Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

简要概述

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法）是美国AAT Bioquest 研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 传统NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短UV波长使得这些方法具有低灵敏度和高干扰。 由于NAD和NADH的吸收较弱，紫外吸收方法需要较大的样品量，如果样品的可用性有限，则使相同的NAD和NADH测量不实用。

这种Amplite 荧光NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NADH。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显著降低了生物样品的干扰。 Amplite 荧光NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（1μM）内检测少至100皮摩尔的NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NADH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟 –  2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度

1.准备NADH储备溶液：
将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。
注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物：
将10mL Amplite NADH测定缓冲液（组分B）加入NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。
注意：这种NADH反应混合物足以用于两个96孔或四个384孔板。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：
3.1将50μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到450μLPBS缓冲液（pH 7.4）中以产生100μM（100pmol / L）NADH标准溶液。
注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的100μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,1,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADH标准品系列稀释液。

3.3如表1和表2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中
注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.1μM至100μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

4.在上清液反应中运行NADH测定：
4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。
4.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（在Ex / Em = 540 / 590nm处最佳）。
注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。
注2：对于基于细胞的NADH测量，建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（cat＃20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。
        注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech）在96孔黑色板中用Amplite NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时，可以检测到低至1μM（100pmol /孔）的NADH，而NAD没有响应。

参考文献

Mycoplasma pneumoniae protects infected epithelial cells from hydrogen peroxide-induced cell detachment.
Authors: Takeshi Yamamoto, Yutaka Kida, Koichi Kuwano
Journal: Cellular microbiology (2019): e13015

Design, synthesis, and ex vivo evaluation of a selective inhibitor for retinaldehyde dehydrogenase enzymes
Authors: Angelica R Harper, Anh T Le, Timothy Mather, Anthony Burgett, William Berry, Jody A Summers
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

相关产品

Amplite NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

简要概述

Amplite NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是美国AAT Bioquest研发的检测NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 该方法具有低灵敏度和高干扰，因为该测定在需要昂贵的石英微孔板的UV范围内进行。

这种Amplite 荧光NADPH检测试剂盒为检测NADPH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶再循环反应中的NADPH。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了来自生物样品的干扰。

Amplite 荧光NADPH检测试剂盒提供灵敏的一步法检测，在100μL检测体积（1μM;图1）中检测少至100皮摩尔的NADPH。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。 该测定试剂盒已用于筛选使用NADP / NADPH作为辅因子的酶活性。 它还被用于在基于细胞的测定中灵敏检测NADPH。 与其他商业试剂盒相比，该试验具有更高的信号/背景比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADPH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADPH反应混合物（50μL）

加入NADPH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟 –  2小时在Ex / Em = 540/590 nm处

监测荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作方法

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADPH反应混合物：

将10mL Amplite™NADPH测定缓冲液（组分B）加入NADPH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：这种NADPH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NADPH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至100μM）：

3.1将50μLNADPH储备液（来自步骤1）加入450μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，得到100μM（100pmol / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL100μMNADPH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到30,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADPH标准品系列稀释液。

3.3如表1和2中所述，将NADPH标准品和含有NADPH的测试样品的系列稀释液加入到实心黑色96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADPH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的NADPH标准品（0.1μM至100μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

4.在上清液反应中运行NADPH测定：

4.1将50μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADPH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意1：平板的内容物也可以转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于基于细胞的NADPH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（cat＃20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去。 NADPH标准曲线如图1所示。

        注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在96孔黑色板中用Amplite 荧光NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。 低至1μM（100pmol /孔）可以在孵育1小时（n = 3）时检测到NADPH，而NADP没有响应。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

相关产品 

ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒

	货号	15265	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1000 Tests	价格	3840
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADPH的试剂盒，黄嘌呤是在大多数人体组织和液体中发现的嘌呤碱。 许多兴奋剂来源于黄嘌呤，包括咖啡因，氨茶碱，IBMX，旁黄嘌呤，己酮可可碱，可可碱和茶碱，它们可以刺激心率，收缩力，高浓度的心律失常。 因此，检测生物样品中的黄嘌呤变化对于疾病诊断和治疗监测是重要的。 Amplite 比色黄嘌呤测定试剂盒为测量黄嘌呤提供了一种快速且超灵敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶存在下氧化成尿酸释放过氧化氢，用吸光度酶标仪在576nm处用Amplite Red进行特异性测定。 使用Amplite 比色黄嘌呤测定试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至1.2μM的黄嘌呤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADPH再生原液（2X）：
通过将全部含量的测定缓冲液II（组分B）和500X葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（组分C）加入测定缓冲液I（组分A）中，制成2X NADPH再生原液。

样品操作及实验分析

将等体积的2X NADPH Regenerate储备溶液添加到所需的测定系统中。 注意：2.5毫升测定缓冲液I（组分A），2.5毫升测定缓冲液II（组分B）和10 µL 500X葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（组分C）足以用于1个板。

参考文献

Specialized Enzymes in Insect Lipid Metabolism
Authors: Marina Ann MacLean
Journal: (2019)

Functional characterization of CYP4G11—a highly conserved enzyme in the western honey bee Apis mellifera
Authors: Bernarda Calla, Marina MacLean, Ling-Hsiu Liao, Inderpreet Dhanjal, Claus Tittiger, Gary J Blomquist, May R Berenbaum
Journal: Insect molecular biology (2018)

exo-Brevicomin biosynthesis in the fat body of the mountain pine beetle, Dendroctonus ponderosae
Authors: Minmin Song, Andrew Gorzalski, Trang T Nguyen, Xibei Liu, Christopher Jeffrey, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Journal of chemical ecology (2014): 181–189

exo-Brevicomin biosynthetic pathway enzymes from the Mountain Pine Beetle, Dendroctonus ponderosae
Authors: Minmin Song, Patrick Delaplain, Trang T Nguyen, Xibei Liu, Leah Wickenberg, Christopher Jeffrey, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Insect biochemistry and molecular biology (2014): 73–80

Functional characterization of myrcene hydroxylases from two geographically distinct Ips pini populations
Authors: Minmin Song, Amy C Kim, Andrew J Gorzalski, Marina MacLean, Sharon Young, Matthew D Ginzel, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Insect biochemistry and molecular biology (2013): 336–343

An insect-specific P450 oxidative decarbonylase for cuticular hydrocarbon biosynthesis
Authors: Yue Qiu, Claus Tittiger, Claude Wicker-Thomas, Gaelle Le Goff, Sharon Young, Eric Wajnberg, Thierry Fricaux, Nathalie Taquet, Gary J Blomquist, René Feyereisen
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2012): 14858–14863

相关产品

ReadiUse 即用型NADP再生试剂盒

	货号	15266	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3192
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

ReadiUse 即用型NADP再生试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADPH的试剂盒，NADP是用于生物合成反应和脱氢反应的电子受体。 NADP用于合成代谢途径，例如脂质合成，胆固醇合成和脂肪酸链延伸。它也是许多异生素代谢反应中必需的辅助因子。在叶绿体中，在光合作用反应的电子链的最后一步中，NADP被铁氧还蛋白-NADP还原酶还原为NADPH。许多氧化还原酶和所有连接酶使用NADP / NADPH作为辅酶。 NADP还可用于测定淀粉酶，肌酸激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，异柠檬酸脱氢酶。 AAT Bioquest的ReadiUse NADP再生试剂盒提供灵活的预包装NADP再生系统，以适应各种实验设计。它使用两种即用型解决方案，通过简单的混合再生NADP。该试剂盒可用于所有需要NADP的系统（例如：12-酮去氧胆酸合成，铁氧还蛋白还原酶系统）。使用该试剂盒可以进行300-500次酶测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiUse 即用型NADP再生试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADPH解决方案（40X）：
将0.5 mL H2O加入一小瓶NADPH（组分D）中，制成40X NADPH溶液。 注意：一小瓶NADPH用于制备10 mL NADP再生溶液。

1.2 NADP再生酶混合物溶液（400X）：
将100 µL H2O加入小瓶NADP再生酶混合物（组分C）中，制成400X NADP再生酶混合物溶液。 避光。

2.工作溶液配制

加入5 mL的NADP再生缓冲液I（组分A），5 mL的NADP再生缓冲液II（组分B），0.5 mL的40X NADPH溶液和50μL的400X NADP再生酶混合物溶液使总体积为10.55 mL 2X NADP再生溶液。 远离光线。 注意：活化的NADP再生溶液不稳定，应在使用前新鲜配制。 10 mL的NADP再生溶液足以用于1个板。

样品操作及实验分析

将等体积的2X NADP再生溶液添加到所需的测定系统中。

参考文献

exo-Brevicomin biosynthesis in the fat body of the mountain pine beetle, Dendroctonus ponderosae
Authors: Minmin Song, Andrew Gorzalski, Trang T Nguyen, Xibei Liu, Christopher Jeffrey, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Journal of chemical ecology (2014): 181–189

exo-Brevicomin biosynthetic pathway enzymes from the Mountain Pine Beetle, Dendroctonus ponderosae
Authors: Minmin Song, Patrick Delaplain, Trang T Nguyen, Xibei Liu, Leah Wickenberg, Christopher Jeffrey, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Insect biochemistry and molecular biology (2014): 73–80

Functional characterization of myrcene hydroxylases from two geographically distinct Ips pini populations
Authors: Minmin Song, Amy C Kim, Andrew J Gorzalski, Marina MacLean, Sharon Young, Matthew D Ginzel, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Insect biochemistry and molecular biology (2013): 336–343

An insect-specific P450 oxidative decarbonylase for cuticular hydrocarbon biosynthesis
Authors: Yue Qiu, Claus Tittiger, Claude Wicker-Thomas, Gaelle Le Goff, Sharon Young, Eric Wajnberg, Thierry Fricaux, Nathalie Taquet, Gary J Blomquist, René Feyereisen
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2012): 14858–14863

相关产品

Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光

简要概述

Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测辅酶A的试剂盒，辅酶A（CoA）是所有形式的细胞生命中的通用和必需的辅因子，在许多生物合成，能量产生和降解途径中充当主要的酰基载体。它在脂肪酸，丙酮酸氧化和柠檬酸循环的合成和氧化中起重要作用。 CoA的测量是研究许多生物系统中的生物过程和事件的基本任务之一。有一些试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的CoA含量。现有的商业套件要么缺乏灵敏度，要么程序繁琐。我们的Amplite 荧光CoA 定量分析试剂盒提供超灵敏荧光测定法，通过检测CoA中的-SH基团来定量CoA含量。我们在该试剂盒中使用的专有荧光CoA Green 染料在与-SH反应后变为强荧光。该测定试剂盒可在100μL测定体积（40nM）中检测少至4皮摩尔的CoA。它可以在方便的96孔或384孔微量滴定板格式下以Ex / Em = 490 / 520nm进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备CoA测定混合物（50μL）

添加CoA标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10分钟 –  1小时

监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分

操作步骤

1.准备CoA标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入CoA标准小瓶（组分C）中以制备1mM（1nmol / L）储备溶液。

注意1：强烈建议使用已用氮气喷射的ddH2O去除氧气，以制备辅酶A原液。

注意2：水溶液不稳定，会迅速降解。 应储存在2-8℃，并在1天内使用。

2.准备100X CoA Green 原液：

将100μLDMSO（组分D）加入到小瓶CoA Green （组分A）中以制备100X储备溶液。

注意：未使用的CoA Green 原液应分成一次性使用的等分试样，保存在-20℃并避光。

3.准备CoA Assay混合物：

将50L 100X CoA Green 储备溶液（来自步骤2）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

4.准备CoA标准品的连续稀释液（0至30μM）：

4.1将30μLCoA标准储备溶液（来自步骤1）加入970L测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol / L）CoA标准品。

注意：稀释的CoA标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

4.2取200μL30μMCoA标准溶液，用Assay缓冲液（组分B）进行1：3连续稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释的CoA标准品。

4.3将CoA标准品和含CoA的测试样品加入到实心黑色96孔微孔板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

5.运行CoA测定：

5.1将50μLCoA反应混合物（来自步骤3.1）添加至CoA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤4.3），以使总CoA测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLCoA反应混合物。

5.2在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

5.3用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

Methods for measuring CoA and CoA derivatives in biological samples
Authors: Yugo Tsuchiya, Uyen Pham, Ivan Gout
Journal: Biochemical Society Transactions (2014): 1107–1111

Amplite NADH检测试剂盒(比色法)

简要概述

Amplite NADH检测试剂盒(比色法)是美国AAT Bioquest研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的最大吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite 比色NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至3μM的NADH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育持续15分钟至2小时

监测460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物：

将1mL NADH探针（组分A）加入4mL NADH测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：5mL NADH反应混合物用于一个96孔。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将100μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到400μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生200μM（100pmol / L）NADH标准溶液。 注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的200μMNADH标准溶液进行1：2连续稀释，得到NADH标准品的100,50,25,12.5,6.25,3.13和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔板中。

注意：根据需要制备细胞或组织样品。

表1.白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂

*注意：将连续稀释的NADH标准品（3.13μM至200μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。

4.在上清液反应中运行NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。（详见附录）。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

图1。 使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices），在96孔白色/透明底板中用Amplite ™比色NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 孵育30分钟（n = 3）可以检测到低至3μM的NADH，在460nm处测量吸光度。

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

相关产品

Amplite NADPH检测试剂盒(比色法)

简要概述

Amplite NADPH检测试剂盒(比色法)是美国AAT Bioquest研发的检测NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色NADPH检测试剂盒为检测NADPH提供了一种便捷的方法。 NADPH探针是一种生色传感器，在NADPH减少时具有460nm的最大吸光度。 NADPH探针的吸收与溶液中NADPH的浓度成正比。 Amplite 比色NADPH检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在100μL检测体积中检测低至3μM的NADPH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADPH反应混合物（50μL）

加入NADPH标准品或测试样品（50μL）

在室温孵育或15分钟至2小时

孵育460 nm处的监测吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作步骤

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADPH反应混合物：

将1mL NADPH探针（组分A）加入4mL NADPH测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：5mL NADPH反应混合物用于一个96孔。 未使用的NADPH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至100μM）：

3.1将100μLNADPH储备溶液（来自步骤1）加入400μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生200μM（100pmol / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的200μMNADPH标准溶液进行1：2连续稀释，得到NADPH标准品的100,50,25,12.5,6.25,3.13和0μM连续稀释液。

如表1和2中所述，将NADPH标准品和含有NADPH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要制备细胞或组织样品。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞（详见附录）。

表1在白色/透明底96孔微孔板中的NADPH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的NADPH标准品（3.13μM至200μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

4.在上清液反应中运行NADPH测定：

4.1将50μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADPH测定体积为100μL/孔

注1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。

注2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞（详见附录）。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去.NADPH标准曲线如图1所示。

图1使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices），在96孔白色/透明底板中用Amplite 比色NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。 孵育30分钟（n = 3）可以检测到低至3μM的NAPDH，在460nm处测量吸光度。

附录：使用组分D（裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：用200mg / mL的裂解缓冲液均质化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌细胞样品：离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟.2500℃离心 转速5分钟，并用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样品：从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液保持在室温下 15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

参考文献

Retinoic acid-related orphan receptor C regulates proliferation, glycolysis, and chemoresistance via the PD-L1/ITGB6/STAT3 signaling axis in bladder cancer
Authors: Ziliang Wang, Dalong Cao, Zihao Qi, Yangyang Pang, Haoran Li, Huyang Xie, Junlong Wu, Yongqiang Huang, Yao Zhu, Yijun Shen
Journal: Cancer research (2019): canres–3842

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

相关产品