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TaKaRa Competent Cells BL21酶试剂盒Takara

发表于2024年5月7日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

TaKaRa Competent Cells BL21
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9126	TaKaRa Competent Cell BL21	100 μl x 10	￥347

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■ 制品内容

TaKaRa Competent Cells BL21 10 × 100 μl pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 10 × 1 ml

*SOC Medium:          2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl  10 mM   MgSO4  10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E.coli BL21来源于B株，为lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白质在该体系中具有更高的稳定性。本制品有利于外源蛋白质的稳定表达。 本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白质表达，但不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为BL21宿主不表达T7 RNA聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不是recA基因缺失型菌株。 注意：本制品不可用于电击法转化。   ■ 保存 -80℃。 注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。可使用附带的pUC19 DNA确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。   ■ 质量控制 转入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的选择培养基进行筛选。 转化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA   ■ Genotype E.coli BL21: F–, ompT, hsdSB (rB–mB–), gal, dcm   ■ 注意事项 1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 2. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。否则转化效率会降低。 3. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。 4. 使用TE buffer溶解纯化的质粒DNA。DNA溶液如果盐浓度高，可能会降低转化效率。 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。   ·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g     用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。   ·φb-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。 6. 稀释时，使用SOC培养基。 7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2022-09-23 13:24:48

E. coli HB101 Electro-Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年5月7日由上海金畔生物科技有限公司

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E. coli HB101 Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9021	E. coli HB101 Electro-Cells	50 μl × 10	￥391

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■ 制品内容 E.coli HB101 Electro-Cells 50 μl × 10 pBR322 plasmid (10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:     2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E. coli HB101是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E. coli HB101电转细胞可用于制备DNA文库或重组质粒的亚克隆。此电转细胞不能进行蓝白斑筛选。

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HB101：supE44, △(mcrC-mrr), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pBR322照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

转入10 pg 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >5 x 108 cfu/μg pBR322

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。

3. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

4. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。

5. 使用TE buffer制备DNA样品。DNA样品溶液中高盐浓度可能会降低转化效率。

6. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。     ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。     ·L-plates Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。

7. Electro-Cells一旦解冻，不能再次冻结保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冻结，于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2021-02-08 11:27:50

E.coli HST16CR Competent Cells酶试剂盒Takara

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E.coli HST16CR Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9131	E.coli HST16CR Competent Cells	100 μl×10	￥601

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■ 制品内容 E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl SOC media* 1 ml × 10

*SOC Media:     2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

感受态细胞是具有摄取外源DNA能力的受体菌，可摄取基因重组质粒等，是转化时的重要工具。Takara在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出的E. coli HST16CR Competent Cells。 E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）为基础，获得的ColE1 ori的复制相关基因 pcnB缺失的具有高转化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能够降低pUC系列载体的拷贝数，可有效用于难以克隆的含跨膜结构域蛋白质等、克隆基因对大肠杆菌生长有抑制作用的高拷贝载体克隆。 因为是以E. coli HST08 Premium Competent Cells为基础，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr –mcrBC–hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因组文库构建和常规亚克隆。另外，使用pUC系列载体转化时，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选重组体。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi –1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA – argF ）U169 , Δ ( mrr – hsdRMS – mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ–

■ 保存

-80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

[1] 转化效率 转化质粒载体时，转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 plasmid时，确认含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 取出所需管数的感受态细胞后，搬运时请置于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。增加DNA量转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，需要研讨适当的反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，请42℃加热60秒。

5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。

·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使终体积为1 L，高压灭菌。

6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行： 将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。

7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-12-14 14:13:02

E.coli JM109 Electro-Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年5月6日由上海金畔生物科技有限公司

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E.coli JM109 Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9022	E.coli JM109 Electro-Cells	50 μl × 10	￥1,013

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■ 制品内容 E.coli JM109 Electro-Cells 50 μl × 10 pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:      2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 由于E. coli JM109 Electro-Cells含有F' 质粒，可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞，也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时，重组体可以利用电转化细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性，通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi -1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ (lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZ ΔM15]

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

转入10 pg 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 cfu/μg pUC19

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。

3. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。     ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。

6. 稀释时，使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。

7. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water     Tryptone 0.8 g     Yeast extract 0.5 g     NaCl 0.5 g       用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为0.6%，高压灭菌。 8. 制备感受态细胞。当DNA插入M13噬菌体载体克隆位点时，重组体可通过在YT-soft agar添加X-Gal 和IPTG进行筛选，因为非重组体存在于蓝斑中。 9. YT-plate: Ingredient per liter water     Tryptone 8 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为1.5%，高压灭菌。

10. 当加入X-Gal或IPTG时，按照以下方法操作：

·加入100 mM IPTG，100 μl-300μl IPTG/100 ml agar medium 和 25 μl IPTG /3 ml soft agar。

·加入20 mg/ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）到agar medium中，比例为200 μl-300 μl /100 ml。若使用 soft agar，比例为50 μl/3 ml。

11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2021-03-12 11:49:46

E.coli DH5α Electro-Cells酶试剂盒Takara

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E.coli DH5α Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9027	E.coli DH5α Electro-Cells	50 μl × 10	￥433

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■ 制品内容 E.coli DH5α Electro-Cells 50 μl × 10 pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:      2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E. coli DH5α Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性) ，应用蓝白斑方法可以很容易鉴别重组体菌株。由于菌株无lacl q，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli DH5α：F-, φ80dlacZ Δ M15, Δ ( lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA , supE44 , λ-, thi -1 , gyrA96 , relA1

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

1. 转化效率 转入10 pg 的pUC19，涂于含有A+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 transformants /μg pUC19 2. β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-琼脂平板上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。

3. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth:      Ingredient   per liter water  Tryptone   10 g  Yeast extract   5 g  NaCl   5 g

用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。

·φb-broth:      Ingredient   per liter water  Tryptone   20 g  Yeast extract   5 g  MgSO4·7H2O   5 g

用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。

6. 稀释时，使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。

7. 当使用X-Gal时：

·将20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200～300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中。

8. DH5α可作为M13mp载体的复制。但由于不携带F因子，因而不能形成菌斑。

9. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-04-30 14:30:57

E.coli HST08 Premium Electro-Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年5月5日由上海金畔生物科技有限公司

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E.coli HST08 Premium Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9028	E.coli HST08 Premium Electro-Cells	50 μl × 10	￥636

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■ 制品内容 E.coli HST08 Premium Electro-Cells 50 μl × 10 pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:       2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E. coli HST08 Premium Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA缺失的菌株，这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及BAC文库的构建。即便转化较大的质粒，也可维持较高的转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和构建基因文库时，可与Takara DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。 *：与其他相同基因型的感受态细胞相比较。 对于pUC系列质粒，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选阳性克隆。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ-

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

[1] 转化效率 转入10 pg 的pUC19，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，高纯度样品DNA添加量不要超过10 ng，否则会降低转化效率。

3. 当使用50 μl Electro-cells时，DNA溶液添加量不要超过5 μl，否则会降低转化效率。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，但转化效率会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl/1 L water，用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O/1 L water，用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。

6. 当使用X-Gal时，按照以下操作进行：

·将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar media中。

7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-12-31 12:14:07

Agrobacterium tumefaciens LBA4404 Electro-Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年5月4日由上海金畔生物科技有限公司

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Agrobacterium tumefaciens LBA4404 Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9115	Agrobacterium tumefaciens LBA4404 Electro-Cells	40 μl × 5	￥572

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■ 制品内容 Agrobacterium tumefaciens LBA4404 Electro-Cells 40 μl×5 pRI 900 DNA*1(1 ng/μl) 10 μl×1 SOC Medium*2 1 ml×10     *1: pRI 900 DNA : 去除了pRI 910 DNA (Code No.: 3261) 上多克隆位点的DNA。 *2: SOC Medium  2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl 10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

根癌农杆菌 (Rhizobium radiobactor) 可转化自身Ti质粒的T-DNA (transfer DNA) 进入宿主植物细胞，并将此DNA插入植物染色体DNA。T-DNA上的插入基因表达后，转入到被称为Crown gall的肿瘤细胞。利用这种基因转化机制，发明了用于植物转化的binary vector method。这种体系中，Ti质粒中T-DNA上的致病基因被选择性标记基因和外源目的基因所取代，通过农杆菌介导的基因转移将目的基因引入到植物染色体DNA中。 Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404以及binary vector method首先在荷兰的Leiden University被Dr. P. J. J. Hooykaas发现。Agrobacterium tumefaciens含有pAL4404质粒，其只含有T-DNA vir区域 (vir基因诱导和T-DNA转移)，是一种广泛用于植物细胞转化实验的菌株。 本制品是电转化的感受态细胞。使用A. tumefaciens和binary vector method，可以进行各种植物细胞的感染 (转染) 实验。

■ 保存

-80℃。 注意：-80℃保存。如果保存温度不恒定，转化效率将会降低。可使用附带的pRI 900 DNA 确定细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

根据使用方法，转入1 ng pRI 900 DNA，涂于含有卡那霉素和链霉素的平板上进行筛选。 转化效率 : >5×106 colonies/μg pRI 900 DNA

页面更新：2020-06-19 15:46:04

Competent Cell Preparation Kit酶试剂盒Takara

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Competent Cell Preparation Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9139	Competent Cell Preparation Kit	200 Rxns	￥190

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■ 制品内容 (200 次量)

Solution A 20 ml Solution B 20 ml

■ 制品说明

大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA (Plasmid DNA、Phage DNA等)，处于这种状态的细胞称为感受态细胞 (Competent Cell)。在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。 实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难 (超低温)；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。 Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于大多数常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71–18mutS等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上 (转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。   ■ 保存 4℃。

■ 注意事项

1. 制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷这些玻璃器皿或塑料容器时应尽量洗净。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低感受态细胞的转化效率，因此在洗刷完用于制作感受态细胞的专用玻璃器皿或塑料容器后，建议用去离子水浸泡一晚，然后再充分洗净。 2. 制作感受态细胞时使用的菌种，不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用-70℃保存的菌种，在LB/抗生素平板培养基上分级划线培养后，挑取单菌落。使用这种菌种制作的感受态细胞，能提高转化效率。 3. 培养感受态细胞制备用菌体时，OD600值的测定应随时进行，以使OD600值控制在0.35～0.5之间。如果OD600值超出此范围，可能降低感受态细胞的转化效率。 4. 用于感受态细胞制备的菌体培养停止后要立即处理，不要将培养液过长时间室温放置，在冰中放置时也不要时间过长。 5. 感受态细胞的制备操作过程中，离心后弃上清时要尽量弃尽，否则会降低感受态细胞的转化效率。 6. 使用Solution A、Solution B悬浮沉淀时要用手指轻轻弹动Microtube管壁，禁止剧烈振荡操作。 7. 为了有效确认感受态细胞的转化效率，建议制作一批高纯度的质粒DNA分装低温 (-20℃) 保存，用作阳性对照，以确认每批制作的感受态细胞的转化效率。

页面更新：2020-10-19 13:08:20

T4 DNA Ligase酶试剂盒Takara

发表于2024年5月3日由上海金畔生物科技有限公司

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T4 DNA Ligase
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2011A	T4 DNA Ligase	25,000 U	￥130
Takara	2011B (A × 5)	T4 DNA Ligase	25,000 U × 5	￥585

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■ 制品内容

T4 DNA Ligase (350 U/μl) 25,000 U 10X T4 DNA Ligase Buffer 1 ml

■ 制品说明

本酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需Mg2+和ATP作辅因子，分子量为62,000，最适反应pH为7.6。本酶可以催化粘性末端之间和平滑末端之间的DNA的连接。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli carrying the plasmid that encodes the gene of T4 DNA ligase   ■ 活性定义 在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。 本酶的1 unit相当于在含有6.6 mM MgCl2，10 mM DTT，66 μM ATP和3.3 μM [32P]-Na4P2O7的66 mM Tris-HCl (pH7.6) 中发生ATP-PPi交换反应的0.008 Weiss Unit。   ■ 用途 1. DNA片段和载体DNA的连接。 2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。   ■ 注意事项 连接反应因末端碱基序列的不同而反应速度各异，一般有下列倾向 (由快至慢)： 突出末端：Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I 平滑末端：Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I           EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I 其中连接Hind III 末端的速度约为连接Sal I 末端速度的10～40倍； 而连接Hae III 末端的速度约为连接Sma I 末端速度的5～10倍。

页面更新：2021-08-09 16:36:35

E.coli DNA Ligase酶试剂盒Takara

发表于2024年5月3日由上海金畔生物科技有限公司

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E.coli DNA Ligase
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2161	E.coli DNA Ligase	1,000 U	￥161

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■ 制品内容

Code No.: 2161   E.coli DNA Ligase (60 U/μl) 1,000 Units 10X E.coli DNA Ligase Buffer 100 μl 10X BSA (0.05%)* 100 μl * BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。

■ 制品说明

本酶催化相邻DNA链的5′-P末端和3′-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，与T4 DNA Ligase作用相同。分子量为77,000，最适反应pH为7.5-8.0 (Tris-HCl buffer)。反应需NAD作辅酶。与T4 DNA Ligase可连接粘性末端和平末端相比，本酶只能催化突出末端DNA之间的连接，但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下，也能连接平滑末端的DNA。与T4 DNA Ligase能将DNA的5′-P末端与RNA的3′-OH以及RNA的5′-P末端与DNA的3′-OH连接不同，本酶不能催化DNA与RNA以及RNA之间的连接。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli UT481 carrying the plasmid encoding the ligase   ■ 活性定义 在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λ DNA-Hind III在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为一个活性单位 (U)。   ■ 用途 Okayama-Berg法克隆cDNA，实验操作中酶的用量约为50 units。

■ 使用注意

本酶由大肠杆菌克隆体精制而成，杂质很少，是纯度很高的制品。因此，即便是高浓度制品，大量使用也完全没有问题。

页面更新：2019-03-07 16:23:00

T4 RNA Ligase酶试剂盒Takara

发表于2024年5月2日由上海金畔生物科技有限公司

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T4 RNA Ligase
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2050A	T4 RNA Ligase	1,000 U	￥521
Takara	2050B (A × 5)	T4 RNA Ligase	1,000 U × 5	￥2,343

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■ 制品内容

T4 RNA Ligase (40 U/μl) 1,000 U 10X T4 RNA Ligase Buffer 1 ml 0.1% BSA 1 ml

■ 制品说明

本酶能使寡核苷酸的5’-P末端和3’-OH末端结合，以ATP为辅因子。最小底物为NpNpNOH和pNp。连接效率受供体和受体各自的碱基影响。DNA与RNA之间的连接效率较RNA之间的连接效率低，DNA之间的连接效率最低，常因不能识别双链核苷酸导致连接失败。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli carrying the plasmid encoding T4 RNA ligase gene

■ 活性定义

以Oligo(A)n为底物，标记RNA 3’末端，在5℃、10分钟内使1 pmol [5’-32P]pCp 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

■ 用途

1. 单链RNA及单链DNA的3’-OH末端的标记。以tRNAPhe为底物，50 units的本酶于5℃反应16小时，tRNAPhe的3’-OH标记率高于80%。 2. 单链Oligo RNA及单链Oligo DNA的合成。

■ 使用注意

1. 连接反应的适合反应温度为5-16℃，若超过该温度活性会被抑制。 2. PEG共存的条件下能够促进反应，而反应特异性不变。 3. 为了提高连接反应效率，建议使用酶浓度高而ATP浓度尽量低的反应条件。

页面更新：2019-03-07 16:02:20

Alkaline Phosphatase (Shewanella)酶试剂盒Takara

发表于2024年5月1日由上海金畔生物科技有限公司

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Alkaline Phosphatase (Shewanella)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2720	Alkaline Phosphatase (Shewanella)	300 U	￥381

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■ 制品内容

Alkaline Phosphatase (Shewanella) 300 U

■ 制品说明

Alkaline Phosphatase (Shewanella) (ShAP) 催化磷酸单酯的水解，但不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。通过70℃热处理15分钟，可使本酶不可逆失活。   ■ 起源 Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Shewanella baltica Alkaline Phosphatase gene.   ■ 活性定义 在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基苯磷酸盐 (p-nitrophenyl phosphate) 生成1 μmol的对硝基苯酚 (p-nitrophenol) 所需要的酶量，定义为1个活性单位 (unit)。   ■ 纯度 1、 5 units的本酶和1 μg的λ DNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 2、 5 units的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。   ■ 用途 与Exonuclease I合用，对PCR产物进行测序前处理。 【注意】不建议对用于连接反应的载体进行末端去磷酸化处理，如有此类需求，请根据实际情况选择2660A/B、2120A/B或2250A/B。

页面更新：2022-05-23 10:11:46

Alkaline Phosphatase (Shrimp)酶试剂盒Takara

发表于2024年4月29日由上海金畔生物科技有限公司

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Alkaline Phosphatase (Shrimp)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2660A	Alkaline Phosphatase (Shrimp)	300 U	￥493
Takara	2660B (A × 5)	Alkaline Phosphatase（Shrimp）	300 U × 5	￥2,331

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■ 制品内容

Alkaline Phosphatase (1 U/μl) 300 Units 10X SAP Buffer 1 ml

■ 制品说明

化所有磷酸单酯的水解，但不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。通过65℃，15分钟的热处理，可使酶完全不可逆失活。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Pichia pastoris that has been genetically modified with a gene coding a shrimp alkaline phosphatase.   ■ 活性定义 在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基苯磷酸盐 (p-nitrophenol phosphate) 生成1 μmol的对硝基苯酚 (p-nitrophenol) 所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit) 。   ■ 用途 去除 DNA 片段的 5’-末端的磷酸基团。 【注意】对于平末端和3’突出末端的去磷酸化，建议使用 BAP（细菌碱性磷酸酶）在 55℃～60℃下进行反应。

页面更新：2022-05-23 10:13:06

Alkaline Phosphatase (E.coli C75)酶试剂盒Takara

发表于2024年4月26日由上海金畔生物科技有限公司

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Alkaline Phosphatase (E.coli C75)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2120A	Alkaline Phosphatase (E.coli C75)	50 U	￥437
Takara	2120B(A × 5)	Alkaline Phosphatase (E.coli C75)	50 U × 5	￥2,067

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■ 制品内容

Alkaline Phosphatase (0.5 U/μl) 50 U 10X Alkaline Phosphatase Buffer 1 ml

■ 制品说明

本酶催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯及磷酸三酯的水解。 这种酶也能催化ATP等焦磷酸键的水解。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli C75   ■ 活性定义 在25℃、pH8.0的条件下，1分钟内水解对硝基苯磷酸盐 (p-nitrophenyl phosphate) 生成1 μmol的对硝基苯酚 (p-nitrophenol) 所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。   ■ 用途 1. 在用32P标记5′-末端之前，去除RNA或DNA的5′-末端的磷酸基。 2. 去除载体DNA片段的5′-末端磷酸基，便于T4 DNA Ligase连接反应。   ■ 使用注意 本酶是一种稳定性很高、反应需要Zn2+。在螯合剂存在的条件下，100℃加热可暂时性失活，但由于恢复至室温时酶活性可以恢复，因此必须进行苯酚处理，才能使其完全失活。本酶合适pH在8.0附近，Tris等醇类化合物可使其活性提高。

页面更新：2019-03-07 16:01:38

Alkaline Phosphatase (Calf intestine)酶试剂盒Takara

发表于2024年4月24日由上海金畔生物科技有限公司

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Alkaline Phosphatase (Calf intestine)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2250A	Alkaline Phosphatase (Calf intestine)	1,000 U	￥420
Takara	2250B (A × 5)	Alkaline Phosphatase (Calf intestine)	1,000 U × 5	￥1,893

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■ 制品内容

Alkaline Phosphatase (30 U/μl) 1,000 U 10X Alkaline Phosphatase Buffer 1 ml

■ 制品说明

本酶是由分子量为50,000的单体组成的二聚体，活性形式为含有Zn2+的糖蛋白的金属酶。与大肠杆菌由来的酶同样，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Yeast carrying the plasmid which encodes the gene of calf intestine alkaline phosphatase   ■ 活性定义 在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基苯磷酸盐 (p-nitrophenyl phosphate) 生成1 μmol的对硝基苯酚 (p-nitrophenol) 所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。   ■ 用途 去除载体DNA片段的5′-末端的磷酸基团。   ■ 使用注意 底物浓度高时，本酶最适pH约为10；底物浓度低时，最适pH约为8，但特异性比高底物浓度时低。本酶在保存条件下非常稳定，而在螯合剂存在的条件下，经65℃、30分钟加热处理，99%的活性不可逆失活 (根据反应条件不同有时也有例外) 。建议失活处理时使用苯酚，可使酶完全失活。

页面更新：2019-03-07 16:12:23

T4 Polynucleotide Kinase酶试剂盒Takara

发表于2024年4月20日由上海金畔生物科技有限公司

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T4 Polynucleotide Kinase
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2021S	T4 Polynucleotide Kinase	500 U	￥300
Takara	2021A	T4 Polynucleotide Kinase	1,000 U	￥540
Takara	2021B (A × 5)	T4 Polynucleotide Kinase	1,000 U × 5	￥2,163

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■ 制品内容 (Code No.: 2021S)

T4 Polynucleotide Kinase (10 U/ μl) 500 U 10X T4 Polynucleotide Kinase Buffer 1 ml

■ 制品说明

本酶具有以下活性： 1. 5′-OH末端寡核苷酸的磷酸化及5′-P末端寡核苷酸的去磷酸化。 5′-OH + ATP→5′-P + ADP 2. 磷酸交换反应 5′-P + ATP + ADP←→5′-P + ADP + ATP   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli carrying the plasmid encoding T4 pse T gene   ■ 活性定义 以Micrococcal Nuclease处理的小牛胸腺DNA为底物，在37℃，pH7.6的条件下，30分钟内使1 nmol的[γ-32P]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。   ■ 用途 1. DNA及RNA 5′末端的标记。 2. 合成DNA接头 (Linker) 的5′末端磷酸化。   ■ 特性 1. 分子量：约140,000。 2. 亚基：四个亚基，分子量均为33,000，活性形式为四聚体。 3. 辅因子：反应需要Mg2+和SH试剂如DTT的参与。 4. 抑制剂：7 mM的磷酸、焦磷酸盐或磷酸钠能够抑制酶50%的活性，7 mM的硫酸铵抑制酶75%的活性。

页面更新：2019-03-07 16:04:03

Klenow Fragment酶试剂盒Takara

发表于2024年4月20日由上海金畔生物科技有限公司

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Klenow Fragment
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2140A	Klenow Fragment (Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)	200 U	￥220
Takara	2140B (A × 5)	Klenow Fragment（Large Fragment E. coli DNA Polymerase I）	200 U × 5	￥1,005
Takara	2140AK	Klenow Fragment（Large Fragment E. coli DNA Polymerase I) (2 U/μl）	200 U	￥171
Takara	2140BK (AK × 5)	Klenow Fragment（Large Fragment E. coli DNA Polymerase I) (2 U/μl）	200 U × 5	￥771

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■ 制品内容
Code No.: 2140A Klenow Fragment (5 U/μl) 200 U 10X Klenow Fragment Buffer 1 ml
Code No.: 2140AK
Klenow Fragment (2 U/μl)	200 U
■ 制品说明
本酶在DNA模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物dNTP沿5’→3’方向合成与模板互补的DNA。本酶是从大肠杆菌中纯化得到，其中克隆了2/3的E.coli DNA polymerase I基因片段 (3’端计算) 。因此具有3’→5’外切酶活性但是没有5’→3’外切酶活性。2140AK/BK制品是Kilo-Sequencing Deletion Kit（Code No.: 6030）的组份之一。   ■ 保存 -20℃。   ■ 用途 1. 双脱氧法DNA序列测定 (Sanger法)。 2. 双链DNA 5’突出末端的平滑化。 3. 寡核苷酸定向诱变 (Oligonucleotide directed mutagenesis) 中双链DNA的合成。 4. 使用随机引物进行DNA标记。   ■ 使用注意 1. 本酶有高度稳定性，稀释时不失活，但剧烈搅拌会失活。 2. 由于不含有5’→3’的外切核酸酶活性，因此不表现切口平移活性。适合双链DNA末端以及缺口 (Gap) 的修复。 3. 与T4 DNA Polymerase相比，对模板高级结构的抵抗性能较好。 4. 由于对DNA的亲和性较强，过量使用易发生凝集作用 (Aggregation) 从而抑制反应进行。 5. 若用于5’突出末端的修饰时，补平后有时会多加一个碱基。 6. 与E.coli DNA Polymerase I相同，ddNTPs的掺入不受底物抑制。

页面更新：2021-08-10 14:34:34

DNA Polymerase I (E. coli)酶试剂盒Takara

发表于2024年4月19日由上海金畔生物科技有限公司

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DNA Polymerase I (E. coli)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2130A	DNA Polymerase I (E. coli)	500 U	￥261
Takara	2130B (A × 5)	DNA Polymerase I (E. coli)	500 U × 5	￥1,172

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■ 制品内容

DNA Polymerase I (5 U/μl) 500 U 10X E.coli DNA Polymerase I Buffer 1 ml

■ 制品说明

DNA Polymerase I 在模板和引物 (DNA或RNA) 存在的条件下，以dNTP作底物，沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本酶分子量约为109,000，具有双链特异性的5′→3′外切核酸酶活性以及单链特异性的3′→5′外切核酸酶的活性。本酶是由带有编码E.coli DNA Polymerase I基因的大肠杆菌精制而成的。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I.   ■ 活性定义 以合成的Poly d (A-T) DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10 nmol 的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。   ■ 用途 1. 与DNase I (Code No. 2270A/B) 一起使用，进行切口平移 (Nick translation)。 2. 通过Okayama-Berg法合成cDNA的第二条链 (0.3 μg DNA Polymerase I 约为2.5 units)。   ■ 使用注意 1. 本酶稀释也不失活，但剧烈搅拌会使酶失活。 2. 不含内切酶活性，单独使用不表现切口平移活性。 3. 由于同DNA有较强的亲和性，过量使用易发生凝集作用 (Aggregation)，会使反应不能充分进行。

页面更新：2019-11-14 15:00:17

T4 DNA Polymerase酶试剂盒Takara

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T4 DNA Polymerase
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2040A	T4 DNA Polymerase	100 U	￥261
Takara	2040B (A × 5)	T4 DNA Polymerase	100 U × 5	￥1,172

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■ 制品内容
T4 DNA Polymerase (5 U/μl)	100 U
10X T4 DNA Polymerase Buffer	1 ml
0.1% BSA*	1 ml
* BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。
■ 制品说明
在模板及引物存在的条件下，催化与模板互补的脱氧核苷酸依次选择性地连接在引物的3′-OH末端上的反应。本酶还具有单链DNA特异性的3′→5′外切核酸酶活性，该活性比Klenow Fragment强100～1,000倍。本酶没有5′→3′的外切核酸酶活性。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T4 DNA polymerase gene   ■ 活性定义 以合成的Poly (dA-dT) DNA为摸板/引物，在37℃、pH8.8条件下，30分钟内使10 nmol的dATP和dTTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位 (U)。   ■ 用途 1. 利用较强的3′→5′的外切核酸酶活性，通过置换合成从DNA片段的3’末端进行标记。 2. DNA末端的平滑化。 3. 通过引物延伸法解析mRNA转录的起始点。   ■ 使用注意 1. 本酶的最适pH为8-9，在pH7.5及pH9.7时活性降低50%。 2. 活性的表达需要Mg2+的存在。为了获得较大活性，还需要SH基的还原剂存在。 3. 整个反应体系中的离子强度超过100 mM时活性将被抑制。 4. 本酶易受模板DNA高级结构的影响，T4 gene 32产物可以显著提高聚合酶活性，而3′→5′的外切核酸酶活性则完全被抑制。

页面更新：2019-03-07 16:03:35

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase酶试剂盒Takara

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Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	2230A	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase	300 U	￥261
Takara	2230B (A × 5)	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase	300 U × 5	￥1,172

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■ 制品内容

Cloned Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (14 U/μl) 300 U 5X Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Buffer 1 ml 0.1% × BSA 1 ml

■ 制品说明

本酶催化dNTP聚合于单链或双链DNA的3’-OH末端的反应，该反应不需要模板，但引物必须是至少有3个以上碱基的寡核苷酸。   ■ 保存 -20℃。   ■ 起源 E. coli carrying the plasmid which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase   ■ 活性定义 以DNase处理后的热变性小牛胸腺DNA为起始物，在37℃ 、pH7.2的条件下，1小时内使1 nmol的 [3H]dATP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。   ■ 特性 1. 分子量：60,000。 2. 最适pH：7.2。 3. 辅因子：二价离子Mg2+，Mn2+或Co2+。 4. 底物特异性：核酸类似物 (如5-甲基-dCTP，6-O-甲基-dGTP等) 可作为底物。 三磷酸双脱氧胸腺嘧啶和三磷酸虫草菌素为终止物。

■ 用途

1. 通过Okayama-Berg法给载体或cDNA加上互补同聚尾。 2. 使用dNTP、ddNTP来标记DNA的3’末端。

■ 使用注意

1. 影响反应的因素有：添加的碱基种类 (dATP,dTTP,dCTP,dGTP)，缓冲液中的二价阳离子(Mg2+,Mn2+,Co2+)，DNA末端结构(3’-OH突出末端，平末端，3’-OH凹陷末端)。因此，每个反应都需要摸索最适条件。一般来说，添加dATP和dTTP时，含有Co2+ 的缓冲液是最佳的，而添加dCTP和dGTP时，含有Mn2+ 的缓冲液是最佳的。

2. 对于长度为15-40 bp的核酸链，如果是3’-OH突出末端，dNTPs与DNA的适合摩尔比是20 : 1，如果是3’-OH凹陷末端，dNTPs与DNA的适合摩尔比是100 : 1。

* CoCl2 缓冲液

100 mM Sodium cacodylate（pH7.2） 1 mM CoCl2 0.1 mM DTT

MnCl2 缓冲液

100 mM Sodium cacodylate（pH7.2） 2 mM MnCl2 0.1 mM DTT

页面更新：2021-09-18 11:26:50