基因编辑后突变检测酶试剂盒Takara

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基因编辑后突变检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns ¥5,771
¥4,617
基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测
Clontech 631448 Guide-it Mutation Detection Kit 25 Rxns ¥2,609
¥2,087
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*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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Guide-it突变检测试剂盒可以用于确认由CRISPR/Cas9、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)等工程核酸酶所导入的基因突变。本试剂盒采用简单的PCR方法即可简便快速地检测出基因突变。性能卓越的 Terra PCR Direct Polymerase Mix可直接以细胞为起始进行扩增,无需提取基因组DNA。扩增产物经过变性及退火处理后形成不完全匹配DNA,Guide-it解离酶会剪切错配DNA部分,之后通过琼脂糖凝胶电泳确认剪切产物。
 
■ 特点
· 识别哺乳动物细胞中插入或者缺失突变的简便方法
· 可直接以细胞为起始进行PCR扩增,与同类产品相比较更为快速有效
· 完整试剂盒: 包含Guide-it Resolvase、Terra PCR Direct Polymerase和所有缓冲液
· 规格: 可提供100次和25次反应规格,25次反应规格可用于小规模基因编辑实验
· 可用于CRISPR/Cas9、ZFNs、TALENs下游研究突变序列确认
 
■ 操作流程
基因编辑后突变检测
 
■ 实验例
基因编辑后突变检测
 

图1. 比较Guide-it和Surveyor方法。转染表达Cas9核酸酶的质粒和特异作用于AAVS1位点的sgRNA至293T细胞,转染48 hr 后收集细胞,将其与未经转染的细胞按照不同比例*进行混合,分别进行突变导入检测。采用Terra PCR Direct Polymerase Mix扩增含有AAVS1位点的目的片段并纯化其产物,之后分别采用Guide-it解离酶和Cel1酶(Surveyor assay)进行剪切。采用Guide-it解离酶剪切后条带清新易于识别,而Surveyor assay剪切后则显示明显的弥散,这样使得不容易测定突变效率并且低水平突变导入很难检测得到。*泳道1-6 : 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, 0%(转染细胞的比例)

 
 
■ 产品组份
  100 次(产品编号 631443) 25 次(产品编号 631448)
 Extraction Buffer 1 5 ml × 4    5 ml
 Extraction Buffer 2      2 ml 500 μl
 Guide-it Resolvase   100 μl  25 μl
 Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)   100 μl  25 μl
 2 × Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) 1 ml × 3 750 μl
  PCR-Grade Water 1 ml × 5    1 ml
 
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■ 关联资料
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基因编辑后突变检测
 

页面更新:2021-03-11 09:21:22

突变 S Taq 酶 Taq Mut S

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  • 参考文献

突变 S Taq 酶突变 S Taq 酶                              Taq Mut S

Taq Mut S



原理

 

  


◆优点特色


● Taq Mut S 是 DNA 修复系统的酶,可以识别错配碱基并且与之结合。

Taq Mut S 来源于水生栖热菌,在0℃~70℃ 具有热稳定性,即便在高温也能保持活性并且和 DNA 结合。

Taq Mut S 可以高效的结合1~4碱基的缺失(或者插入),以及 GT、CT 和 AG 的错配碱基对,因此可用于检测上述的突变。

    利用这种特异性结合的活性,可用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析突变,也可以在固相上进行分析。

与常规基于 PCR 进行检测基因突变的方法,生物芯片检测,测序方法等相比,该方法简单,快速。

 

产品中包括 1 mL 10× Taq MutS 缓冲液。 

来源

Thermus aquaticus

分子量(M.W)

89.3 kDa

浓度

1 μg/μL

保存条件

20 mM Tris-HCl(pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50%(v/v) 甘油

酶反应条件

100 mM KCl, 50 mM Tris-HCl(pH 8.5), 20 mM MgCl2, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 2% 甘油, 65℃

◆案例应用

合成的 36 bp DNA 进行电泳。Lane 2~5 与 Lane 6~13 都与 Taq Mut S 发生特异性结合,但是结合的情况有差别。Lane 2~5 是 1~4 碱基缺失,Lane 6~13 是碱基错配。

突变 S Taq 酶                              Taq Mut S

突变 S Taq 酶                              Taq Mut S

6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳, SYBR® Gold 染色。

突变 S Taq 酶                              Taq Mut S

结合测试:20 μL 反应液,65℃ 反应 30 分钟,0.5 μg 的本产品能够结合不少于 50%(36 bp 的合成 DNA 100 ng,该合成 DNA 有1个碱基缺失)

 

结合特异性检测:

3μg本产品和 0.5 μg 质粒 pBRa322 在 37℃ 反应 16 小时,进行琼脂糖电泳(0.8% 琼脂糖S)。

结果显示不能检测 oc-DNA 。

μg本产品和 0.5 μg 质粒 λDNA 在 37℃ 反应 16 小时,进行琼脂糖电泳(0.8% 琼脂糖)。

结果显示不能检测降解的 λDNA 。

μg本产品和 2 μg 底物 RNA 在 37℃ 反应 16 小时,进行琼脂糖电泳(0.8% 琼脂糖)。

结果显示不能检测降解的 RNA 。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
316-04011 Taq Mut S 
突变S Taq酶
50 μg

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒 SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection KitSARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒


本产品是一步法RT-qPCR检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron毒株(B.1.1.529)中N区存在的特征性突变del31-33的试剂盒。del31-33 是指N区第31~33位中E、R 和 S三个氨基酸缺失的突变。Omicron毒株是在南非首次发现的变异株,在刺突蛋白中含有30多个突变。它比传统的变异株具有更高的传染性,因而被世界卫生组织(WHO)列为“关切变异株”(Variant of Concern;VOC)。

本产品针对的是突变位点少的N区突变,并非突变位点多的S区。因此引物探针不会与其他突变位点产生反应、干扰测试,即可特异性、高灵敏度检测Omicron。

经证实,本产品不与Alpha变异株、Beta变异株、Gamma变异株产生反应,只与Omicron毒株产生特异性反应。


SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒【281-37703

◆试剂盒组成

20 Reactions

  RT 酶混合物(20×)

20 μL×1

  一步反应混合物(2×)

200 μL×1

  野生型引物&探针混合物
(Wild Type Primer & Probe Mixture)

10 μL×1

  N del31-33突变型引物&探针混合物
(N del31-33 Mutant Type Primer & Probe Mixture)

10 μL×1

◆特点


● 容易判断

● 使用突变型和传统型的引物/探针套装时,可通过比较Ct值进行判断

● 一步法RT-qPCR法快速检测突变

● 约70 min 即可完成

● 使用独立研发的引物探针进行高灵敏突变检测

● 当与其他突变体检测试剂盒组合使用时,所有变异株均可于同一反应条件下在1块96孔板上进行检测

● N501Y、E484K、L452R、E484Q、del247-253、N del31-33试剂盒的所有PCR反应条件相同,因此可在

● 1块96孔板上进行检测

 

◆检测原理


采用TaqMan® 探针的1-step RT-qPCR。

  ▼使用前
  在病毒RNA量多的情况下,使用传统(非突变)型检测用的Wild Type Primer / Probe,也能在变异株中观察到扩增信号。请务必使用传统

  (非突变)型检测用的Wild Type Primer/Probe 和突变型检测用的Mutant Type  Primer/Probe两种进行检测。比较两种Ct值,若突变型

  测用Mutant Type  Primer/Probe的Ct值较小,则判断该病毒为变异株。

◆实验案例


变异株检测的应用数据


用以下5种新型冠状病毒株的纯化RNA对本试剂盒进行测试:

● Omicron毒株(B.1.1.529):TY38-873P1,由日本国立传染病研究所提供

● alpha毒株(B.1.1.7):QHN001,N501Y突变,由日本国立传染病研究所提供

● Beta毒株(B.1.351):TY8-612,N501Y突变,E484K突变,由日本国立传染病研究所提供

● gamma毒株(P.1):TY7-501,N501Y突变,E484K突变,由日本国立传染病研究所提供

● 传统毒株(VR-1986HK):从ATCC购买的热灭活新型冠状病毒株

样本拷贝数:5000拷贝/孔

循环数:45

 

① Omicron株(B.1.1.529):TY38-873P1


SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

Omicron毒株在N区含有del31-33突变,因此N del31-33 Mutant type Primer / Prob的扩增曲线(红色)比Wild type Primer / Probe的扩增曲线(蓝色)更早起峰。

 

② alpha株(B.1.1.7):QHN001

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

alpha毒株在N区中不含del31-33突变,因此Wild type Primer / Probe(蓝色)的扩增曲线比 N del31-33 Mutant type Primer / Probe(红色)的扩增曲线更早起峰。虽然alpha毒株与Omicron毒株均含有N501Y突变,但经确认本产品不与alpha毒株产生反应。

 

③ Beta株(B.1.351):TY8-612

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

Beta毒株在N区中不含有del31-33突变,因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线(蓝色)比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线(红色)更早起峰。虽然Beta毒株与Omicron毒株均含有N501Y突变,但经确认本产品不与Beta毒株产生反应。

 

④ gamma毒株(P.1):TY7-501

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

gamma毒株在N区中不含del31-33,因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线(蓝色)比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线更早起峰。虽然gamma毒株与Omicron毒株均有N501Y突变,但经确认本产品不与gamma毒株产生反应。

 

⑤ 传统毒株(VR-1986HK):从ATCC购买的热灭活新型冠状病毒株

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

传统毒株在N区中不含del31-33突变,因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线(蓝色)比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线(红色)更早起峰。

 

对照RNA的检测数据


使用本试剂盒测定合成Omicron菌株的对照ssRNA。

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

在不含N del31-33突变的对照ssRNA(Wild Type Control RNA)中,Wild type Primer / Probe的扩增曲线(蓝色)比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线(红色)更早起峰。

在含N del31-33突变的对照ssRNA(N del31-33 Mutant Type Control RNA)中,N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线(红色)比Wild type Primer / Probe的扩增曲线(蓝色)更早起峰。

PCR反应条件


将板置于qPCR仪板,按以下流程设定。

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒                              SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

◆变异株一览表

变异株

N501Y突变

E484K突变

L452R突变

E484Q突变

del247-253突变

N del31-33突变

传统毒株

Alpha毒株
(B.1.1.7)

Beta毒株
(B.1.351)

Gamma毒株
(P.1)

Epsilon毒株(B.1.427/B.1.429)

Kappa毒株(B.1.617.1)

Delta毒株 (B.1.617.2)

Lambda毒株 (C.37)

Omicron毒株(B.1.1.529)

※含E484A突变

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


FAQ


Q1:是否可以判断新型冠状病毒阳性/阴性?

A1:本试剂盒用于检测阳性样品中是否存在基因突变,不能判断为阳性/阴性。请使用SARS-CoV-2 RT-qPCR Detection Kit Ver. 2(产品编号:285-33801)进行阳性/阴性的判断。本试剂盒也可以与 RNA简易提取试剂SARS-CoV-2 Lysis Buffer Ver. 2(产品编号:281-34501) 配合使用。

 


Q2:是否可以使用direct PCR 等RNA样本简易提取法进行检测?

A2:请使用RNA提取/纯化试剂盒纯化的RNA。

● 离心柱类型:ISOSPIN病毒RNA(产品编号:310-08931,Nippon Gene)

● 自动核酸提取仪:QuickGene-Auto 12S / 24S(仓敷纺织,另需QuickGene AutoS RNA Virus Kit,产品编号:633-50801)

 

 

Q3:试剂盒包装【20 Reactions】是指?

A3:【20 Reactions】指可以分开进行20孔的实时PCR。每个样品需要2个孔(如下),即10个样品。

①含有传统菌株Primer / probe的孔

②含有变异毒株Primer / probe的孔

 


Q4:试剂盒中是否包含病毒的阳性对照RNA?

A4:本试剂盒不含阳性对照。

 


Q5:当野生型和突变型的扩增曲线均起峰时,应如何进行判断?

A5:如果病毒量高,无论是变异株样品,还是野生株,都有可能在其引物/探针中观察到扩增信号。然而,在此情况下,变异株的扩增信号上升得更快(Ct值小)。请务必通过变异株和传统菌株用的两种引物和探针进行检测,以确定 Ct 值的差异。详情请参阅说明书中的“判断方法”。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
281-37703 SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒
20 Reactions

突变克隆试剂盒酶试剂盒Takara

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突变克隆试剂盒
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 638909 In-Fusion HD Cloning Plus 10 Rxns ¥3,788 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638910 In-Fusion HD Cloning Plus 50 Rxns ¥15,839 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638911 In-Fusion HD Cloning Plus 100 Rxns ¥27,272 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638912 In-Fusion HD EcoDry Cloning Plus 8 Rxns ¥3,795 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638913 In-Fusion HD EcoDry Cloning Plus 24 Rxns ¥9,573 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638915 In-Fusion HD EcoDry Cloning Plus 96 Rxns ¥19,758 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638916 In-Fusion HD Cloning Plus CE 10 Rxns ¥4,232 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638917 In-Fusion HD Cloning Plus CE 50 Rxns ¥16,630 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638918 In-Fusion HD Cloning Plus CE 100 Rxns ¥26,058 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638920 In-Fusion HD Cloning Plus 96 Rxns ¥26,029 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638956 In-Fusion® Snap Assembly EcoDry Master Mix 96 Rxns ¥12,295 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638955 In-Fusion® Snap Assembly EcoDry Master Mix 32 Rxns ¥5,352 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638954 In-Fusion® Snap Assembly EcoDry Master Mix 8 Rxns ¥1,745 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638947 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix 10 Rxns ¥1,155
¥866
突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638948 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix 50 Rxns ¥5,204
¥3,903
突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒 突变克隆试剂盒
Clontech 638949 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix 250 Rxns ¥20,747
¥15,560
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使用In-Fusion Cloning Kits可以进行PCR方法的DNA定点突变。一个精简的反应流程,就可以完成增加、删除或替换DNA区段,插入点突变,插入限制性位点等实验。
In-Fusion方法通过设计引物将突变(碱基变化、删除、增加)引入。以环形质粒作为模板,通过反向PCR即可生成带有突变区域的线性载体。这个线性载体可以通过In-Fusion再进行环化。试剂盒已经附带了高效感受态细胞。
 
产品特点
· 高效突变:体外定点突变,效率≥90%。
· 多用途:一个体系,可以进行替换、增加或删除最多12个碱基。
· 更少步骤:一个PCR反应即可;无需纯化或PCR产物的体外消化;无需连接。
· 方便性:试剂盒已附带高效感受态细胞。
 
突变克隆试剂盒点击图片查看相关资
 
 
产品详情请点击:突变克隆试剂盒
 
 

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随机突变试剂盒酶试剂盒Takara

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随机突变试剂盒
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 630703 Diversify PCR Random Mutagenesis Kit 30 Rxns ¥9,178 随机突变试剂盒 随机突变试剂盒 随机突变试剂盒
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Code No. 产品名称
630703   Diversify PCR Random Mutagenesis Kit
 
Diversify PCR Random Mutagenesis Kit采用无毒方法可突变长度至多4.0 kb的序列。 该试剂盒应用广泛,可用于所有的突变而不产生突变热点。
 
产品特点
· 可控的随机突变。可用于分析蛋白质功能
· 准确的控制突变率
· 无突变热点
· 获取所有的碱基替换
 
 
产品详情请点击:随机突变试剂盒
 
 

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