ミトコンドリア膜電位検出キット JC-1 MitoMP Detection Kit　同仁化学研究所

发表于2023年12月27日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

JC-1 MitoMP Detection Kit

05 細胞染色用色素

JC-1 MitoMP Detection Kit

細胞染色用色素
細胞機能解析
ミトコンドリア関連

ミトコンドリア膜電位検出キット

製品コード

MT09　 JC-1 MitoMP Detection Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥23,800	349-09401

キット内容

1 set	JC-1 Dye Imaging Buffer (10x)	100 nmol x1 11 ml x1

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

技術情報の目次

なぜミトコンドリア膜電位が見られているか
JC-1の化学構造と性質
操作の流れ
初めてでも使いやすい
実験例：脱分極による評価
実験例：アポトーシス誘導時の評価
実験例：ミトコンドリアスーパーオキサイドと膜電位の同時測定
実験例：マイトファジー誘導とミトコンドリア膜電位変化の検出
実験例：ミトコンドリア膜電位、老化、細胞周期との関連性

実験例：ミトコンドリア膜電位、老化、細胞周期との関連性

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、Cell Cycle Assay Solution Blue （製品コード：C549）/ Deep Red（製品コード：C548）でA549 細胞における細胞周期の変化と、Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal（製品コード：SG03）で細胞老化、本製品でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

技術や使用製品に関する補足

細胞周期測定試薬

Cell Cycle Assay Solution Blue
老化細胞検出キット

Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（U2OS, HeLa）	蛍光顕微鏡	T. Namba, "BAP31 regulates mitochondrial function via interaction with Tom40 within ER-mitochondria contact sites ", Sci Adv., 2019, 5, (6), 1386.
2)	細胞（Neuron）	蛍光顕微鏡	I. Kawahata, L. Luc Bousset, R. Melki and K. Fukunaga , "Fatty Acid-Binding Protein 3 is Critical for α-Synuclein Uptake and MPP⁺-Induced Mitochondrial Dysfunction in Cultured Dopaminergic Neurons ", Int J Mol Sci., 2019, 20, 5358.
3)	細胞（3T3L1, C2C12）	プレートリーダー	M. Kurano, K. Tsukamoto, T. Shimizu, H. Kassai, K. Nakao, A. Aiba, M. Hara and Yatomi , "Protection Against Insulin Resistance by Apolipoprotein M/Sphingosine 1-Phosphate ", Diabetes, 2020, DOI: 10.2337/db19-0811.
4)	細胞（ALM)	プレートリーダー	T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O. Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K. Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang, S. K McWeeney and J. W. Tyner , "The TP53 Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in AML Cells.", Cancer Discov, 2019, 9,
5)	細胞（マクロファージ)	蛍光顕微鏡	G. Yang, M. Fan, J. Zhu, C. Ling, L. Wu, X. Zhang, M. Zhang, J. Li, Q. Yao, Z. Gu and X. Cai, "A multifunctional anti-inflammatory drug that can specifically target activated macrophages massively deplete intracellular H₂O₂and produce large amounts CO for a highly efficient treatment of osreoarthritis" , Biomaterials, 2020, doi:10.1016/j.biomaterials.2020.120155.
6)	細胞（ARPE-19)	蛍光顕微鏡	J. H. Quan, F. F. Gao, H. A. Ismail, J. M. Yuk, G. H. Cha, J. Q. Chu and Y. H. Lee, "Silver Nanoparticle-Induced Apoptosis in ARPE-19 Cells Is Inhibited by Toxoplasma gondii Pre-Infection Through Suppression of NOX4-Dependent ROS Generation", Int J Nanomedicine , 2020, 15, 3695–3716.
7)	細胞（A549)	フローサイトメーター	C. N. D’Alessandro-Gabazza, T. Yasuma, T. Kobayashi, M. Toda1, A. M. Abdel-Hamid, H. Fujimoto, O. Hataji, H. Nakahara, A. Takeshita, K. Nishihama, T. Okano, H. Saiki, Y. Okano, A. Tomaru, V. F. D’Alessandro, M. Shiraishi, A. Mizoguchi, R. Ono, J. Ohtsuka, M. Fukumura, T. Nosaka, X. Mi, D. Shukla, K. Kataoka, Y. Kondoh, M. Hirose, T. Arai, Y. Inoue, Y. Yano, R. I. Mackie, I. Cann and E. C. Gabazza, "Inhibition of lung microbiota-derived proapoptotic peptides ameliorates acute exacerbation of pulmonary fibrosis", Nat. Comm., 2022, doi:10.1038/s41467-022-29064-3.

よくある質問

Q 1キットあたりの使用回数の目安は？

目安となる使用回数の目安は、下記を参考にしてください。

装置	容器	回数	液量
フローサイトメーター	－	100回	0.5 ml/回
蛍光顕微鏡マイクロプレートリーダー	35 mm dish	25 枚	2 ml/枚
	8 well チャンバースライド	30 枚	200 µl/well
	96 well マイクロプレート	5 枚	100 µl/well

* 容器毎で使用する液量によって使用回数は変わります。容器と液量を予め確認の上、ご使用ください。

Q JC-1染色後の細胞の洗浄には、HBSSの代わりにPBSを使用できますか？: A

細胞へのダメージを軽減するため、HBSSの使用を推奨しております。HBSSがお手元にない場合は培地での洗浄を推奨します。

Q 血清入り培地を使用してもいいですか？: A

細胞洗浄やWorking Solutionに血清入り培地を使用して頂いて構いません。蛍光観察時はImaging Bufferを推奨しますが、血清入り培地をご使用の場合はフェノールレッド不含培地を推奨します。

Q 染色後の細胞固定化、または細胞固定化後の染色は可能ですか？: A

固定化によりミトコンドリアが脱分極するため、染色後の固定及び固定化後の染色は出来ません。

Q 薬剤処理したサンプルをコントロールと比較したところ、赤と緑の両方の蛍光値が増加(又は減少)しました。結果をどのように解釈すればよいのでしょうか？: A

赤色と緑色の蛍光比を比較してください。
薬剤処理サンプルとコントロールの各々で赤色蛍光値/緑色蛍光値の比を算出してください。
両者を比較して蛍光比が低い程ミトコンドリア膜電位が低下していると考えられます。

(赤/緑の比で評価する理由)
JC-1は膜電位依存的に細胞に蓄積するため、細胞の状態により細胞あたりのJC-1の濃度は異なる場合があります¹⁾²⁾。(コントロールと薬剤処理サンプルでは細胞の状態が異なるため、JC-1の蓄積濃度が異なります。)
また、JC-1はミトコンドリア膜電位が高い状態では凝集し緑から赤色に蛍光がシフトします。この凝集体の量は膜電位の程度に依存する³⁾ことから、赤/緑の比でサンプル間のミトコンドリア膜電位を比較することができます。

＜参考文献＞
1)   Cossarizza, A. et al., Biochem Biophys Res Commun., 1993, 197(1), 40.
2)   Perelman, A. et al., Cell Death and Disease, 2012, 3, e430
3)   Smiley, S. T. et al., Proc. Nail. Acad. Sci., 1991, 88, 3671.

取扱条件

取扱条件
1.安衛法, 2.保存方法：冷蔵

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JC-10 品牌：Chemodex

发表于2023年11月29日由上海金畔生物科技有限公司

品牌：Chemodex
CAS No.：
储存条件：-20°C
纯度：>98% (HPLC)

产品编号 (生产商编号)	等级	规格	运输包装	零售价(RMB)	库存情况	参考值
CDX-T0103-M001	–	1 mg	–	1,320.00	–	–

* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用

* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

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JC-10 品牌：Chemodex

发表于2023年11月28日由上海金畔生物科技有限公司

品牌：Chemodex
CAS No.：
储存条件：-20°C
纯度：>98% (HPLC)

产品编号 (生产商编号)	等级	规格	运输包装	零售价(RMB)	库存情况	参考值
CDX-T0103-M005	–	5 mg	–	3,290.00	–	–

* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用

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BIO-PROBE® JC virus probe JC病毒BioProbe 品牌：Enzo

发表于2023年11月27日由上海金畔生物科技有限公司

品牌：Enzo
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–

产品编号 (生产商编号)	等级	规格	运输包装	零售价(RMB)	库存情况	参考值
ENZ-40847	–	2 µg	–	4,560.00	–	–

* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用

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JC-1 (ultra pure) JC-1（超纯）品牌：Enzo

发表于2023年11月24日由上海金畔生物科技有限公司

品牌：Enzo
CAS No.：47729-63-5
储存条件：-20℃
纯度：≥95% (TLC)

产品编号 (生产商编号)	等级	规格	运输包装	零售价(RMB)	库存情况	参考值
ENZ-52304	–	5 mg	–	3,190.00	–	–

* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用

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解糖系/ミトコンドリア膜電位測定キット Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit　同仁化学研究所

发表于2023年6月6日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

解糖系/ミトコンドリア膜電位測定キット

1つのサンプルで2つの指標(乳酸産生量とミトコンドリア膜電位)を測定できる
誰でも簡単に実験ができるプロトコルを同梱
実験に必要な試薬が全て同梱されたオールインワンのキット

製品コード

G272　 Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥48,000	345-10091

キット内容

50 tests	・Dye Mixture ・Lactate Standard ・LDH Solution 　・Lactate Assay Buffer　　　・Reconstitution Buffer ・JC-1 Dye　　　・Imaging Buffer (10X)	×1 150 µl×1 12 µl×1 5.5 ml×1 550 µl×1 ×1 6 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

検出原理

本キットは、細胞外へ排出される乳酸量をWSTホルマザンを用いた吸光度測定法にて測定し、ミトコンドリア膜電位をJC-1色素を用いた蛍光測定にて検出するキットです。これらの測定対象を同一サンプルから測定することで、代謝経路を評価することが可能です。
また、本キットではマイクロプレートを用いた測定が可能です。

解糖系/ミトコンドリア膜電位測定キット Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit　同仁化学研究所

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

下記表に記載のサンプル数を測定できます。
(Lactate Assay)

	予備実験を行わない場合	予備実験を行う場合
96 well プレート	48 well 分	39 well 分
測定可能なサンプル数 (n=3で行った場合)	16 サンプル	13 サンプル

※試料の乳酸濃度が未知の場合、1 mmol/l Lactate standard solutionの吸光度よりも低くなるように予備実験を行い希釈倍率を決定してください。取扱説明書「測定用サンプルの調製」をご参考ください。
※予備実験を行わない場合または予備実験を行う場合の最大測定可能サンプル数を記載しています。
※Lactate Assayを行う際、培地に血清を含む場合、バックグラウンドコントロールとして、使用した血清入り培地のみの測定試料を準備することをお勧めします。

解糖系/ミトコンドリア膜電位測定キット Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit　同仁化学研究所
Lactate Assayのプレートレイアウト例(n=3)
(左：予備実験なし、右：予備実験あり)

(JC-1 Assay)

	付着細胞				浮遊細胞
培養機器 (JC-1 添加量)	6 well (1 ml/well)	96 well (50 μl/well)	ibidi 8 well plate (100 µl/well)	35 mm dish (1 ml/well)	1.5 ml microtube (0.25 ml/tube)
測定可能サンプル数	3 sample	20 sample (n=3で行う場合)	4 枚分	3 sample	15 sample

※本キットには、96穴マイクロプレート48 well分のJC-1 Assay用試薬が含まれます。

Q 本キットを用いてLactate AssayおよびJC-1 Assayを行うのにかかる時間を教えて下さい。: A

実験の流れ、各アッセイにかかる時間(目安)は下図の通りです。

Q 上清回収後、先にLactate Assayを行ってからJC-1 Assayを行うことは可能ですか。: A

先にLactate Assayを行った場合、刺激の条件によっては測定時間の差が結果に影響を及ぼす可能性があります。必ず、上清回収後は先にJC-1 Assayを行ってください。なお、細胞培養上清は冷凍(-20℃)で1ヶ月間保存可能です。

Q [Lactate Assay]　450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。: A

450 nm以外では、490 nmのフィルターでの使用が可能です。ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。

Q [Lactate Assay]　還元物質を含むサンプルは測定できますか。: A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なlactateの変化が測定できません。培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地＋薬剤のみ」の試薬ブランクを同時に評価し、サンプルの吸光度から試薬ブランクとして差し引いてください。

Q [Lactate Assay]　Working solutionはどのくらい安定ですか。: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温で4時間安定です。

Q [Lactate Assay]　細胞培養上清サンプルは保存できますか。: A

冷凍(-20℃)で1ヶ月間保存可能です。

Q [JC-1 Assay]　血清入り培地を使用してもいいですか。: A

細胞洗浄やJC-1 working solutionに血清入り培地を使用して頂いて構いません。蛍光観察時はImaging Buffer solutionの使用を推奨しますが、血清入り培地をご使用になる場合はフェノールレッド不含培地を推奨します。

Q [JC-1 Assay]　染色後の細胞固定化、または細胞固定化後の染色は可能ですか。: A

固定化によりミトコンドリアが脱分極するため、染色後の固定及び固定化後の染色はできません。

Q [Lactate Assay]　検出されたサンプルの吸光度の値が培地のみ(blank)の吸光度と変わりません。原因と解決策を教えて下さい。: A

原因として、細胞から放出される乳酸量が少ないことが考えられます。まずは播種する細胞数を増やして頂くかインキュベート時間をさらに延ばして下さい。

Q [JC-1 Assay]　赤と緑の両方の蛍光値が増加 (または減少)しました。結果をどのように解釈すればよいのでしょうか。: A

薬剤処理サンプルとコントロールの各々で赤色蛍光値/緑色蛍光値の比を算出して下さい。両者を比較して蛍光比が低い程ミトコンドリア膜電位が低下していると考えられます。

(赤/緑の比で評価する理由)

　JC-1は膜電位依存的に細胞に蓄積するため、細胞の状態により細胞あたりのJC-1の濃度は異なる場合があります^{1), 2)}(コントロールと薬剤処理サンプルでは細胞の状態が異なるため、JC-1の蓄積濃度が異なります)。

また、JC-1はミトコンドリア膜電位が高い状態では凝集し緑から赤色に蛍光がシフトします。この凝集体の量は膜電位の程度に依存する³⁾ことから、赤/緑の比でサンプル間のミトコンドリア膜電位を比較することができます。

〈参考文献〉

1) A. Cossarizza, et al., Biochem Biophys Res Commun., 1993, 197(1), 40.

2) A. Perelman, et al., Cell Death and Disease, 2012, 3, e430.

3) S. T. Smiley, et al., Proc. Nail. Acad. Sci., 1991, 88, 3671.