μg 总蛋白质）与0.6 μg的PP2A B亚基抗体在Active Motif (A) 或Thermo Fisher Scientific (B) IP试剂盒中提供的IP buffer或者是Promega 的裂解buffer (C)中进行孵育，总体积为400 μl，于4℃孵育1 h，然后上样至使用100 μl 对应IP buffer平衡过的Capturem Protein A纯化柱，1,000×g离心1 min，100 μl wash buffer洗涤，1,000×g离心1 min，然后使用30 μl的低pH buffer（0.1 M glycine，pH2.5，A和C）或Thermo Fisher Scientific的低pH elution buffer（B）于1,000×g的条件下离心洗脱，再重复洗脱一次，以确保完全洗脱抗体复合物。与此同时，我们也分别使用Active Motif 和Thermo Fisher Scientific 的IP 试剂盒按照说明书的操作步骤单独进行了实验，起始的裂解液和抗体量与使用Capturem纯化柱相同。所有洗脱产物电泳分离后转移到PVDF膜上，使用PP2A B亚基的抗体（Cell Signaling）进行检测。
注：实验中使用的buffer是Capturem IP & Co-IP kit中优化buffer的早期配方。

实验例3

p53是一个大小为53 kDa的核磷蛋白，具有抑制肿瘤的作用，并且在DNA损伤后参与抑制细胞增殖。已知野生型p53 能与几种病毒癌基因例如SV40 T 抗原 (SV40 T) 形成特异性复合物。使用293T细胞同时表达p53和SV40 T，我们证明了使用Capturem Protein A纯化柱能在基础水平免疫共沉淀p53和SV40 T。将Anti-SV40 T抗体加入到细胞裂解液中，室温下孵育混合物20 min，并不断颠倒混合。使用Capturem IP & Co-IP Kit中的优化buffer进行IP实验，洗脱产物经电泳分离并转移至PVDF膜。然后使用p53和SV40 T的小鼠单抗进行免疫印迹检测，Capturem Protein A 对SV40 T的IP结果显示对SV40 T进行的免疫沉淀实验在洗脱产物中同时检测到了SV40 T (97 kDa) 和p53 (53 kDa)的条带，证实了二者之间较强的相互作用（上图，E-SV40 T-1和E-SV40 T-2）。

实验方法：从293T细胞中免疫共沉淀p53和SV40 T抗原

以同时表达p53 和SV40 T的293T细胞为样本制备细胞裂解液。向100 μg的293T细胞裂解液中加入
1 μg的SV40T抗体 (兔多抗, V-300, SCBT)，室温下孵育20 min，同时不断颠倒混合。负对照组，裂解液在不加SV40 T抗体的情况下孵育，然后使用完整的Capturem IP & Co-IP Kit一式两份进行IP实验。洗脱产物电泳分离后转PVDF膜，先用SV40 T的小鼠单抗(SCBT)进行检测，剥离后再用p53的小鼠单抗进行检测(SCBT)。

■ 应用

· 免疫沉淀
· 免疫共沉淀
· 蛋白质复合物研究
· 抗体工程研究中筛选抗原

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页面更新：2019-12-30 13:09:15

Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit酶试剂盒Takara

发表于2023年6月17日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635741	Capturem^™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini)	20 Minipreps	￥7,005
Clontech	635748	Capturem^™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Maxi)	8 Maxipreps	￥9,640

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■ 产品概述

本制品是基于Capturem新型膜技术的一次性使用离心柱，可在30 min内实现血浆等多种生物体液样品中细胞外囊泡（EVs）的简单快速提取。其基本原理是根据EVs的生化性质，选择与其特异性结合的凝集素（非抗体）固定于Capturem™膜上，进而对EVs进行提取，产物纯度高、污染少。

■ 产品特点

· 适用范围广— 可应用于全血、血浆、血清、唾液、尿液、脑脊液、母乳、细胞培养上清液等多种生物体液样品中的EVs提取
· 快速、重复性好– 30 min内即可从最高850 μl（Mini）或24 ml（Maxi）生物体液样品中快速提取EVs，不同操作者也可获得具有重复性的EVs收量
· 收量高— EVs最高收量可达10¹⁰（Mini）或10¹¹（Maxi），可获得足够的exosomal RNA应用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究
· 纯度高— 提取的EVs经Western Blot检测表达exosome蛋白质，而不表达nonexosomal污染蛋白质，如calnexin和 albumin
· 完整性好– 基于凝集素的提取原理，EVs不易被破坏，TEM下观察呈经典形态
· 简单易用— 试剂盒组分配备齐全，包含一次性的预清洁柱，一次性的离心柱，以及平衡、洗涤和洗脱缓冲液，且经过优化，操作简便

■ 操作流程

Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit

注：1. *过滤步骤使用100-kDa MWCO的过滤装置，过滤时间取决于样品的类型和体积。
2. 本制品最大载样量约为10¹⁰ EVs/column（Mini）或10¹¹ EVs/column（Maxi），多次上样收量也不会超过最大值。

■ 实验例

实验例 1

与超速离心法相比，本制品分离得到的EVs浓度和纯度更高。分别使用本制品和超速离心法从500 μl血浆样品中分离EVs，进行三次重复性实验，使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 检测。每种方法的粒径分布计算以平均值（黑线）和标准误差（红线）显示。结果显示，本制品提取的EVs平均粒径大小为81 nm（D90=110 nm），超速离心法提取的EVs平均粒径大小为135 nm（D90=203 nm）。上图可见，使用本制品提取的EVs具有更窄的粒径分布范围，且稳定性更好。

实验例 2

使用本制品成功地从不同生物体液样品中提取EVs。上图NTA结果显示，本制品可以应用于多种生物体液样品的EVs提取，如母乳、唾液、脑脊液、血清、尿液、条件培养基。每种方法的粒径分布计算以平均值（黑线）和标准误差（红线）显示。

实验例 3

对使用本制品与超速离心法提取的EVs中的目的蛋白质进行Western blot分析。结果显示，与超速离心法相比，本制品提取的EVs包含更多的exosome特异性标记物CD63、CD9和Alix，而non-exosome蛋白质（calnexin和albumin）含量较少。因此，本制品提取的EVs纯度更高、污染蛋白质更少。

实验例 4

与超速离心法相比，使用本制品提取的EVs，可获得更高的RNA收量。使用Capturem EV kit（Mini）从50 μl血浆中提取的EVs可以获得约100 pg/μl的RNA，而使用超速离心法，至少需要300 μl血浆才能获得同样收量的RNA。而使用Capturem EV kit（Maxi）从大量样本中提取的EVs，也可以获得稳定的RNA收量。

实验例 5

使用本制品提取的EVs，可获得足够的RNA用于下游RT-qPCR实验。本实验例是对Capturem分离的EVs进一步提取RNA再进行miRNA筛选。首先使用PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）将RNA反转录为cDNA，然后使用Takara PreAmp Master Mix进行预扩增。应用SmartChip Real Time PCR系统对所得cDNA库进行1,200个miRNA靶标筛选，结果检测到108个miRNA，对表达量前8的miRNA进行了芯片外验证，结果显示miR-548w，miR-496，miR-744-3p，miR-660-3，miR-3167和miR-376A-3p在分离的EVs样品中拷贝数最高，其中很多microRNA已被验证过在血浆来源的EVs中表达量较高。本实验例表明，Capturem分离的EVs包含足够的RNA可用于下游的RT-qPCR实验。

实验例 6

使用本制品提取的EVs，可获得足够的RNA用于下游NGS实验。以本制品提取的EVs中的RNA为样本，使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian进行NGS建库。Bioanalyzer trace表明构建了良好且统一的文库，后续的测序表明，构建得到的NGS文库基因覆盖度良好。

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页面更新：2020-06-01 15:04:35

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标签归档：capturem

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