日度归档：2024年5月9日

Moesin (E-10) 抗体 （FITC 标记） Moesin (E-10) FITC

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Moesin (E-10) 抗体 （FITC 标记）

Moesin (E-10) FITC

详细描述：
Ezrin, Moesin and Radixin belong to a family of highly homologous Actin-associated proteins that are localized just beneath the plasma membrane. These proteins are believed to be involved in the mediation of interactions between cytoskeletal and membrane

应用范围：WB, IF, IHC(P)； 反应种属：m, r, h； Isotype：mouse monoclonal IgM； 标记：FITC。

货号 产品名称 品牌 购买
货号 名称 单位 购买
sc-13122 FITC Moesin (E-10) 抗体 （FITC 标记） 200 µg/ml 咨询客服

VISTA（小鼠）：COMP（小鼠）（重组）（His标签） VISTA (mouse):COMP (mouse) (rec.) (His)

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VISTA（小鼠）：COMP（小鼠）（重组）（His标签）VISTA（小鼠）：COMP（小鼠）（重组）（His标签） VISTA (mouse):COMP (mouse) (rec.) (His)

VISTA (mouse):COMP (mouse) (rec.) (His)

小鼠VISTA是分子量为55至65 kDa的I型Ig膜蛋白，其胞外结构域与PD-L1同源。VISTA主要在造血组织（脾，胸腺和骨髓）和骨髓细胞中表达，而在CD4+和CD8+ T细胞中表达量较低。VISTA是一种新的免疫检查点抑制剂，可有效抑制T细胞活化。在多种肿瘤模型中，VISTA的过表达抑制了具保护性的抗肿瘤免疫，且对VISTA的阻断则可增强抗肿瘤免疫。APC上的VISTA通过T细胞上尚未鉴定的结合配偶体向T细胞传递负信号。最近据报道，重组VISTA蛋白需要被多聚化为可溶性配体以激活。在体内，并不是VISTA Fc片段，而是VISTA（小鼠）：COMP（小鼠）蛋白（VISTA（小鼠）的胞外域与软骨寡聚基质蛋白（COMP）的五聚合域融合体）在起着免疫抑制激动剂的作用，抑制着CD4+ T细胞的增殖。


产品详情

别名

含有V型免疫球蛋白结构域的T细胞活化抑制剂；血小板受体Gi24；

应激诱导分泌蛋白-1；Sisp-1；含v-set域的免疫调节受体

产品类型

蛋白

来源宿主

HEK293 cells

序列

小鼠VISTA（aa 33-191）的胞外域的C-末端融合了小鼠软骨寡聚基质蛋

白（COMP）（aa 28-72）的结构域和一个His标签。

交叉反应

小鼠

分子量（MW）

~35-40kDa（SDS-PAGE）和>250kDa（尺寸排阻色谱（SEC））

纯度

≥95%（SDS-PAGE）

内毒素含量

<0.01EU/μg纯化蛋白（LAL   test; Lonza）

浓度

重溶后1mg/mL

重溶

用50μL无菌和无内毒素的水重溶。

规格

冻干品，含PBS。

产品其他数据

UniProtKB   – Q9D659 (VISTA_MOUSE)：

https://www.uniprot.org/uniprot/Q9D659

运输

蓝冰

短期储存

+4℃

长期储存

-20℃

储存建议

重溶后，建议分装并储存于-20℃下；

避免反复冻融；

使用含有至少0.1%BSA的PBS进行产品稀释。

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

  1. VISTA.COMP-an engineered checkpoint receptor agonist that potently suppresses T cell-mediated     immune responses: A. Prodeus, et al.; JCI Insight, 2, e94308 (2017)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
AG-40B-0181-C050  VISTA (mouse):COMP (mouse) (rec.) (His)
  VISTA（小鼠）：COMP（小鼠）（重组）（His标签） 		 50 ug

L-苹果酸检测试剂盒

发表于由

L-苹果酸检测试剂盒L-Malic Acid Assay Kit (Manual Format)

产品货号： K-LMALL
产品品名： L- 苹果酸检测试剂盒（大）
英文品名： L-Malic Acid Assay Kit (Large)
规格型号： 116 assays
原理：
反应时间： 3min
检测限： 0.25 mg/L,
适用样品： 饮料和食品以及其他原料
优点：
l    成本低
l    使用期间所有试剂的稳定性 >2 年
l    操作简单
l    包含标准品
REFERENCES:

  1. Mollering, H. (1985). L-Malate. In  Methods of Enzymatic Analysis  (Bergmeyer, H. U., ed.), 3rd ed., Vol. VII, pp. 39-47, VCH Publishers (UK) Ltd., Cambridge, UK.
  2. AOAC Official Methods of Analysis (2002). Method 993.05 “L-Malic acid/total malic acid ratio in apple juice”. 17th ed. Chapter 37, p. 15.
  3. Gorin, N. (1976). Differences in L-malate determined enzymatically or titrimetrically in golden delicious apples.  Zeitschrift fur Lebensmittel-Unterschung und-Forschung,  162, 259-261.
  4. Klopper, W. J., Angelino, S. A. G. F., Tuning, B. & Vermeire, H. A. (1986). Organic acids and glycerol in beer.  J. Inst. Brew.  92, 225-228.
  5. Elkins, E. R. & Freund, W. (1994). Detection of adulteration in apple juice by L-malic/total malic acid ratio: Collaborative Study.  J. AOAC Int . 77, 411-415.
商品说明：
L-Malic Acid (Regular) Assay Kit, for the specific assay of L-malic acid (L-malate) in beverages and food products.
Manual format UV-method for the determination of L-Malic Acid in foodstuffs, beverages and other materials
Principle:
(L-malate dehydrogenase)
(1) L-Malic acid + NAD+ ↔ oxaloacetate + NADH + H+
(glutamate-oxaloacetate transaminase)
(2) Oxaloacetate + L-glutamate → L-aspartate + 2-oxoglutarate
Kit size: (K-LMALR)
58 assays (manual) / 580 (microplate) or
(K-LMALL)
116 assays (manual) / 1160 (microplate)
Method: Spectrophotometric at 340 nm
Reaction time: ~ 3 min
Detection limit: 0.25 mg/L
Application examples:
Wine, beer, fruit juices, soft drinks, candies, fruit and vegetables,
bread, cosmetics, pharmaceuticals and other materials (e.g. biological
cultures, samples, etc.)
Method recognition:
Methods based on this principle have been accepted by AOAC, EEC,
EN, NF, NEN, DIN, GOST, OIV, IFU, AIJN and MEBAK
Advantages

  • PVP incorporated to prevent tannin inhibition
  • Both enzymes supplied as stable suspensions
  • Very competitive price (cost per test)
  • All reagents stable for > 2 years after preparation
  • Very rapid reaction (~ 3 min)
  • Mega-Calc™ software tool is available from our website for hassle-free raw data processing
  • Standard included
  • Extended cofactors stability
  • Suitable for manual and microplate format

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

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AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

AcroleinRED



本试剂能与剧毒的不饱和醛——丙烯醛进行特异性反应，并通过红色荧光使其可视化。它不和其他不饱和醛或脂质代谢物等进行反应，因此可以从活细胞中检测出内源性丙烯醛或由外部刺激而过量产生的丙烯醛，并且可进行相对定量。

※本产品基于理化学研究所开拓研究本部田中生体机能合成化学实验室的研究成果商品化而成。

※ 本产品仅供研究用。请勿用于研究以外的其他用途。

◆丙烯醛是什么？


丙烯醛（Acrolein；2-propenal）是具有最简单结构的α，β不饱和醛。因其化学活性高，近年来作为氧化应激标记备受瞩目。丙烯醛的产生源十分广泛，具体可分为环境因素和生理因素。已知的环境因素有：烹饪食品时可能产生丙烯醛（特别是油炸肉或鱼，烘烤或烧焦时等等），以及饮酒、香烟中的烟雾、排气导致丙烯醛的生成（燃烧有机物）等。另外，在生理因素方面，有报道称丙烯醛在生物体内经常作为代谢副产物被合成，如在脂质过氧化反应，苏氨酸和蛋氨酸的酶依赖性代谢反应，多胺氧化反应以及由于细胞暴露而产生的氧化应激反应。

由于丙烯醛的化学反应活性非常高，它能与生物体内各种亲核基团结合（蛋白质、核酸和脂质等），从而破坏其功能，因此它作为一种具有强毒性的氧化应激标记物开始为人们认知。近年研究表明，丙烯醛的毒性高于最有名的氧化应激标记物，活性氧（Reactive Oxidative species；ROS）。它不仅在基础生物学，在制药、环境科学、食品产业、健康产业等广泛地生命科学领域中也备受瞩目。然而，由于丙烯醛结构简单且反应活性高，导致其检测困难且难以对它进行详细分析。


AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

丙烯醛的结构式


■　传统的丙烯醛检测方式


在传统法中，想要检测丙烯醛十分困难，通常会利用丙烯醛的α，β-不饱和醛结构的化学反应进行检测。以下列举两种具有代表性的方法。


AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

1）检测FDP


丙烯醛能与生物体内蛋白的胺缓慢反应，生成3-甲酰基-3,4-脱氢哌啶（FDP）。通过使用能识别FDP的抗体，间接检测并定量丙烯醛的方法得到广泛应用。然而，有研究人员提出了该方法的缺点：①毕竟FDP只是众多丙烯醛反应物中的一种，凭借抗FDP抗体对丙烯醛的评价并不充分；②由于 FDP的生成十分缓慢，无法在高灵敏度下观察丙烯醛的生成。另外，由于使用抗体，因此不适用于活细胞实验（见上图方法一）。

 


2）利用HPLC检测


通过使用3-氨基丙醇与丙烯醛发生选择性的荧光反应，然后使用HPLC荧光分析对具有荧光性的生成物7-羟基喹啉进行定量。但是由于丙烯醛的高活性和挥发性，无法轻易将其分离，生成物的荧光灵敏度低、通量低，且无法避免细胞破裂，无法检测活细胞的丙烯醛含量（见上图方法二）。

 


◆AcroleinRED的原理


AcroleinRED是利用了理化学研究所田中克典主任研究员等人所发现的苯基叠氮化合物与丙烯醛发生特异性环化反应时所用到的试剂。

 


■　苯基叠氮化合物丙烯醛的特异性反应


苯基叠氮化合物与丙烯醛特异性地且迅速地发生反应，生成环状产物4-甲酰基1,2,3-三唑啉。4-甲酰基1,2,3-三唑啉能与附近的生物分子非特异性结合并形成共价键。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

■　利用AcroleinRED检测丙烯醛的原理


利用AcroleinRED检测丙烯醛的原理可以分为细胞内外两条途径。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

①检测细胞内丙烯醛


AcroleinRED拥有膜通透性，能够穿透细胞膜，在细胞内与丙烯醛反应并形成4-甲酰基1,2,3-三唑啉。



②检测释放到细胞外的丙烯醛


细胞膜脂质过氧化反应所产生的丙烯醛被释放到细胞外。丙烯醛与细胞外的AcroleinRED迅速反应，反应生成物4-甲酰基1,2,3-三唑啉通过胞吞进入到细胞中。

无论是①，②哪条途径的反应生成物4-甲酰基1,2,3-三唑啉，都会随机地与生物分子（蛋白等）反应，最后在细胞内将细胞染色。


※    请注意，本试剂不能用于局部观察。由于丙烯醛与试剂的反应生成物以及附加在生物分子的状态都会通过荧光信号被检测出，因此并不能使丙烯醛局部可视化。

◆特点

●　AcroleinRED是利用了苯基叠氮化合物与丙烯醛特异性且迅速发生反应这一原理的试剂。通过使用TAMRA染料标记从细胞中产生的丙烯醛，使

●　丙烯醛可视化。

●　可使用罗丹明滤光片组件观察（激发/荧光波长：560 nm/585 nm）。

●　不与其他不饱和醛（巴豆醛，反式2-辛烯醛，异丁烯醛）、苯乙烯反应。

●　无需前处理，简单地操作即可检测。

●　与现有丙烯醛定量法相比，灵敏度高。（丙烯醛浓度的检测上限：100 nM）

●　可根据荧光强度相对定量丙烯醛。

◆原著论文

●　A. R. Pradipta, M. Taichi, I. Nakase, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, ACS Sens., 1, 623～632 (2016).

●　Uncatalyzed Click Reaction between Phenyl Azides and Acrolein: 4-Formyl-1,2,3-Triazolines as“Clicked” Markers for Visualizations of Extracellular Acrolein Released from Oxidatively Stressed Cells.

●　T. Tanei, A. R. Pradipta, K. Morimoto, M. Fujii, M. Arata, A. Ito, M. Yoshida, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, J. Ikeda, E. Morii, S. Noguchi, and K. Tanaka, Adv. Sci., 1801479 (2018)

●　Cascade reaction in human live tissue allows clinically applicable diagnosis of breast cancer morphology.

◆应用


●　稳态下对丙烯醛产生量进行相对定量

●　对因外部刺激（药剂处理等）导致丙烯醛产生量变动进行相对定量

 

※    不可用于丙烯醛的局部观察。详情请浏览本文“原理”部分。

 


◆操作方法概要


1.　使用新鲜的培养基制备AcroleinRED溶液（终浓度10~30 μM）。

1.　※ 终浓度可能会因为细胞种类不同而有所差别，建议根据实验进行优化。

2.　去除培养细胞的培养基，用PBS清洗2次。

3.　添加含有AcroleinRED的培养基。

4.　培养30分钟~1小时。

1.　※ 注意：荧光信号会随处理时间的增加而积累。请根据实验选择理想的处理时长。

5.　用PBS清洗细胞3次，更换新的培养基。

6.　可以观察非固定细胞（活细胞）及固定细胞。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

◆应用实例

■　验证苯基叠氮化合物的丙烯醛特异性

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

■　依赖于氧化应激的丙烯醛的产生量增加

在氧化应激模型中，将0~1,000 μM的各浓度的过氧化氢H2O2添加至HUVEC细胞中预孵育2小时后，添加AcroleinRED并在30分钟后进行非固定观察。在未添加H2O2时可观察到稳态下丙烯醛的产生量。另外，可以发现随着H2O2浓度的增加，丙烯醛的生成量也不断增加。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

■　ROS产生促进剂使丙烯醛产生量增加


使用能促进细胞内活性氧（ROS）产生的物质甲萘醌对细胞处理0、10、30、60分钟后，分别使用ROS检测试剂以及AcroleinRED进行共染色。可观察到经甲萘醌处理后，细胞的ROS迅速增加，而丙烯醛则是缓慢增加。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

■　不同细胞种类所产生的丙烯醛产生量比较


使用AcroleinRED对3种正常细胞以及8种人癌细胞株进行丙烯醛产生量的相对比较。结果表明，与正常细胞相比，癌细胞中丙烯醛的产生量明显增加。并且发现每种癌细胞的丙烯醛的产生量之间也有差别。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

■　组织中丙烯醛的可视化


将乳腺癌患者来源乳腺组织（IDC，浸润性导管癌, DCIS，原位导管癌）以及正常乳腺组织（NBG）提取后立刻以非固定状态浸于AcroleinRED（20 μM）/Hochest混合溶液中，静置5分钟后染色丙烯醛和细胞核，清洗组织后使用荧光显微镜观察。

结果表明，AcroleinRED处理过的乳腺癌组织（IDC，DCIS）中可以观察到红色荧光，但正常乳腺癌组织（NBG）却基本无法观察到经过AcroleinRED处理的染色。通过这种方法，可以对非固定状态下的提取组织进行染色。

AcroleinRED 细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


参考文献

1.

A. R. Pradipta, M. Taichi, I. Nakase, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, ACS Sens., 1, 623～632 (2016).

Uncatalyzed Click Reaction between Phenyl Azides and Acrolein: 4-Formyl-1,2,3-Triazolines as “Clicked” Markers for Visualizations of Extracellular Acrolein Released from Oxidatively Stressed Cells.

2.

T. Tanei, A. R. Pradipta, K. Morimoto, M. Fujii, M. Arata, A. Ito, M. Yoshida, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, J. Ikeda, E. Morii, S. Noguchi, and K. Tanaka, Adv. Sci., 1801479 (2018)

Cascade reaction in human live tissue allows clinically applicable diagnosis of breast cancer morphology.

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
FDV-0022 AcroleinRED 0.5 mg -20°C

E. coli MV1184 Competent Cells酶试剂盒Takara

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

E. coli MV1184 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9055 E. coli MV1184 Competent Cells 100 μl × 10 ￥530 E. coli MV1184 Competent Cells E. coli MV1184 Competent Cells E. coli MV1184 Competent Cells
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容E. coli MV1184 Competent Cells
E. coli MV1184 Competent Cells 100 μl × 10
pUC119 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium      2%   tryptone
 0.5%   yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出E.coli MV1184 Competent Cells，当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时，转化效率可达1×107 cfu/μg。
E.coli MV1184宿主具有琥珀突变抑制因子，只允许没有发生琥珀突变的载体进行复制，可以用作琥珀突变DNA的选择宿主。同时本宿主含有F’质粒，也可作为M13 phage载体DNA的宿主菌，制备单链DNA。此外，本宿主在使用pUC系列质粒载体或M13 phage载体进行转化或转染时，具有α-互补性，可以通过在培养基中加入X-Gal 和 IPTG进行蓝白筛选。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli MV1184：ara,△(lac-proAB),rpsL, thi (Φ80lacZ△M15), △(srl-recA) 306::Tn10 (tet r) / F’ [traD36, proAB+, lac Iq, lacZ△M15]
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC119 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
按照“质粒载体转化”的使用方法，使用1 ng 的pUC119转化到100 μl E. coli MV1184 Competent Cells中，在含有氨苄青霉素的LB平板上筛选，转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119
 
 

页面更新：2021-02-09 08:46:32

E.coli HST08 Premium Competent Cells酶试剂盒Takara

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

E.coli HST08 Premium Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9128 E.coli HST08 Premium Competent Cells 100 μl × 10 ￥401 E.coli HST08 Premium Competent Cells E.coli HST08 Premium Competent Cells E.coli HST08 Premium Competent Cells
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无标题文档

 
 
E.coli HST08 Premium Competent Cells → E.coli HST08 Premium Competent Cells → E.coli HST08 Premium Competent Cells → E.coli HST08 Premium Competent Cells → E.coli HST08 Premium Competent Cells
 
E.coli HST08 Premium Competent Cells
E.coli HST08 Premium Competent Cells  
E.coli HST08 Premium Competent Cells
 
 
■ 制品内容E.coli HST08 Premium Competent Cells
E.coli HST08 Premium Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出具有很高转化效率的E. coli HST08 Premium Competent Cells。另外，E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA (这些基因是大肠杆菌切除外源甲基化DNA所必需的基因) 缺失的菌株，这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及亚克隆。当和较大质粒一起使用时，也可维持较高转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和基因文库构建时，可与TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。
*：与其他相同基因型的感受态细胞相比较。
对于pUC系列质粒，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选阳性克隆。
X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ-
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
[1] 转化效率
转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，转化效率可能会降低。
  ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。
  ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 N KOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。
  ·L-plates： 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，使体系终体积为1 L，高压灭菌。
6. 当使用X-Gal 时，按照以下操作进行：
   将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。
7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

页面更新：2020-08-07 16:23:37

Biovision活死细胞双染试剂盒Live-Dead Cell Staining Kit

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详细介绍

Biovision活死细胞双染试剂盒Live-Dead Cell Staining Kit

Product Overview

Kit Summary:
• Detection method- Fluorescent microscopy (Ex/Em 488/518 nm) to detect staines live cells; (Ex/Em 488/615) to detect stained dead cells
• Sample type- Cell culture (adherent and suspension cells)
• Species reactivity- Mammalian
• Applications- Stained live and dead cells can easily be visualized by fluorescence microscopy.

Features & Benefits:
• Simple procedure; takes less than 20 minutes
• Fast and convenient

Kit components:
• Solution A (1 mM Live-Dye)
• Solution B (2.5 mg/ml PI)
• Staining Buffer

Description:
Distinguishing between live and dead cells is very important for investigation of growth control and cell death. The Live-Dead Cell Staining Kit provides the ready-to-use reagents for convenient discrimination between live and dead cells. The kit utilizes Live-Dye™, a cell-permeable green fluorescent dye (Ex/Em = 488/518 nm), to stain live cells. Dead cells can be easily stained by propidium iodide (PI), a cell non-permeable red fluorescent dye (Ex/Em = 488/615). Stained live and dead cells can be visualized by fluorescence microscopy using a band-pass filter (detects FITC and rhodamine). The kit provides sufficient reagents for 100 stainings using 24-well plate.

Storage Conditions:
-20°C

Shipping Conditions:
gel pack

USAGE: For Research Use Only! Not For Use in Humans.

Biovision活死细胞双染试剂盒Live-Dead Cell Staining Kit

 

详细产品信息可和选购

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

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Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂Controllable NOdonor<NO-Rosa5>

在任意范围、时间通过可视光照射释放NO的试剂

Controllable NOdonor<NO-Rosa5>是通过黄绿色可视光（530~590 nm）的照射释放出一氧化氮（Nitric oxide，NO）的Photo-controllable NO donor。利用光毒性低的可视光照射可以在时间空间上控制NO的释放，有利于各种细胞内信号传输相关的NO生理现象研究。


※本产品仅供科研使用。

※本产品基于名古屋市立大学的中川秀彦教授的研究成果商品化而成。

◆Memo


关于NO研究中Photo-controllable NO donor的意义及问题点


虽然一氧化氮是分子量仅有30的气体分子，但是在生物体内作为信号传输物质而发挥作用，因此阐明其生理意义是一项重要的课题。下文阐述了一些与NO研究相关的生理现象。

●　血管舒张（vasodilation）

●　神经传输（neurotransmission）

●　血小板黏附（platelet adhesion）

●　炎症反应（inflammation）

NO的气体分子是通过生物体内的NO合成酶产生，但在生理条件下极其不稳定，半衰期约为几秒左右。因此，NO被认为是在生物体内产生后，仅在非常狭小的范围（<100 μm）内起作用的局部信号传输物质，因此，期待能够阐明NO作为媒介参与的局部信号传输的意义。然而，由于NO是不稳定的气体分子，难以用于实验中，于是NO donor便被用于验证NO生理效果。

NO donor是在水溶液中分解，并缓慢释放NO的化合物群的总称。不同NO释放效率以及半衰期各异的化合物被开发成各种产品。然而，使用以前的NO释放剂，会使实验溶液全部均一地释放出NO，导致很难观察到原来的NO作用于局部的瞬时效果。为了解决该问题，近年来已开发出几种光反应性的NO donor如“Photo-controllable NO donor”，1） 需要UV光的试剂类，或2） 主要使用金属络合物的试剂类，但无论哪种都有难以适用于活细胞实验的缺点（参照表格）。

名古屋市立大学的中川秀彦教授等人克服了至今的问题，成功开发出不含金属络合物，毒性低且能在时间空间上控制NO释放，并通过可视光控制的Photo-controllable NO donor——NO-Rosa5（Controllable NOdonor）。使用本产品，可以在任意时间以及任意局部控制NO释放，作为研究NO的新工具而备受期待。

普通NO donor

Photo-controllable NO donor

UV光控型
CNO-4,BNN5等

金属络合物

Controllable Nodonor
（NO-Rosa5）

NO释放原理

自发性分解

光分解后自发分解

光分解

光分解

光照

——

UV光

可视光、近红外光

可视光

（~300 nm）

（530~590 nm）

时间控制

困难

可以

可以

可以

空间控制

不可以

可以

可以

可以

光毒性

——

毒性极高

毒性低

毒性低

化合物的细胞毒性

与化合物有关

低

高

（金属毒性）

低

◆参考文献

 

1.　

Ieda, et al., Sci. Rep., 9, 1430, (2019) ,"Structure-efficiency relationship of photoinduced electron transfer-triggered nitric oxide releasers."

2.　

Ieda, et al., Chem. Pharm. Bull., 67, 576～579 (2019), "In cellullo and ex vivo availability of yellowish-green-light-controllable NO releaser."

3.　

Okuno, et al., Org. Biomol. Chem., 15, 2791～2796 (2017), "A yellowish-green-light-controllable nitric oxide donor based on N-nitrosoaminophenol applicable for photocontrolled vasodilation."

◆原理

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

本试剂将Rosamine色素骨架用作光吸收天线，在吸收黄绿色光（530~590 nm）时，诱导光致电子转移(PeT: Photoinduced electron Transfer)，释放出NO。

◆特点


●　通过黄绿色光（530~590 nm；最大吸收λmax～560 nm）引发NO释放。

●　非光照射时，NO释放量被抑制在极其微小的程度*1 。

●　推荐使用浓度10 μM，未发现细胞毒性。

●　已验证了在培养细胞系，ex vivo主动脉血管舒张实验中的生物活性。

●　已证实显微镜的543 nm射线（He- Ne射线）以及氙灯可作为光源使用。


*1 请务必注意实验中的环境光线。

 


◆操作方法概要


※以下实验步骤仅供参考。请根据具体实验目的进行探讨。

1.　制备含有Controllable NOdonor的培养基

2.　去除培养基

3.　更换含有Controllable NOdonor的培养基*2

4.　培养30分钟以上

5.　在任意时间、部位进行光照，然后进行各种成像*3 或生化学分析


*2 也可不更换培养基，直接添加Controllable NOdonor。

*3 各种成像中使用荧光物质作为检测系统时，需要注意荧光物质的选择。详见下文中的“实验指导”。

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

实验注意


本产品有可能因实验环境的光线（室内荧光灯或阳光）分解，释放出NO。在制备溶液以及进行实验时尽量保持避光。

 


◆应用实例


 ■　通过NO电极定量NO释放活性

作为in vivo NO释放模型，用黄绿色光（530~590 nm带通滤波器）照射含10 μM Controllable NOdonor、100 mM HEPES（pH7.3）、0.1% DMSO的溶液，通过NO电极定量释放的游离NO浓度。连续300秒照射时，最大可观察到4 μM的NO（左）。照射时间每20秒脉冲一次时，则可观察到阶段性的NO释放。随着试剂消耗，NO的释放量也逐渐减少（右）。


Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

 ■　使用NO检测试剂实现NO释放活性可视化


用绿色荧光NO检测试剂DAF-FM（10 μM）前处理HEK293T细胞30分钟后，用PBS清洗细胞，在添加Controllable NOdonor的条件下培养30分钟。使用NO检测试剂DAF-FM的荧光强度观察氙气光源（带通滤波器 530~590 nm）照射前后细胞内的NO量。由于光照后DAF-FM的荧光强度显著增强，可以看出通过光照促使NO释放。

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂


 ■　通过局部的光照使特定部位释放NO


用荧光NO检测试剂DAF-FM DA（10 μM）前处理HEK293T细胞30分钟后，用PBS清洗细胞，在添加Controllable NOdonor的条件下培养60分钟。使用共聚焦显微镜的543 nm射线光照白圈部分（直径31 μm），通过DAF-FM检测NO的释放。可以确认仅白圈部分释放出NO。使用本试剂，可通过光在时间空间上控制NO的释放。


Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

 ■　ex vivo 血管舒张实验


将分离的大鼠主动脉切片浸于填满Krebs缓冲液的Magnus 试管中，并添加抑制内源性NO产生的NO合成酶抑制剂L-NAME（100 μM）。接着，添加去甲肾上腺素（10 μM）使血管进入收缩状态。即使用绿光（530~590 nm）照射3分钟，也未发现光自身对血管收缩有效果（图中①）。但添加Controllable NOdonor（10 μM）后照射绿光则可观察到明显的血管舒张（图中②④）。停止光照后，再次发现血管收缩（图中③⑤）。虽然sGC（soluble guanylyl cyclase）-cGMP路径参与NO引起的血管舒张，但在该状态下添加sGC抑制剂ODQ（10 μM）的话，绿光照射也能抑制血管扩张（图中⑥）。实验结果可以看出使用Controllable NOdonor通过光照能够控制血管舒张。


Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

 ■　评价细胞毒性


向HEK293T细胞中分别添加10（推荐浓度）、30、100 μM的Controllable NOdonor并培养48小时后，使用WST-8分析评价细胞存活率。30 μM以下的细胞存活率得以维持，但在高浓度的100 μM中发现了细胞毒性。本试剂推荐使用10 μM。

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

◆实验指导


光谱信息


Controllable NOdonor拥有下图所示的吸收和荧光光谱。530~590 nm的光照可以有效地释放出NO。另外，由于含有Rosamine骨架，请注意在500~600 nm的光照下激发，会观察到红色荧光。

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

Controllable NOdonor 在任意范围、时间通过可视光照射释放NO(Nitric oxide)的试剂

荧光染料选择指导


由于Controllable NOdonor在500~600 nm光照下会释放NO，在实验中同时使用荧光物质（荧光色素，荧光检测试剂，荧光蛋白等）时，请务必注意以下几点。建议提前探讨Controllable NOdonor的荧光特性是否会影响目的荧光物质的观察。

 


（1）避免使用红色荧光物质


原因如下，在500~600 nm范围内不推荐使用含有激发波长的红色荧光物质。

1.　通过激发光的照射，诱导Controllable NOdonor的NO释放。

2.　观察到Controllable NOdonor的Rosamine骨架来源的荧光。

 


（2）可同时使用的荧光物质


以下波长范围的荧光物质可以与Controllable NOdonor同时使用。

激发波长<500 nm的荧光物质（蓝色荧光物质或绿色荧光物质等）

激发波长>600 nm的近红外荧光物质

 

※确认NO的释放推荐使用绿色荧光NO检测试剂DAF-FM DA

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
FDV-0032 Controllable NOdonor 0.25 mg

millipore滤膜哪里有？

发表于由
详细介绍

Millipore疏水性PTFE滤膜lswp04700/47mm*5um
Mitex 是一种没有支撑物的疏水性 PTFE 膜。 可用于其它膜不能承受的极端的化学或温度条件下使用（zui高 260 °C）。

说明: Mitex 表面滤膜，PTFE，疏水，5.0 µm，47 mm，白色，光面

 

 

商标名: Mitex

 

 

数量/包装: 100

 

 

滤膜材质: Hydrophobic PTFE

 

 

滤膜商标名: Mitex

 

 

水通量，mL/min x cm2: 51.9

 

 

23 °C 时的泡点: ≥0.05 bar

 

 

zui高操作温度，°C: 260

 

 

滤膜类型: 表面滤膜

 

 

滤膜孔径，µm: 5.0

 

 

可润湿性: 疏水

 

 

滤膜直径，mm: 47

 

 

滤膜代码: LSWP

 

 

滤膜颜色: 白色

 

 

产品名称: Mitex 表面滤膜

 

滤膜表面: 光面

 

 

厚度，µm: 170

 

 

空气流速，L/min x cm2: 9

 

 

孔隙率 %: 60

技术指标

灭菌方法：高温高压灭菌 （121 °C，1 bar）或 EO
细菌内毒素： 0.5 EU/mL
重量溶出物：< 0.5%
 

详细说明
应用 滤膜代码1 孔径
（µm）		 泡点
（bar）2		 厚度
（µm）		 水的流速
（mL/min/cm2）3		 空气流速
（L/min/cm2）4		 使用温度
（°C）		 成孔率
（%）
Fluoropore 滤膜（疏水）
澄清过滤酸、碱及溶剂，空气监测，过滤或气体换气，UV 光谱学 FGLP 0.22 1.0 150 24 5 130 85
FHLP 0.45 0.63 150 60 8 130 85
FALP 1.0 0.5 150 110 16 130 85
FSLW 3.0 1.0 150 286 20 130 85
FHUP 0.45 0.63 50 75 9 130 NA
Mitex 滤膜（疏水）
澄清过滤酸、碱和低温液体，澄清过滤燃料，分析水样，分离 RNA LSW 5 0.05 170 70 9 260 60
LCW 10 0.03 130 220 14 260 60
LCR 滤膜（亲水）
澄清过滤酸、碱、低温液体及稀释蛋白质溶液，澄清过滤燃料，分析水样，分离 RNA FHLC 0.45 NA 140 70 8 130 80
Omnipore 滤膜（亲水）
澄清过滤酸、碱溶液和几乎所有溶剂 JVWP 0.1 23.6 30 100      
JGWP 0.2 13.6 65 50      
JHWP 0.45 7.9 65 15      
JAWP 1.0 3.6 85 5      
JMWP 5 2.1 85 1.5      
JCWP 10 0.7 85 0.5      
1 对应目录编号的前 4 位
2 泡点使用甲醇确定
3 Fluoropore 用甲醇确定；Mitex 和 LCR 用水
4 Mitex 的空气流速是指 100 cm3 的空气穿过 1 in2 面积的膜所需的时间（秒）（Gurley 测试）

 

Moesin (E-10) 抗体 （PE 标记） Moesin (E-10) PE

发表于由

Moesin (E-10) 抗体 （PE 标记）

Moesin (E-10) PE

详细描述：
Ezrin, Moesin and Radixin belong to a family of highly homologous Actin-associated proteins that are localized just beneath the plasma membrane. These proteins are believed to be involved in the mediation of interactions between cytoskeletal and membrane

应用范围：WB, IF, IHC(P)； 反应种属：m, r, h； Isotype：mouse monoclonal IgM； 标记：PE。

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sc-13122 PE Moesin (E-10) 抗体 （PE 标记） 200 µg/ml 咨询客服